УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»

Приказом Росздравнадзора

от _________ 2011г. № ______

Руководитель организации-заявителя

________________

«___»______________ 2011 г.

М. П.

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ

набора реагентов для определения концентрации общего белка

в биологических жидкостях биуретовым методом

Назначение

Область применения – клиническая медицина, биохимия, клиническая лабораторная диагностика. Набор предназначен для определения концентрации общего белка в сыворотке (плазме) крови.

Характеристики набора

Принцип метода.

Белки в щелочной среде образуют с ионами меди (II) окрашенные в фиолетовый цвет комплексы (биуретовая реакция).

Состав набора.

1. Калибровочный раствор белка (концентрация раствора указана на этикетке) – 1 шт.

2. Гидроксид натрия, 20 г (флакон №2) – 2 шт.

3. Рабочий раствор, содержащий сульфат меди (II) (0,15 моль/л),

Na2ЭДTA (0,15 моль/л), NaOH (0,2 моль/лмл (флакон №3) – 2шт.

Аналитические и диагностические характеристики

Линейная зависимость до 120 г/дм3.

При содержании белка в сыворотке больше 100 г/л, сыворотку разводят физиологическим раствором, а результат умножают на коэффициент разведения.

Меры предосторожности

При работе с компонентами набора необходимо соблюдать общие правила техники безопасности работы с химическими веществами. При случайном попадании химических реактивов на кожу или в глаза их следует промыть проточной водой.

Использовать только для диагностики in vitro.

Оборудование и материалы

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

Определение концентрации общего белка в сыворотке (плазме) крови проводиться с использованием фотоэлектроколориметров, полу - и автоматических биохимических анализаторов.

Проведение анализа и регистрация результатов

Приготовление биуретового реактива.

Содержимое флакона №3 (1 шт.) переносят количественно в мерную колбу вместимостью 500 мл, разбавляют дистиллированной водой до ~300 мл, затем при тщательном перемешивании постепенно добавляют содержимое флакона №2 (1 шт.). Доливают водой до метки и перемешивают.

В зависимости от потребности лаборатории для приготовления вышеописанным методом 1 л биуретового реактива берут по два флакона № 2 и два флакона № 3.

Приготовленный биуретовый реактив устойчив при температуре от +10 до +25°C в течение месяца.

Длина волны: 540-560 нм (зеленый светофильтр).

Длина оптического пути: 5мм

Соотношение биуретовый реактив : сыворотка (плазма) крови = 50 : 1.

Внести в пробирки согласно таблице:

Опытная проба

Холостая проба

Сыворотка (плазма) крови, мл

0,02

-

Биуретовый реактив, мл

1

1

Физиологический раствор

(0,9% раствор хлорида натрия), мл

-

0,02

Пробы тщательно перемешать, избегая образования пены, и инкубировать 30 мин. при 18-25°C. Измерить оптическую плотность опытной пробы относительно холостой пробы на спектрофотометре (ФЭКе).

Примечание: при необходимости объемы биуретового реактива и сыворотки крови можно пропорционально уменьшать либо увеличивать, сохраняя соотношение: 50:1 (например, 2,5 мл : 0,05 мл).

Построение калибровочной кривой.

Готовят ряд разведений калибровочного раствора белка согласно таблице:

№

п/п

Калибровочный

раствор белка (мл)

0,9% раствор

хлорида натрия (мл)

Содержание белка

(г/л)

1

0,2

0,3

0,4 ´ Ск. р.

2

0,3

0,2

0,6 ´ Ск. р.

3

0,4

0,1

0,8 ´ Ск. р.

4

0,5

-

1,0 ´ Ск. р.

Ск. р.- концентрация калибровочного раствора белка, указанная на флаконе.

С каждого разведения берут по 0,02 мл и обрабатывают так же как пробу. Через 30 мин. измеряют оптическую плотность относительно холостой пробы. По полученным данным строят калибровочный график. Вычисляют факторы пересчета делением концентраций белка приготовленных калибровочных растворов №№1-4 на оптическую плотность. Выводят средний фактор (F).

Расчет:

Сon=Еon • F, где Сon - концентрация белка в пробе,

Eon - экстинкция (оптическая плотность) опытной пробы, F - усредненный фактор.

Нормальные величины: Взрослые и дети 6г/л

Дети до 3 летг/л

Новорожденныег/л

Условия хранения и эксплуатации набора

Хранение компонентов набора должно производиться при температуре от 2 до 8 °С. Срок годности наборов – 1 год с даты изготовления

Начальник производства __________________

(подпись)

____________________________________________________________________________/________________Должность руководителя ЛПУ, (подпись, печать) (ФИО)

проводившего медицинские

испытания