Теоретическое обоснование и практическое использование ДНК – генотипирования в селекции свиней (стр. 3 )

Фракция гамма-глобулинов (состоящая из иммуноглобулинов), функционально представляющая собой антитела, обеспечивающие гуморальную иммунную защиту организма от инфекций и чужеродных веществ увеличивается в сыворотке крови свиноматок в течение супоросности. Организм свиноматок готовится к лактационному периоду, когда с молозивом будет выделено большое количество иммунных белков, обеспечивающих в дальнейшем выживаемость потомства и, в конечном результате, сохранность вида. Уровень мочевины в сыворотке крови у гомозиготных и гетерозиготных супоросных маток был в 2,7 и 2,9 раза (Р>0,99) больше, чем у гомозиготных и гетерозиготных подсосных маток. Уровень креатинина у супоросных свиноматок NN - генотипа был выше, на 4,7 мкмоль/л (Р>0,95), чем у маток Nn - генотипа. После опороса количество креатинина у маток NN - генотипа резко уменьшилось на 55,9 (Р>0,999), а у Nn – на 51,93 мкмоль/л (Р>0,999). Повышенное количество мочевины и креатинина у супоросных маток, по всей видимости, вызвано усиленной работой органов выделительной системы в процессе метаболизма белков.

Активность щелочной фосфатазы у гомозиготных и гетерозиготных супоросных маток была выше на 26,6 (Р>0,99) и 27,07 Е/л (Р>0,999), чем в подсосный период, это связано с ее участием в процессе образования костей.

Активность АсАТ и АлАТ в сыворотке крови были выше у гомозиготных и гетерозиготных подсосных маток по АсАТ на 0,02, а АлАТ на 0,01 Е/л., по сравнению с супоросными гомозиготными и гетерозиготными матками. У супоросных гомозиготных и гетерозиготных свиноматок уровень глюкозы был ниже на 0,9 и 0,77 ммоль/л, чем у подсосных свиноматок.

При исследовании гормонов супоросных свиноматок содержание кортизола и адреналина был несколько выше у гетерозиготных (Nn) маток, а АКТГ - у NN. После опороса уровень кортизола и адреналина у подсосных маток Nn - генотипа увеличился на 22,1 нмоль/л (Р>0,999) и 1,91 нг/мл. Большая концентрация кортизола и адреналина у подсосных свиноматок, особенно Nn - генотипа, по сравнению с супоросными, связана, по – видимому, с опоросом, так как роды являются сильным стрессом для организма.

У подсвинков ½ СТ СМ-1 + ½ Л в 4-х и 6 мес. возрасте (табл.4) было выявлено 81% гомозиготных стрессустойчивых животных (NN), 19% - гетерозиготных (Nn) в 4-х мес. возрасте, в 6меси 15% соответственно, животных nn- генотипа выявлено не было.

С возрастом более заметно повышение количества общего белка и альбуминов у гетерозиготных подсвинков; так, в 4-х мес. возрасте на 2г/л и 2,92% (Р>0,95), в 6 мес. возрасте на 4,0г/л (Р>0,95) и 6,22% (Р>0,99) соответственно (табл.4). Альбумины относятся к высокодисперсным белкам крови, которые непосредственно участвуют в синтезе белков мышечной ткани. Содержание γ- глобулинов, как иммунных белков, было больше у гомозиготных подсвинков в 4-х мес. возрасте на 2,81% (Р>0,95), а в 6-и мес. – на 3,85% (Р>0,99).

Активность щелочной фосфатазы у 4-х и 6- мес. подсвинков генотипов NN и Nn внутри группы достоверных различий не имела. Однако уровень щелочной фосфатазы у гомозиготных и гетерозиготных 4-х мес. подсвинков был на 16,5 (Р>0,99) и 16,08 Е/л (Р>0,99) больше, чем у 6-мес. соответственно, это по всей видимости связано с тем, что щелочная фосфатаза участвует в процессах, связанных с ростом костной ткани, поэтому активность ее в сыворотке крови выше у молодняка. Содержание АКТГ у подсвинков Nn - генотипа в 4- и 6- мес. возрасте был ниже на 2,0 и 2,8 пг/мл (Р>0,95), а кортизола и адреналина на 7,1 (Р>0,95) и 5,6 нмоль/л (Р>0,99) и на 0,58 и 0,79 нг/мл выше, чем у сверстников NN – генотипа соответственно.

Таблица 4

Биохимические показатели крови помесных подсвинков 1/2СТ СМ-1+1/2Л различных генотипов по гену RYR-1

Показатели	В 4 мес.	В 6 мес.
NN- подсвинки (n = 34)	Nn - подсвинки (n = 8)	NN- подсвинки. (n = 33)	Nn- подсвинки (n = 6)
Общий белок, г/л	73,0± 1,14	75,0 ± 1,40	72,0±1,28 **	76,0±0,62
Альбумины, %	23,43 ± 1,04*	26,35 ± 0,76	24,14±0,68 **	27,36±0,44
α - глобулины, %	14,03 ± 0,54	13,89 ± 1,09	13,1±0,87	12,8±0,72
β- глобулины, %	13,01 ± 0,68	15,04 ± 0,37	11,39±0,68	16,4±0,22
γ- глобулины, %	22,53 ± 0,69	19,72 ± 0,52**	23,37±0,74	19,32±1,01**
АсАТ, Е/л	0,13± 0,014	0,20 ± 0,016	0,14± 0,013	0,20 ± 0,016
АлАТ, Е/л	0,10± 0,016	0,41 ± 0,05	0,11± 0,014	0,38 ± 0,05
Мочевина, ммоль/л	10,4± 0,76	9,0± 1,13	11,65± 0,76	11,28± 0,76
Щелочная фосфатаза, Е/л	110,28±1,32	108,34±1,26	93,78±2,11	92,26±1,74
Креатинин, мкмоль/л	91,4± 1,04	102,2± 2,20	106,40± 1,54	117,27±1,64
Глюкоза, ммоль/л	5,35±0,13	4,85±0,15*	5,20±0,14	4,62±0,12**
АКТГ, пг/мл	5,6±0,40	3,6±0,50**	11,2±0,80	8,4±0,60**
Кортизол, нмоль/л	74,5±1,22*	81,6±1,84	80,7±1,66**	86,3±1,62
Адреналин, нг/мл	7,02±0,14	7,60±0,18	6,84±0,21	7,63±0,14

Р>0,95*; Р>0,99**; Р>0,999***

Это объясняется тем, что нервная система координирует деятельность желез внутренней секреции и вызывает повышенное содержание кортизола в крови стрессчувствительных свиней; при этом наиболее характерные изменения заключаются в усилении секреции передней доли гипофиза (АКТГ), приводящей к усилению функциональной деятельности коры надпочечников, благодаря чему происходит быстрый выброс кортикостероидных гормонов в кровяное русло.

Таким образом, естественная резистентность организма по γ-глобулинам выше у гомозиготных стрессустойчивых хрячков (генотипа NN), а гетерозиготные (Nn) животные более чувствительны к воздействию различных стресс-факторов, что приводит к нарушению функции надпочечников, поэтому они не случайно обладают высоким уровнем кортизола и адреналина. Эти изменения в гормональном статусе подавляют иммунологическую реактивность организма, что может привести к синдрому злокачественной гипертермии (ЗГ). Поэтому целесообразно систематически выявлять и удалять из стада животных, обладающих нежелательными генотипами: nn и Nn.

3.4. Влияние гена рецептора рианодина скелетных мышц на естественную резистентность свиней

Хряки Д и КБ по гену RYR-1 гомозиготны (NN) и стрессустойчивы, а у Л, наоборот отмечен высокий уровень гетерозигот 27,4%.

Мы выявили некоторые различия в их естественной резистентности. Так, хряки-производители КБ обладали более высокой фагоцитарной емкостью крови, на 4,51× 106 МТ/л (Р>0,95) больше, чем аналоги Д. Фагоцитарная емкость крови у гомозиготных и гетерозиготных хряков – производителей Л не имела достоверных отличий и была на 6,52 (Р>0,99) и 2,01× 106 МТ/л ниже по сравнению с хряками КБ и Д. У хряков КБ были достоверно выше опсоно-фагоцитарный индекс и фагоцитарное число, по сравнению с хряками двух других пород. При рассмотрении гуморальных факторов естественной резистентности было отмечено, что БАСК была больше у хряков – производителей Д на 2,75%, чем у КБ и на 4,07(Р>0,95) и 4,52% (Р>0,99), чем у NN и Nn хряков – производителей Л. Однако ЛАСК у хряков Д была ниже, чем у КБ на 10,19 (Р>0,99) и на 8,86 (Р>0,99) и 7,49% (Р>0,99) чем у гомозиготных и гетерозиготных аналогов Л. NN и Nn хряки – производители Л уступали КБ по опсоно-фагоцитарному индексу на 0,48 и 0,37 МТ/лейкоцит, фагоцитарному числу на 1,15 (Р>0,95) и 1,11 (Р>0,95), фагоцитарной емкости крови на 6,73 (Р>0,999) и 6,31 × 106 МТ/л (Р>0,99). Преимущество гомозиготных хряков Л наблюдали по уровню естественных агглютининов.

Таким образом, хряки КБ имели наиболее высокий уровень естественной резистентности организма. Более низкие показатели естественной резистентности организма были у гомозиготных и гетерозиготных хряков – производителей Л, Д занимали промежуточное положение.

Проведя исследование неспецифической резистентности у подсосных гомозиготных(NN) свиноматок КБ, а также гомозиготных (NN) и гетерозиготных (Nn) помесей КБ×Л мы обнаружили, что количество лейкоцитов и фагоцитарная активность нейтрофильных гранулоцитов были выше у гомозиготных (NN) помесных маток на 0,82×109/л и 1,7%, чем у гетерозиготных, и на 1,14×109/л и 6,06% (Р>0,95), чем у чистопородных. Активность комплемента у NN маток КБ×Л также была на 0,4% больше чем у Nn и на 0,82% - чем у КБ.

Исключение составила ЛАСК, которая у свиноматок КБ была выше на 5,7 (Р>0,95) и 7,18% (Р>0,99) по сравнению с гомозиготными и гетерозиготными подсосными матками КБ×Л. БАСК у гомозиготных (NN) помесных маток была выше на 3,1% (Р>0,95) и 3,7% (Р>0,95), чем у маток КБ и гетерозиготных КБ×Л.

Установлено (табл.5) повышение уровня естественной резистентности как у гомозиготных (NN), так и гетерозиготных (Nn) животных 1 группы с 1- до 6- мес. возраста. Так, фагоцитарная активность лейкоцитов крови возросла в 1,48 и 1,45 раза (Р>0,99) соответственно. У подсвинков 2 группы (табл.6) фагоцитарная активность лейкоцитов как у гомозиготных (NN), так и гетерозиготных (Nn) подсвинков с возрастом увеличилась лишь в 1,13 и 1,16 раза. Фагоцитарный индекс достиг максимального значения в 6- мес. возрасте у подсвинков всех групп, однако наибольшим он был у подсвинков 1 группы. Следует отметить, что фагоцитарный индекс был несколько выше у гомозиготных подсвинков 1 и 2 групп. Фагоцитарная емкость крови с возрастом увеличилась как у NN, так и Nn подсвинков обеих групп, 1 группе в 2,24 и 2,65 (Р>0,99) а во 2 в 1,85 и 2,23 (Р>0,95), в раза соответственно. Увеличение фагоцитарной емкости крови было выше у гетерозиготных поросят 1 и 2 групп. У молодняка 1 группы способность лейкоцитов к фагоцитозу как у NN-, так и Nn - поросят была выше, чем 2 группы на 2,6 и 4,87% (Р>0,95).

Индекс резистентности был выше у гомозиготных и гетерозиготных поросят 1 группы. В период завершения колострального иммунитета у поросят отмечается снижение индекса резистентности, особенно это характерно для гетерозиготных поросят 2 группы.

Начиная с 4- мес. возраста, у подсвинков начинают проявляться различия и по клеточным факторам неспецифической резистентности. В этот период самыми высокими значениями фагоцитарного индекса и фагоцитарной емкости крови (показывающими качественную сторону процесса фагоцитоза) характеризовались NN - поросята 1/2КБ + 1/2Л, а низкими - гетерозиготные 1/4 КБ + 1/4 Л+ 1/2 Д. Индекс резистентности у поросят 1 группы (генотипа NN) составил 88,33 балла, что на 3,34 больше чем у генотипа Nn и на 6,66 и 8,17 чем у поросят 2 группы NN - и Nn - генотипов.

С 5 – мес. возраста и до убоя естественная резистентность была выше у подсвинков NN - генотипа 1/2КБ + 1/2Л, а у гетерозиготных (Nn) подсвинков 1/4 КБ + 1/4 Л+ 1/2 Д был отмечен наиболее низкий среди сверстников уровень естественной резистентности организма.

Таблица 5

Естественная резистентность молодняка 1/2КБ+1/2Л различных генотипов по гену RYR-1

Показатели	Генотип по гену RYR-1 в разные периоды развития, мес. (1- группа)
1 мес.	3мес.	4 мес.	5 мес.	6 мес.
NN	Nn	NN	Nn	NN	Nn	NN	Nn	NN	Nn
Количество лейкоцитов, 109/л	13,62± 0,80	12,48± 0,62	11,60± 0,86	11,35± 1,10	12,24± 0,86	11,80± 0,68	12,24± 0,86	11,80± 1,68	11,64± 0,86	11,80± 1,68
Фагоцитарная активность нейтрофилов,%	26,56± 0,92	24,30± 1,64	27,83± 1,55	26,11± 1,18	32,15± 0,67	30,48± 1,18	35,80± 1,10	33,90± 1,08	39,21± 0,58	35,18± 0,86
Опсоно-фагоцитарный индекс, МТ/лейкоцит	0,38± 0,18	0,30± 0,09	0,52 ± 0,18	0,47± 0,15	0,65 ± 0,12	0,58± 0,15	0,84 ± 0,13	0,77± 0,17	1,01 ± 0,13	0,84± 0,17
Число Райта	1,44± 0,08	1,23± 0,09	1,87± 0,09	1,80± 0,10	2,01± 0,08	1,90± 0,10	2,35± 0,12	2,28± 0,10	2,55± 0,12	2,38± 0,10
Фагоцитарная емкость крови,109 МТ/л	5,18± 0,23	3,73± 0,68	6,00± 0,66	5,33± 1,04	7,91± 0,40	6,83± 0,24	10,30± 1,56	9,12± 1,74	11,64± 0,36	9,88± 0,54
БАСК, %	54,22± 1,80	51,62± 2,06	53,54± 1,96	50,28± 1,11	58,67± 1,76	54,27± 1,51	61,04± 1,96	58,34± 1,51	65,28± 1,96	61,89± 2,00
ЛАСК, %	36,54± 1,42	33,28± 1,56	44,92± 1,58	41,27± 1,12	36,11± 1,08	34,48± 2,12	41,68± 1,48	37,62± 1,52	45,10± 1,98	44,36± 1,32
Индекс резистентности, балл	77,11	75,28	76,67	74,68	88,33	84,99	90,20	87,31	92,33	89,64

Таблица 6