Меры по охране животных, используемых в научных и образовательных целях в Научно-исследовательском институте дезинфектологии Роспотребнадзора (стр. 1 )

ФЕДЕРАЛЬНОЕ БЮДЖЕТНОЕ  УЧРЕЖДЕНИЕ  НАУКИ

«НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ДЕЗИНФЕКТОЛОГИИ»

РОСПОТРЕБНАДЗОРА

Меры по охране животных, используемых в научных и образовательных целях в Научно-исследовательском институте дезинфектологии Роспотребнадзора

1. Введение

  Меры по охране животных, используемых в научных и образовательных целях в Научно-исследовательском институте дезинфектологии Роспотребнадзора (далее – Меры) разработаны в соответствии с Директивой 2010/63/EU Европейского парламента и совета европейского союза  от 01.01.01 года по охране животных, используемых в научных целях.

  Цель Мер – гармонизация правил и процедур, касающихся охраны животных, используемых в научных и образовательных целях в Научно-исследовательском институте дезинфектологии Роспотребнадзора с правилами и процедурами, принятыми в государствах ЕС.

Меры распространяются на деятельность Научно-исследовательского института дезинфектологии Роспотребнадзора при реализации проектов, связанных с разработкой, испытанием продукции и товаров, предназначенных для стерилизации, дезинфекции, дезинсекции, дератизации.

При реализации Мер принимается во внимание необходимость руководствоваться основными принципами по охране животных, которыми  являются замещение и сокращение использования животных в процедурах, связанных с реализацией проектов, улучшение качества их разведения, содержания, ухода и  использования, включая эвтаназию.

Исполнителями Мер являются сотрудники лаборатории токсикологии дезинфекционных  средств, лаборатории научных основ дератизации, лаборатории научных основ дезинсекции, вивария.

2.  Общие (основные) положения

При реализации отдельных проектов осуществляется тестирование безопасности химических и биологических средств, предназначенных для проведения дезинфекции, стерилизации, дезинсекции, дератизации,  репеллентных средств, а также эффективности и биологической активности родентицидных средств.

Типовая программа работ по проекту включает в себя процедуры по определению:

острой токсичности (DL50)  при приведении в желудок; острой токсичности (DL50)  при нанесении на кожу; острой токсичности (DL50)  при введении в брюшную полость; ингаляционной опасности в насыщающих концентрациях паров (С20); раздражающего действия на кожу; раздражающего действия на слизистые оболочки глаз; сенсибилизирующего действия на морских свинках; сенсибилизирующего действия на белых мышах;

- кумулятивного действия при повторном введении в желудок;

- кожно-резорбтивного  действия; 

- острой ингаляционной токсичности;

- подострой ингаляционной токсичности;

  - поедаемости родентицидных средств;

- остаточных количеств средства на медицинских изделиях методом in vitro с использованием эритроцитов лабораторных животных.

  С целью сокращения использования животных, процедура по установлению DL50 средства при введении  в желудок в отдельных случаях (срочная или предварительная оценка токсичности, оценка токсичности ряда средств однонаправленного характера действия, наличие минимального количество средства и т. д.) может быть заменена на прогнозирование DL50 средства методом in vitro с использованием спермы быка в качестве клеточного тест-объекта. 

Экспериментальные исследования проводятся на Анализаторе изображений АТ-05. Установлен коэффициент корреляции 0,83 между DL50 вещества при введении в желудок и величиной ингибирующих подвижность сперматозоидов концентраций.

Указанный метод используется также для оценки наличия или отсутствия раздражающих свойств,  общетоксического действия ряда средств: кожных антисептиков,  репеллентов, антимикробных тканей и т. п.

  Также с целью сокращения использования животных, процедура оценки остаточных количеств средства на медицинских изделиях из разных материалов методом in vitro с использованием эритроцитов лабораторных животных, в большинстве случаев заменена на метод in vitro с использованием сперматозоидов быка.

Эвтаназия лабораторных животных (белых мышей, белых крыс, морских свинок, кроликов) проводится ветеринарным врачом методом смещения шейных позвонков для животных массой тела менее 1 кг,  методом сотрясения мозга (удар по голове) для животных массой тела более 1 кг, методом  анестезии с использованием общего эфирного наркоза. 

Переселение животных или возвращение их в подходящую для них среду обитания или систему содержания не осуществляется.

Все виды животных, используемые в вышеперечисленных процедурах, специально разведены для проведения лабораторных исследований по оценке параметров токсикометрии и установления характера биологического действия химических и биологических веществ.

3. Процедуры

Все процедуры проводятся в Научно-исследовательском институте дезинфектологии Роспотребнадзора в рамках конкретного проекта с учетом следующих требований:

а) использования минимального числа животных;

  б)  использования животных с наименьшей способностью испытывать боль, страдание, дистресс или получать повреждения, имеющие длительные последствия для здоровья;

  в) причинения наименьшей боли, страдания, дистресса и повреждений, имеющих длительные последствия для здоровья и наиболее вероятное обеспечение удовлетворительных результатов;

г) приведения  к смерти минимально возможного количества животных;

д) сокращение до возможного минимума продолжительности и интенсивности страданий живот­ного и обеспечение ему, насколько возможно, безболезненную смерть.

Процедуры, проводимые в рамках проекта, выполняются без анастезии.

  По степени тяжести используются процедуры «легкие», «умеренные», «тяжелые» в соответствии с  критериями, установленными в Приложении VIII Директивой 2010/63/EU. Процедуры, которые предпо­лагают причинение сильных болей, страдания и могут продолжаться дли­тельное время в рамах проекта не осуществляются.

       Для процедур выбирают животных, не использовавшихся ранее ни в каких процедурах, а животные, уже использовавшие­ся в одной или нескольких процедурах, используются повторно только в случае, если:

проводимые ранее процедуры классифицируются по степени тяжести как «легкие» или «умеренные»; доказано, что общее состояние здоровья животного и его самочувствие полностью восста­новлены; планируемые процедуры классифицируются по степени тяжести как «легкие» или «умеренные»; проведение процедур согласовано с ветеринарным врачом, который принимает во внимание жизненный опыт животного.

  Процедура завершается после окончания всех возможных наблюдений.

  По завершению процедуры, в случае, если  животное подвергалось процедуре, классифицированной по степени тяжести как «легкая» или «умеренная», оно, по решению ветеринара или научного сотрудника, может быть оставлено в живых для последующего использования в процедуре, классифицированной по степени тяжести как «легкая» или «умеренная», либо подвергнуто эвтаназии.

3.1. Процедура определения острой токсичности (DL50)  при введении в желудок

В качестве подопытных животных используются белые крысы с исходной массой 180 – 200 г, мыши (18 – 22 г). Вещество в желудок вводят принудительно с помощью металлического зонда. Перед введением животные голодают в течение 1-2 часов. В случае выраженного раздражающего эффекта применяют разведение химического вещества. Количество используемых животных от 3 (для хорошо изученных, малотоксичных веществ)  до 30 особей. Продолжительность наблюдения после введения вещества составляет 14 дней.

После окончания наблюдения, выжившие животные подвергаются эвтаназии путем смещения шейных позвонков или методом анестезии с использованием общего эфирного наркоза. 

3.2. Процедура определения острой токсичности (DL50)  при нанесении на кожу

В качестве подопытных животных используются белые крысы с исходной массой 180 – 200 г, мыши (18 – 22 г). Количество животных в группе 3 - 10 особей. Участок аппликации должен составлять 5% общей поверхности кожи животных, что соответствует 2/3 хвоста у крыс и мышей, или участку кожи на спине крыс 4 x 4 см. За 1 - 2 дня до эксперимента тщательно выстригают ножницами или электромашинкой шерсть на спине. На время экспозиции для исключения слизывания вещества с кожи и поступления его через органы дыхания животных фиксируют, помещая в индивидуальные домики. Время экспозиции - 4 часа для крыс, 2 часа для мышей. Время наблюдения после однократной аппликации - две недели. Изучаемые соединения наносят, как правило, в нативном виде. В случае наличия выраженного раздражающего эффекта, применяют разведение химического вещества. В качестве растворителей и разбавителей используют дистиллированную воду, допускается применение растительного и вазелинового масла, этилового спирта и ацетона. Нанесение вещества осуществляется открытым способом при температуре окружающей среды 18 - 24 о C. Для летучих веществ (температура кипения до 160 о C) следует использовать закрытый способ: метод наклейки капсул и часовых стекол.

После окончания наблюдения, выжившие животные подвергаются эвтаназии путем смещения шейных позвонков или методом анестезии с использованием общего эфирного наркоза.

При отсутствии клинических проявлений интоксикации животное, по решению ветеринара или научного сотрудника, может быть оставлено в живых для последующего использования в процедуре, классифицированной по степени тяжести как «легкая» или «умеренная».

3.3. Процедура определения средней смертельной дозы (DL50) при введении в брюшную полость

В качестве подопытных животных используют белых крыс с исходной массой 180–200 г или мышей (18–22 г). Количество используемых животных от 6 до 30 особей.  Вещество вводят в брюшную полость с помощью инъекционной иглы. До введения животные голодают в течение 1-2 часов. В случае выраженного раздражающего эффекта применяют разведение химического вещества. В качестве растворителей и разбавителей используют дистиллированную воду или физиологический раствор. Максимально вводимый объем для мышей составляет 0,5 мл, а для крыс – 1-1,5 мл. Срок наблюдения за животными составляет 2 недели.