В сельхозпредприятиях, где заболеваемость коров маститом составляет 10-30%, установлен рост микрофлоры в 90,5 % случаев (38 проб), которая была представлена патогенными стрепто - и стафилококками (Str. agalactiae – 35,7%, Staph. aureus – 30,9%, Staph. haemolyticus − 2,4%, и их ассоциациями − в 4,8%), а также Micrococcus – 4,8%, Str. dysgalactiae – 9,5%, Ent. faecalis − 2,4%, не являющиеся основными патогенами молочной железы. Таким образом, в хозяйствах, где уровень заболеваемости маститом составляет 10-30%, патогенная микрофлора выделена в 73,8% проб секрета вымени и условно-патогенная – 16,7%.
При заболеваемости коров маститом свыше 30% микрофлора выделена из 81,8% случаев. Из выделенных культур на долю патогенных приходилось 32,7% (Staph. aureus в монокультуре –7,3 % и в ассоциации с Ps. aeruginosa – 14,5%; E. сoli в монокультуре – 7,3%; E. сoli + C. diversus – 3,6%), условно-патогенных – 23,6% (Ent. faecalis – 16,3%; Ent. faecalis+ Klebsiella – 1,8; Citrobacter − 5,5%), сапрофитных -20,0% (Staph. saprophyticus + Ps. aeruginosa – 7,3%; Staph. epidermidis – 3,6% Ent. Аerogenes + C. diversus – 1,8%, Ent. faecium + C. diversus − 1,8%; Ent. faecium + Ent. aerogenes – 5,5%;) и грибы (Сandida) - 5,5%.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что при уровне заболеваемости коров маститом до 10%, из всех проб секрета вымени выделена патогенная кокковая микрофлора, как в монокультуре (Str. agalactiae − 46,7%, Staph. aureus − 13,3%, Staph. haemolyticus − 13,3%), так и ассоциации (Staph. aureus + Str. agalactiae − 26,7%).
При уровне заболеваемости от 10% до 30% − кроме патогенной микрофлоры (73,8%), выделена и условно-патогенная − 16,7%, в 9,5% проб микрофлора отсутствовала.
При уровне заболеваемости коров маститом свыше 30% патогенная микрофлора (Staph. aureus, E. сoli) выделена в 32,7% случаев, условно-патогенная (C. diversus, Ent. faecalis,) – 23,6%, в 20,0% сапрофитная (Staph. saprophyticus, Staph. epidermidis, Ent. аerogenes, Ps. aeruginosa), грибы (Саndida) − 5,5%, и в 18,2% проб микрофлора отсутствовала.
Следовательно, в сельхозпредприятиях с уровнем заболеваемости коров маститом до 30% основным фактором вызывающим развитие мастита (100-90,5%) является воздействие на молочную железу патогенной и условно-патогенной микрофлоры с преобладанием стафило - и стрептококков (73,8%-100%), среди которых доминировали Str. agalactiae и Staph. aureus как в монокультуре, так и в ассоциациях.
В сельхозпредприятиях с более высоким уровнем заболеваемости маститом основными факторами, способствующими его возникновению, являются грубые нарушения в технологии машинного доения коров с последующим инфицированием молочной железы не только патогенной и условно-патогенной, но даже сапрофитной микрофлорой. Кроме того, отсутствие микрофлоры в 17,2% случаев свидетельствует о том, что вначале мастит начинает развиваться как асептический, а затем при инфицировании микрофлорой − как инфекционный процесс различной степени тяжести.
Выявленная нами роль технологических факторов и патогенной микрофлоры в степени проявления патологических реакций со стороны молочной железы свидетельствует о необходимости выработки более рациональных подходов к решению проблемы терапии и профилактики воспалительных заболеваний данного органа. Разрабатываемые программы по снижению заболеваемости коров маститом должны учитывать особенности каждого сельхозпредприятия и степень заболеваемости маститом.
3.3. Бактерицидность и микробная обсемененность кожи вымени
здоровых и больных маститом коров
Изучение бактерицидности кожи молочной железы у коров проведено нами при разном её функциональном состоянии.
Установлено, что бактерицидность кожи вымени у клинически здоровых животных в различные функциональные периоды молочной железы снижается от начала лактации к запуску. Так, наибольшая величина индекса бактерицидности кожи отмечена нами в первую неделю после родов 91,8±2,0%. С началом лактации индекс бактерицидности снижается до 87,8±2,4% и остается практически неизменным до середины лактации. В конце лактации бактерицидность кожи уменьшается до 79,7±2,3 % (Р<0,05), что на 12,1 % ниже уровня этого показателя в первую неделю после родов. У запускаемых коров отмечается тенденция дальнейшего снижения этого показателя по сравнению с лактирующими коровами, что связано вероятно, с ослаблением активности всей системы неспецифической резистентности.
При изучении показателей естественной резистентности молочной железы и микробной обсемененности её кожи у клинически здоровых и больных маститом лактирующих коров установлено, что у коров, больных субклиническим маститом, из секрета пораженных долей выделены патогенные микроорганизмы, количество соматических клеток достигало 6585,0± 133,5 тыс./мл, индекс бактерицидности кожи вымени данных долей оказался ниже в 1,5 раза, а обсемененность её микрофлорой выше в 2,9 раза, чем у клинически здоровых животных (табл. 2).
Установлено также, что индекс бактерицидности и микробная обсемененность кожи вымени оказались значительно измененными и в непораженных смежных с больными долях. Так, индекс бактерицидности этих долей оказался ниже на 20,0% (74,5±6,5%), а бактериальная обсемененность – на 66% больше (560,8±128,5 тыс. КОЕ), в сравнении со здоровыми животными.
Следовательно, развитие воспалительного процесса происходит на фоне понижения бактерицидной активности кожи и повышения её бактериальной обсемененности, как пораженных долей, так и всей молочной железы. При этом показатели бактерицидности кожи и её бактериальной обсемененности находятся в тесной взаимосвязи с количеством соматических клеток и титром лизоцима М (табл. 2).
Таблица 2
Показатели естественной резистентности и микробной обсемененности кожи вымени здоровых и больных субклиническим маститом коров
Показатели | Клинически здоровые, | Больные субклиническим маститом | |
непораженные доли | пораженные доли | ||
Титр лизоцима М, мм | 22,5±0,3 | 21,8±0,7 | 16,1±1,9* |
Количество соматич. клеток, тыс/мл | 124,3±12,4 | 384,0±10,6* | 6585,0±133,5 |
Индекс бактерицидности, % | 84,2±1,9 | 74,5±6,5 | 54,5±5,3* |
Обсемененность, тыс, КОЕ | 337,6±19,1 | 560,8±128,0 | 985,0±150,0* |
* Р < 0,001 по сравнению с клинически здоровыми
При изучении роли показателей бактерицидности и микробной обсемененности кожи вымени в возникновении скрыто протекающего воспалительного процесса, проведенные в течение двух месяцев лактации, установлено, что индекс бактерицидности кожи вымени в области пораженных долей уже за неделю до заболевания снизился в 1,35 раза (Р<0,001) по сравнению с исходным уровнем, а интактных долей этих коров 17,5% (табл. 3).
Таблица 3
Бактерицидность кожи вымени коров до и при заболевании маститом
Время исследования | Бактерицидность кожи вымени, % | ||
Клинически здоровые коровы | заболевшие субклиническим маститом | ||
непораженные доли | пораженные доли | ||
За 3 недели до заболевания | 85,5±2,1 | 88,5±3,7 | 90,2±3,4 |
За 2 недели до заболевания | 85,2±3,3 | 89,1±3,2 | 88,5±4,3 |
За 1 неделю до заболевания | 88,1±2,5 | 75,3±5,5 | 66,4±6,9* |
В день заболевания | 85,1±4,0 | 74,5±6,5 | 55,4±5,3* |
*-Р <0,05-0,001 по сравнению с клинически здоровыми
Аналогичная закономерность выявлена и в количестве микробной обсемененности кожи (табл. 4). Так, за неделю до заболевания обсемененность кожи вымени микрофлорой возросла с 301,7±60,9 до 670,0±150,0 тыс. КОЕ или в 2,2 раза (Р<0,05), а в день заболевания до 985,0±150,0 тыс. КОЕ или в 3,3 раза. В непораженных долях заболевших маститом коров этот показатель возрос на 20%.
Одновременно установлено, что уже за неделю до заболевания коров маститом в секрете молочной железы отмечается увеличение соматических клеток с 152,6±57,5 тыс/мл до 358,3±95,8 или в 2,2 раза и в день заболевания в пораженных долях до 9253±1934 тыс/мл или в 5,8 раза (Р<0,001), а в непораженных долях до 446,2±92,9 тыс/мл или 2,9 раза. Титр лизоцима М снизился с 22,7±0,2 мм до 16,2±1,9 или в 1,4 раза (Р<0,05). Только в день заболевания и только в пораженных долях.
Таблица 4
Обсемененность кожи вымени микрофлорой до и при заболевании маститом
Время исследования | Обсемененность кожи вымени микрофлорой, тыс. КОЕ/мл | ||
клинически здоровые | заболевшие субклиническим маститом | ||
непораженные доли | пораженные доли | ||
За 3 недели до заболевания | 406,2±56,4 | 347,5±264,5 | 301,7±60,9 |
За 2 недели до заболевания | 325,4±55,5 | 550,0±159,6 | 200,0±47,4 |
За 1 неделю до заболевания | 338,3±39,6 | 578,3±168,1 | 670,0±150,0* |
В день заболевания | 300,0±58,7 | 560,0±128,3 | 985,0±150,0* |
*-Р <0,05 по сравнению с клинически здоровыми
Полученные нами данные свидетельствуют, что показатель бактерицидности кожи вымени обладает большей реактивностью по сравнению с титром лизоцима М и количеством соматических клеток.
Анализ литературных данных и собственных исследований позволяет сделать вывод, что в возникновении воспаления в молочной железе коров главную роль играет изменение взаимодействия двух факторов - неспецифической резистентности молочной железы и патогенной микрофлоры окружающей среды. В частности, снижение бактерицидной активности кожи (в 1,5 раза) или увеличение патогенности микроорганизмов способствует увеличению обсемененности молочной железы (в 2,9 раза) и проникновению в неё возбудителей мастита главным образом через сосковый канал. Поэтому показатели бактерицидности и микробной обсемененности кожи, отражающие состояние локальной естественной резистентности, может служить тестом для выявления патологического состояния организма и молочной железы, а разработка профилактических мероприятий, должна базироваться на применении средств, повышающих общую и локальную резистентность и снижающих микробную обсемененность вымени, подавляющих патогенное действие микроорганизмов.
3.4. Эффективность использования средств неспецифической
патогенетической терапии субклинического мастита у коров
В качестве средств, стимулирующих общую неспецифическую резистентность организма, факторы локальной защиты молочной железы коров и позволяющих тем самым ликвидировать воспалительный процесс использовали препарат плаценту эмульгированную денатурированную (ПДЭ) и антисептик стимулятор Дорогова фракция-2 (АСД-2Ф).
В экспериментальных исследованиях, выполненных на 45 животных, одной группе пятикратно подкожно с интервалом 48 часов вводили ПДЭ в дозе 20 мл, второй – внутримышечно трижды с интервалом 48 час 15% АСД-2Ф на тетрагидровите в дозе 10 мл и третьей группы в первый, третий и пятый дни лечения подкожно вводили ПДЭ по 20 мл, а на второй, четвертый и шестой дни - внутримышечно 15% АСД-2Ф в дозе 10 мл.
Выявлено, что эффективность применения ПДЭ и АСД-2Ф оказалась недостаточной и составила соответственно 60,0 и 53,3%.
Наилучший эффект при субклиническом мастите -87,6% достигнут при комплексном применении данных препаратов. У клинически выздоровевших животных отмечено увеличение индекса бактерицидности кожи вымени с 53,7 ±1,7% до 86,2±2,4 или в 1,4 раза (Р<0,001), снижением количества соматических клеток в молоке с 4178,0±1035,8 тыс/мл до 296,8±90,6 тыс/мл или в 6,3 раза (Р<0,01). Через сутки после выздоровления микрофлора отсутствовала в 60% проб молока, а через неделю у всех животных.
Комплексное применение ПДЭ и АСД-2Ф при лечении субклинического мастита сопровождалось достоверным увеличением в крови содержания общего белка на 9,48%, β-глобулинов - на 16,28%, лимфоцитов - на 9,6%, при снижении уровня альбуминов - на 9,56% и эозинофилов - на 39,13%.
Производственные испытания эффективности комплексного метода лечения с использованием ПДЭ и АСД-2Ф проведены на 199 коровах, больных субклиническим маститом, подтвердили результаты экспериментальных исследований (табл. 5)
Таблица 5
Терапевтическая эффективность ПДЭ, 15% АСД-2Ф на тетрагидровите и ПДЭ + 15% АСД-2Ф на тетрагидровите при субклиническом мастите
у лактирующих коров
Препарат | Подвергнуто лечению | Выздоровело | Осталось больных | |||||||
коров | долей | коров | % | долей | % | коров | % | долей | % | |
ПДЭ | 35 | 39 | 24 | 68,5 | 26 | 66,7 | 11 | 31,4 | 13 | 33,3 |
15% АСД-2Ф | 35 | 38 | 20 | 57,1 | 21 | 55,3 | 15 | 42,9 | 17 | 44,7 |
ПДЭ+15% АСД-2Ф | 129 | 144 | 108 | 83,7 | 117 | 81,3 | 21 | 16,3 | 27 | 18,7 |
Терапевтическая эффективность применения отдельно ПДЭ или 15%-ного АСД-2Ф при субклиническом мастите составила соответственно 68,5 и 57,1%, а при их комплексном использовании 83,7%.
Таким образом, проведенные исследования позволяют заключить, что разработанный нами комплексный метод лечения субклинического мастита у коров с использованием ПДЭ и АСД-2Ф в виде 15% раствора на тетрагидровите является достаточно эффективным и экологически безопасным.
Однако он требует продолжительного времени лечения (не менее 6 инъекций препаратов), дает эффект только при субклиническом мастите и не может быть использован при клинических формах воспаления вымени.
3.5. Разработка новых антимикробных лекарственных препаратов для лечения больных маститом коров и их фармако-токсикологическая и клиническая оценка
На основе химиотерапевтического средства диоксидин, проявляющего антимикробную активность в отношении грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, нами подобрано три комбинации антимикробных средств, обладающих синергидным действием: диоксидин и фурацилин в соотношении 1:0,2; диоксидин и гентамицина сульфата − 1:2, диоксидин и линкомицина гидрохлорид − 1:4. На их основе были разработаны препараты для лечения мастита у коров в период лактации.
Диофур, включающий в себя следующие компоненты, масс.% диоксидин − 1,0; фурациллин − 0,2; вода дистиллированная до 100,0
Диеномаст, комплексный препарат, содержащий следующие компоненты, масс.%: диоксидин − 1,0; гентамицина сульфат − 2,0; воск – 5,0; масло вазелиновое до 100,0.
Линдомаст, комплексный препарат, содержащий следующие компоненты, масс.%: диоксидин − 1,0; линкомицина гидрохлорид − 3,0; моноглицерид мягкий − 3,0; моноглицерид дистиллированный − 3,0; масло вазелиновое до 100,0.
3.5.1. Антимикробная активность диофура, диеномаста и линдомаста
Определение анимикробной активности препаратов диофур, диеномаст и линдомаст проведено совместно с сотрудниками отдела микробиологии, вирусологии и иммунологии и лаборатории диагностики инфекционных и инвазионных заболеваний института.
Результаты исследований, приведенных в таблицах 6, 7, 8, свидетельствуют, что диофур обладает широким спектром и высоким антимикробным действием в отношении основных возбудителей мастита в концентрации 0,98-7,8 мкг/мл, что превышает антимикробную активность диоксидина и фурациллина в 2-8 раз. Данная комбинация подавляет рост кокковой микрофлоры в концентрации 3,9-7,8 мкг/мл, а грамотрицательной – 0,98 мкг/мл (табл. 6).
Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) диеномаста составляет 0,39-3,1 мкг/мл, что превышает антимикробную активность диоксидина и гентамицина сульфата в 2-32 раза, диеномаст ингибирует рост кокковой микрофлоры в концентрации 0,39-0,98 мкг/мл, а грамотрицательной – 0,39-3,1 мкг/мл (табл. 7).
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 |
