Материалы и методы исследования.
Клинический метод. В соответствии с поставленной целью и задачами были обследованы 260 больных алкоголизмом мужского пола, находившихся на стационарном лечении в клинике ННЦ наркологии Росздрава. Все пациенты имели диагноз алкоголизма 2 или 3 стадий, средний возраст больных составлял 42±12,5 года. Пациенты с верифицированной психопатологией (шизофрения, депрессивные состояния и др.) исключались из исследования. В контрольную группу вошли 93 здоровых мужчины, средний возраст 41,5 ± 11,3 года, не употребляющие алкоголь систематически.
Данные об анамнезе заболевания содержали следующую информацию - возраст начала систематического употребления алкоголя, возраст формирования алкогольного абстинентного синдрома (ААС), осложнения заболевания (алкогольные психозы, алкогольная эпилепсия), длительность ремиссий. Семейный анамнез включал в себя данные о наличии или отсутствии алкоголизма и других зависимостей от ПАВ у родственников 1 и 2 степеней родства пробандов. Эти данные были получены со слов больного и доступных для интервью родственников. Также проводилась подробная клиническая оценка течения алкоголизма у каждого больного, участвующего в исследовании - стадия болезни, толерантность к алкоголю, прогредиентность заболевания, особенности ААС, развившиеся осложнения. Анамнестические и клинические данные об особенностях заболевания, наследственной отягощенности, сопутствующей патологии вошли в специально разработанную в ННЦ наркологии анкету. Клиническое обследование больных и заполнение анкеты проводилось врачами психиатрами-наркологами ННЦ наркологии Росздрава.
Молекулярно-генетические методы. Для проведения генотипирования по 2 функциональным однонуклеотидным полиморфизмам в гене ДБГ - полиморфизму1021 С/Т и полиморфизму 444 G/A был использован высокопроизводительный метод анализа путем минисеквенирования с MALDI-TOF (matrix-assisted laser desorption/ionisation) масс-спектрометрией. Генотипирование гена КОМТ по Val 158/108 Met однонуклеотидному полиморфизму было проведено методом анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ).
Биохимический метод. Определение активности дофамин-бета-гидроксилазы в плазме крови больных алкоголизмом и здоровых испытуемых проводили спектрофотометрическим методом по Nagatsu и Udenfriend (1979).
Статистический методы. Результаты клинического, биохимического и молекулярно-генетического исследований больных алкоголизмом и здоровых испытуемых контрольной группы были обработаны согласно правилам и критериям, применяемым в медицинской генетике и медико-биологической статистике. При статистическом анализе количественных признаков использовался подсчет среднего значения, стандартного отклонения, медианы, процентилей. Проводился анализ вида распределения вариант в исследуемых группах по критерию Лиллиефорса, критерию Шапиро-Уилка. При сравнении двух групп по количественному признаку при нормальном распределении вариант был применен критерий Стьюдента. При распределении вариант в сравниваемых группах, отличном от нормального, использовались непараметрические критерии Манна-Уитни, Колмогорова-Смирнова, Краскела-Уоллиса. Сравнение групп между собой по распределению качественного признака проводилось с применением критерия ч2 Пирсона, критерия ч2 с поправкой Йетса для таблиц 2х2. При малом числе наблюдений в группах использовался расчет точного двустороннего критерия Фишера. Статистический анализ материала был проведен с использованием компьютерных программ Statistica 6.0 для Windows, Microsoft Excel 2003, Biostat.
Результаты исследования.
В работе было проведено исследование активности дофамин-бета-гидроксилазы в плазме крови у группы больных алкоголизмом 2 и 3 стадий заболевания параллельно с генотипированием по 1021 С/Т полиморфизму гена дофамин-бета-гидроксилазы. Среднее значение активности дофамин-бета-гидроксилазы в группе больных алкоголизмом составило 33,66 ± 16,54 нмоль/мл/мин. В контрольной группе здоровых доноров активность дофамин-бета-гидроксилазы составила 38,45 ± 15,5 нмоль/мл/мин, что статистически достоверно выше, чем у больных алкоголизмом ( критерий Манна-Уитни р<0,05).
В исследуемой группе были выделены подгруппы больных с наследственным отягощением алкоголизмом (2 и более родственника 1- 2 степени родства больны алкоголизмом) и без наследственного отягощения. Среднее значение активности ДБГ в группе наследственно неотягощенных больных было выше и составило 36,37 ±15,0 нмоль/мл/мин, чем в группе больных с наследственным отягощением алкоголизмом 29,85±14,04 нмоль/мл/мин (межгрупповые различия статистически достоверны по критерию Колмогорова-Смирнова, p<0,05 и по критерию Манна-Уитни, p<0,05).
В исследуемой группе больных были выделены подгруппы больных с высокопрогредиентным и малопрогредиентным течением алкоголизма. Активность дофамин-бета-гидроксилазы у больных с высокопрогредиентным вариантом течения алкоголизма была ниже (27,9±11,73 нмоль/мл/мин), чем у больных с малопрогредиентным течением заболевания (36,4±13,19 нмоль/мл/мин) (критерий Манна-Уитни, p=0,08). У всех больных с крайне низкой активностью дофамин-бета-гидроксилазы (11,17±5,8 нмоль/мл/мин) высокой прогредиентности заболевания сопутствовал тяжело протекающий абстинентный синдром, также для них было характерно постоянное влечение к алкоголю, частые рецидивы заболевания. Больные с различной прогредиентностью заболевания были различны по возрасту (критерий Стьюдента p < 0,001). Пациенты с высокопрогредиентным алкоголизмом были значительно моложе - их средний возраст составлял 35,04 ± 11,48, в то время как средний возраст больных с малопрогредиентным течением алкоголизма – 50,06 ± 10,0 лет. Средний возраст начала систематического употребления алкоголя при высокопрогредиентном алкоголизме составил 21,2 года, а при малопрогредиентном – 27,12 года. Таким образом, сниженная активность дофамин-бета-гидроксилазы, приводящая к дисбалансу обмена катехоламинов при алкоголизации (росту соотношения дофамин/норадреналин), способствует раннему началу систематического употребления алкоголя и высокопрогредиентному течению заболевания. Возникающее при хронической алкоголизации угнетение ДБГ вследствие токсического действия этанола на нейроны синего пятна (Locus cereleus) головного мозга в сочетании с прямым ингибированием этанолом функции фермента обусловливает стремительное формирование абстинентного синдрома и его тяжелое течение у больных с высокопрогредиентным алкоголизмом, выраженное влечение у них к алкоголю.
Далее в работе был проведен анализ влияния полиморфизма 1021 C/T гена дофамин-бета-гидроксилазы на активность данного фермента в плазме крови больных алкоголизмом. Было установлено, что в группе больных, имеющих вариант генотипа 1021 C/C, активность дофамин-бета-гидроксилазы была выше (34,83 ±11,65 нмоль/мл/мин), чем в группах с генотипами 1021 C/T (27,68±12,48 нмоль/мл/мин) и 1021 T/T (22,82±13,32 нмоль/мл/мин) (межгрупповые различия достоверны по критерию Краскела – Уоллиса, p=0,04). Таким образом, изученный полиморфизм оказывает заметное влияние на активность фермента - замена цитозина на тимин (С/Т) в положении 1021 гена дофамин-бета-гидроксилазы приводит к статистически значимому снижению активности фермента.
С целью выявления возможной связи аллельных вариантов гена дофамин-бета-гидроксилазы с формированием алкогольной зависимости был проведен анализ частот распределения генотипов и аллелей по 1021 С/Т и 444 G/A полиморфным локусам гена дофамин-бета-гидроксилазы в группах здоровых людей и больных алкоголизмом, различающихся по прогредиентности, наличию осложнений, наличию или отсутствию наследственной отягощенности алкоголизмом. В группу с осложненным течением вошли больные, перенесшие алкогольный делирий (58%), алкогольный галлюциноз (25%), судорожные припадки (алкогольная эпилепсия) (17%) в абстинентном состоянии.
Таблица 1. Генотип 1021 С/Т гена дофамин-бета-гидроксилазы и течение хронического алкоголизма.
Генотипы | аллели | ||||
Группа | CC | CT | TT | C | T |
Здоровые люди (контроль) N-93 | 0,58 | 0,38 | 0,04 | 0,77 | 0,23 |
Больные хроническим алкоголизмом N-260 | 0,55 | 0,34 | 0,11 | 0,72 | 0,28 |
Больные алкоголизмом с высокопрогредиентным течением N-61 | 0,50 | 0,37 | 0,13 | 0,68 | 0,32* |
* критерий ч2 с поправкой Йетса 2,88, р =0,07 по со сравнению с контролем
Из данных, представленных в таблице 1, следует, что в общей группе больных алкоголизмом имеется тенденция к увеличению доли гомозиготного низкоактивного Т/Т генотипа по 1021 С/Т полиморфизму гена ДБГ, детерминирующего низкую активность фермента и соответственно процесса в-гидроксилирования дофамина по сравнению с контрольной группой (критерий ч2 =3,83, df=2, р=0,14). В группе больных с высокопрогредиентным течением заболевания наблюдается увеличение количества низкоактивных гомозиготных вариантов генотипов Т/Т (критерий ч2= 4,2, df=2, р=0,12) и количества Т-аллелей по сравнению с контрольной группой здоровых людей (критерий ч2 с поправкой Йетса 2,88, р=0,07). Установлено также, что частота гомозиготного генотипа 444 A/A по 444 G/A полиморфизму, связанного с низкой активностью дофамин-бета-гидроксилазы в спинномозговой жидкости, в группе больных высокопрогредиентным алкоголизмом была выше, чем в группе здоровых людей. Таким образом, как и в случае 1021 C/T полиморфизма, наблюдается небольшой, но устойчивый рост числа низкоактивных аллелей гена дофамин-бета-гидроксилазы по 444 G/A полиморфизму в группе больных высокопрогредиентным алкоголизмом по сравнению с группой здоровых лиц.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 |
