действующей интернет-конференции “Бутлеровские чтения”. http:///readings/
УДК 543.544.5.068.7. Поступила в редакцию 15 июня 2012 г.
Определение бисопролола в лекарственных препаратах
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
© ,+ ,
и *
Кафедра общей химии и хроматографии. Самарский государственный университет. Ул. Академика Павлова, 1. г. Самара, 443011. Россия. Тел.: (846) 334-54-47. E-mail: *****@***ru
_______________________________________________
*Ведущий направление; +Поддерживающий переписку
Ключевые слова: бисопролол, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), качественный и количественный анализ.
Аннотация
Разработана методика качественного и количественного анализа бисопролола с использова-нием метода обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Определены опти-мальные хроматографические условия проведения анализа. Методика позволяет осуществлять опреде-ление подлинности препарата «Бисогамма».
Введение
В настоящее время базовым методом анализа качества субстанций и готовых лекарст-венных препаратов в странах с развитой фармацевтической промышленностью (США, Англия, Япония, страны ЕС) является высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) [1].
Разработчики новых лекарств активно включают ВЭЖХ метод в соответствующие разделы фармакопейных статей и технологических регламентов. Однако в обзоре публикаций за последние 10-12 лет по анализу многокомпонентных лекарственных препаратов методом ВЭЖХ [2] нет упоминаний о применении данного метода для анализа готовых лекарственных препаратов, таких как бисопролол, который используется для лечения артериальной гипертензии и ишемической болезни сердца [3].
Рис. 1. Структурная формула бисопролола |
Бисопролол является селективным в-адре-ноблокатором; он избирательно действует на в1-адренергические рецепторы, обладает эффектом так называемой кардиоселективности, снижает частоту и силу сердечных сокращений, замедляет атриовентрикулярную проводимость, незначи-тельно уменьшает тонус гладкой мускулатуры [3]:
Структурная формула бисопролола (1-[4-[[2-(1-метилэтокси)этокси]метил]фенокси]-3-[(1-метилэтил)амино]-2-пропанол) представлена на рис. 1.
Целью настоящей работы являлось разработка ВЭЖХ-методики определения бисопролола в субстанции и готовых лекарственных препаратах.
Экспериментальная часть
Анализы проводили на жидкостном хроматографе Милихром-1, модифицированном системой подачи подвижной фазы с помощью шприцевого насоса. Детектирование осуществляли УФ-спектро-фотометрическим детектором при длине волны 224 нм. Использовали колонку Ultrasep ES 100RP18 (120х4мм), заполненную обращенно-фазовым сорбентом С18 с размером частиц 4 мкм.
В качестве элюентов использовали смесь буферного раствора с рН 2.5 и ацетонитрила различ-ного состава. Скорость потока элюента составляла100 мкл/мин. Объем вводимой пробы – 40 мкл. В работе использовали ацетонитрил для хроматографии ос. ч. фирмы Криохром (Россия).
Исследовали лекарственный препарат, выпускающийся фирмой WORWAG PHARMA GmbH&Co (Германия) под оригинальным названием «Бисогамма», содержащий бисопролол. Используемые для анализа реактивы имели чистоту не ниже «ч. д.а».
Для приготовления всех рабочих растворов и элюента использовали дистиллированную и дегазированную воду с удельным сопротивлением 18 мОм/см. В качестве образца сравнения опреде-ляемого лекарственного препарата использовали фармацевтическую субстанцию, проверенную отде-лом контроля предприятия-изготовителя и соответствующую всем требованиям нормативной доку-ментации (НД).
В качестве буферных растворов использовали фосфатный буфер (растворы фосфата калия дву-замещенного и ортофосфорной кислоты). Для его приготовления 0.136 г фосфата калия двузамещен-ного помещали в колбу 1000 мл, прибавляли 800 мл воды и доводили рН раствора ортофосфорной кислотой до 2±0.1; добавляли воду до объема 1000 мл и перемешивали.
Для приготовления испытуемых растворов готовых лекарственных препаратов таблетки растирали в порошок. Порошок двух таблеток «Бисогамма» растворяли в 20 мл фосфатного буферного раствора с рН 2.5 и охлажденный раствор обрабатывали ультразвуком до полного диспергирования порошка. Объем полученного раствора доводили до 25 мл фосфатным буфером и фильтровали через бумажный фильтр. Раствор использовали свежеприготовленным.
Растворы стандартных образцов (РСО) готовили аналогично растворам исследуемых лекарст-венных препаратов.
Обработку результатов хроматографического эксперимента проводили с применением системы сбора и обработки данных «МультиХром» 1.52v (Ampersand Ltd). Расчет количественного содержания определяемых компонентов находили по формуле:
где Sи и Sст – средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и РСО соответственно; тст, тс и тн – соответственно массы стандарта определяемого вещества в растворе РСО, средняя масса в граммах таблетки и масса растертых таблеток, взятых для приготовления испытуемого раствора соответственно.
Результаты и их обсуждение
В ходе работы исследовано влияние состава подвижной фазы на хроматографические характеристики определения исследуемых соединений. Для этого проводили хроматографи-рование РСО вещества, который содержится в субстанции в виде бисопролола фумарата. На хроматограмме получили 2 пика, соответствующих фумаровой кислоте и бисопрололу (табл. 1).
Как видно из таблицы, с увеличением объемного содержания ацетонитрила в элюенте уменьшается время выхода исследуемых веществ, но разделяющая способность системы уменьшается.
Наименьшей эффективностью разделения обладает подвижная фаза, в которой концент-рация ацетонитрила равна 50%, в этом случае фумаровая кислота и бисопролол не разделяя-ются.
Табл.1. Времена удерживания tR бисопролола и фумаровой
кислоты при использовании различных подвижных фаз
Подвижная фаза | tR, мин | |
фосфатный буфер/ ацетонитрил (об. %) | Бисопролол | Фумаровая кислота |
90/10 | - | 3.522 |
80/20 | 11.980 | 3.160 |
75/25 | 6.972 | 3.077 |
73/27 | 4.262 | 2.366 |
50/50 | 3.050 | 2.670 |
30/70 | 2.860 | 2.460 |
Оптимальные соотношения смеси буферного раствора и ацетонитрила для исследуе-мых веществ составили – 75:25 по объему, поэтому количественный хроматографический анализ РСО бисопролола и препарата «Бисогамма» проводили с использованием этой под-вижной фазы. По формуле определили количественное содержание бисопролола в препарате «Бисогамма». Методом внутренней нормализации находили общее содержание фумаровой кислоты в таблетках.
Рис. 2. Хроматограмма образца лекарственного препарата «Бисогамма». Аналитическая
длина волны 224 нм. Состав подвижной фазы - фосфатный буфер/ацетонитрил 75/25 об. %.
Пики по времени удерживания: 1 – фумаровая кислота, 2 – бисопролол.
Табл. 2. Результаты хроматографического
Хроматограмма образца препарата «Бисо-гамма» приведена на рис. 2. В табл. 2 представлены значения величин, характеризующих эффективность хроматогра-фического разделения для образца лекарствен-ного препарата «Бисогамма». Результаты количественного анализа ле-карственного препарата представлены в табл. 3. Табл. 3. Результаты количественного анализа лекарственного препарата Компонент | Норма по нормативным документам, мг | Среднее арифметическое значение Хср, мг | Среднее квадратичное отклонение S, мг | Абсолютная погрешность ДХ, мг | |||||||||||
Бисопролол | 5.0±0.5 | 4.63 | 0.01728 | 0.053 |
Выводы
Предложена методика качественного и количественного анализа бисопролола с исполь-зованием метода обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Пока-зано, что содержание действующих веществ в исследуемых лекарственных препаратах соот-ветствует требованиям нормативных документов по показателю «Количественное опреде-ление».
Предложенную методику можно использовать для судебно-химического и химико-токсикологического исследования, а также для определения подлинности препарата при фармацевтическом контроле.
Литература
, , Хазанов . 2002. №4. С.71-74. , , Иванов аналитической химии. 2008. Т.63. №6. С.566-580. , Беленков фармакотерапия сердечно-сосудистых заболеваний: Рук-во для практ. врачей. М.: Литтерра. 2005. 972с.