Публикация доступна для обсуждения в рамках функционирования постоянно
действующей интернет-конференции “Бутлеровские чтения”. http:///readings/
УДК 543.544.5.068.7. Поступила в редакцию 15 июня 2012 г.
Определение амлодипина в субстанциях и готовых
лекарственных препаратах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
© ,+ ,
,
и Буланова Анджела Владимировна*
Кафедра общей химии и хроматографии. Самарский государственный университет. Ул. Академика Павлова, 1. г. Самара, 443011. Россия. Тел.: (846) 334-54-47. E-mail: *****@***ru
_______________________________________________
*Ведущий направление; +Поддерживающий переписку
Ключевые слова: амлодипин, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), качественный и количественный анализ.
Аннотация
Разработана методика качественного и количественного анализа амлодипина с использованием метода обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Определены оптималь-ные хроматографические условия проведения анализа. Методика позволяет осуществлять определение подлинности препарата «Амлодипин».
Введение
Одной их основных практических задач современной фармакологии и фармации явля-ется создание высокоэффективных лекарственных препаратов, поэтому так важна проблема контроля, связанная с точной оценкой качественного и количественного состава препарата.
В настоящее время большинство фармацевтических фирм для контроля качества своей продукции предпочитают использовать высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), так как она идеально подходит для проверки чистоты и качества лекарственных препаратов, большинство которых являются термически неустойчивыми или обладают низкой летучестью, что затрудняет использование газожидкостной хроматографии [1]. ВЭЖХ включена в отечественную фармакопею [2] и ряд зарубежных фармакопей [3, 4].
Однако в литературе практически нет упоминаний о применении метода ВЭЖХ для анализа лекарственных препаратов, используемых для лечения таких часто встречающихся заболеваний сердечно-сосудистой системы, как артериальная гипертензия и ишемическая болезнь сердца.
К лекарственным препаратам, используемым для лечения таких заболеваний, относится амлодипин [5].
Рис. 1. Структурная формула амлопидина |
Амлодипин – лекарственный препарат, отно-сящийся к группе веществ, оказывающих антиан-гинальное, антигипертензивное действие. При сте-нокардии уменьшает выраженность ишемии мио-карда, снижает общее периферические сосудистое сопротивление, уменьшает преднагрузку на сердце, снижает потребность миокарда в кислороде[5].
Структурная формула амлодипина (2-[(2-амино-этокси)метил]-4-(2-хлорфенил)-1,4-дигидро-6-метил-3,5-пиридин дикарбоновой кислоты 3-этил 5-метило-вый эфир в виде безилата и малеата) представлена на рис. 1.
Целью настоящей работы являлось разработка ВЭЖХ-методики определения амлоди-пина в субстанциях и готовых лекарственных препаратах.
Экспериментальная часть
Анализы проводили на жидкостном хроматографе Милихром-1, модифицированном системой подачи подвижной фазы с помощью шприцевого насоса. Детектирование осуществляли УФ-спект-рофотометрическим детектором при длине волны 236 нм. Использовали колонку Ultrasep ES 100RP18 (120х4мм), заполненную обращенно-фазовым сорбентом С18 с размером частиц 4 мкм. В качестве элюентов использовали смесь буферного раствора с рН 2.5 и ацетонитрила различного состава. Ско-рость потока элюента составляла 100 мкл/мин.
Объем вводимой пробы – 40 мкл. В работе использовали ацетонитрил для хроматографии ос. ч. фирмы Криохром (Россия). Исследовали амлопидин, содержащийся в лекарственных препаратах, выпускающихся фирмами «Канонфарм» и «Реплекфарм». Используемые для анализа реактивы имели чистоту не ниже «ч. д.а». Для приготовления всех рабочих растворов и элюента использовали дистил-лированную и дегазированную воду с удельным сопротивлением 18 мОм/см. В качестве образца сравнения определяемого лекарственного препарата использовали фармацевтическую субстанцию, проверенную отделом контроля предприятия-изготовителя и соответствующую всем требованиям нормативной документации (НД).
В качестве буферных растворов использовали фосфатный буфер (растворы фосфата калия двузамещенного и ортофосфорной кислоты). Для его приготовления 0.136 г фосфата калия двузаме-щенного помещали в колбу 1000 мл, прибавляли 800 мл воды и доводили рН раствора ортофосфорной кислотой до 2±0.1 (потенциометрическим методом). Объем раствора доводили водой до метки и перемешивали.
Для приготовления испытуемых растворов готовых лекарственных препаратов таблетки растирали в порошок. Порошок «Амлодипина» массой 0.4 г растворяли в 60 мл дистиллированной воды и раствор обрабатывали ультразвуком до полного диспергирования порошка. Объем полу-ченного раствора доводили до 100 мл дистиллированной воды, перемешивали и фильтровали через бумажный фильтр. Раствор использовали свежеприготовленным.
Растворы стандартных образцов (РСО) готовили аналогично растворам исследуемых лекарст-венных препаратов.
Обработку результатов хроматографического эксперимента проводили с применением системы сбора и обработки данных «МультиХром» 1.52v (Ampersand Ltd). Расчет количественного содержания определяемых компонентов находили по формуле:
Sи и Sст – средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и РСО соответственно; тст, тс и тн – соответственно массы стандарта определяемого вещества в растворе РСО, средняя масса в граммах таблетки и масса растертых таблеток, взятых для приготовления испытуемого раствора соответственно.
Результаты и их обсуждение
В ходе работы исследовано влияние состава подвижной фазы на хроматографические характеристики удерживания исследуемых соединений.
Для этого проводили хроматографирование растворов стандартного образца вещества – амлодипина (табл. 1).
Как видно из таблицы, состав подвижной фазы сильно влияет на времена удерживания анализируемого соединения и в целом на эффективность хроматографирующей системы. С увеличением объемного содержания ацетонитрила в элюенте уменьшается время выхода амлодипина, но разделяющая способность системы улучшается. Использование в качестве элюента смеси вода – ацетонитрил ухудшает разделение вследствие диссоциации молекул амлодипина и на хроматограмме фиксируются 2 пика с практически одинаковой интен-сивностью.
Табл. 1. Времена удерживания амлодипина, содержащихся в РСО, при использовании различных подвижных фаз |
Оптимальные соотношения смеси буферного раствора и аце-тонитрила для исследуемых веществ составили – 68:32 по объему.
Количественный хроматогра-фический анализ РСО амлопидина и препаратов «Амлодипина» про-водили с использованием элюента: фосфатный буфер/ацетонитрил-68 32 (об. %) По формуле определили количественное содержание амлодипина в препарате «Амлодипина». Методом внутренней нормализации находили общее содержание примеси в таблетках.
Рис. 2. Хроматограмма образца лекарственного препарата «Амлодипин» фирмы «Канонфарм». Аналитическая длина волны 236 нм. Состав подвижной фазы – фосфатный буфер/ацетонитрил
68/32 об.%. Пики по времени удерживания: 1 – примесь, 2 – амлодипин.
Рис. 3. Хроматограмма образца лекарственного препарата «Амлодипин» фирмы «Реплекфарм». Аналитическая длина волны 236 нм. Состав подвижной фазы – фосфатный буфер/ацетонитрил
68/32 об.%. Пики по времени удерживания: 1 – примесь, 2 – амлодипин.
Хроматограммы образцов препарата «Амлодипин» производителей «Канонфарм» и «Реп-лекфарм» представлены на рис. 2-3.
В табл. 2 представлены значения величин, характеризующих эффективность хроматогра-фического разделения для образцов лекарственного препарата «Амлодипин».
Табл. 2. Результаты хроматографического анализа образца лекарственных препаратов
Компонент | Эффективность колонки* N | Степень асимметрии б |
Амлодипин (Канонфарм) | 1751 | 6.62 |
Амлодипин (Реплекфарм) | 3335 | 5.45 |
* – среднее из 5 независимых определений.
Результаты количественного анализа лекарственных препаратов представлены в табл. 3.
Табл. 3. Результаты количественного анализа лекарственного препарата
Компонент | Норма по нормативным документам, мг | Среднее арифметическое значение Хср, мг | Среднее квадратичное отклонение S, мг | Абсолютная погрешность ДХ, мг |
Амлодипин (Канонфарм) | 5.0±0.5 | 5.539 | 0.04544 | 0.059 |
Амлодипин (Реплекфарм) | 5.437 | 0.10428 | 0.129 |
Выводы
Предложена методика качественного и количественного анализа амлопидина с исполь-зованием метода обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Пока-зано, что содержание действующих веществ в исследуемых лекарственных препаратах соот-ветствует требованиям нормативных документов по показателю «Количественное опреде-ление».
Предложенную методику можно использовать для судебно-химического и химико-ток-сикологического исследования, а также для определения подлинности препарата при фарма-цевтическом контроле.
Благодарности
Работа выполнена в рамках государственного задания по гранту №3.3209.2011.
Литература
, , Иванов аналитической химии. 2008. Т.63. №6. С.566-580. Государственная Фармакопея Российской Федерации. 12 изд., ч. 1. М.: Изд-во «Научный центр экспертизы средств медицинского применения». 2008. 704с. British Pharmacopeia. CD 1998 v. 2.0, System Simulation Ltd. 1998. The United States Pharmacopeia. 23-rd Ed., Rockville. 1995. , Беленков фармакотерапия сердечно-сосудистых заболеваний: Рук-во для практ. врачей. М.: Литтерра. 2005. 972с.