Совершенствование селекционного процесса плодовых и ягодных растений на основе цитологических методов и культуры изолированных тканей (стр. 6 )

Видимо, это связано с положительным синергическим эффектом конкретного экзогенного ауксина с 6-БАП и морфогенетической реакции генотипа сорта на то или иное сочетание регуляторов роста. При добавлении в регенерационную среду одного 6-БАП в различных концентрациях, в большинстве вариантов сред регенерация понижалась или вообще не происходила. Способность листовых дисков к формированию побегов несколько ниже, чем у листовых черешков. У первого типа эксплантов частота регенерации составляла 15,6-45,7%, а у второго – 18,2-51,1%.

Более полной реализации морфогенетического потенциала способствует двухэтапный прием культивирования листовых дисков и черешков на регенерационной среде, включавший предварительное (подготовительное) выращивание в полной темноте (6 недель и t=250С) с последующим перенесением в стандартные (16 часовой фотопериод и t=250С) условия с интенсивным освещением. Видимо, при нахождении клеток в темноте происходит усиление обменных процессов, увеличения активности нуклеиновых кислот, возрастание синтеза белка, т. е. в клетках протекают процессы, аналогичные таковым при действии стрессовых факторов, что приводит к более активному заложению почек.

Итак, биотехнологический прием получения регенерантов через прямой органогенез имеет важное значение для селекционной практики малины, в частности для размножения в системе in vitro трудноразмножаемых генотипов и, особенно для генетической трансформации и получения трансгенных растений.

6.5. Селекция тканевых культур резистентных к солевому стрессу. Резистентность тканевых линий оценивали по показателю частоты каллусообразования на селективных питательных средах. В таблице 13 представлены результаты исследований по селекции каллусных линий солевыносливых к различным дозам селективного агента с применением прямой (одноступенчатой) селекции.

Таблица 13 - Пролиферация колоний каллусных клеток на селективных средах в зависимости от концентрации хлорида натрия ( гг.)

Сорт	Концентрация NaCl в среде, %	Частота каллусообразования, %
1-й пассаж	2-й пассаж	3-й пассаж	4-й пассаж	5-й пассаж
Молинг промис	0	38,9	57,1	88,9	82,4	-
0,5	27,8	40,0	50,0	40,0	-
1,0	11,1	50,0	25,0	33,3	-
1,5	17,6	33,3	0	0	-
Новость Кузьмина	0	27,8	40,0	75,0	90,0	-
0,5	35,3	50,0	55,6	50,0	-
1,0	31,6	33,3	50,0	25,0	-
1,5	5,6	0	0	0	-
Кумберленд	0	100	100	100	93,3	92,9
0,25	81,1	100	95,0	93,3	88,9
0,5	65,8	78,9	84,6	85,1	84,8
1,0	13,5	48,9	0	0	0
1,5	2,8	0	0	0	0

Примечание. Каллус сортов Молинг промис и Новость Кузьмина культивировали на селективных средах в течение 4 пассажей, сорта Кумберленд – 5 пассажей.

Пролиферация клеток каллуса более активно происходит на средах, дополненных NaCl в концентрации 0,25% и 0,5%. В течении четырех-пяти пассажей уровень каллусогенеза, как и масса формирующихся колоний клеток, имеет тенденцию к увеличению. Линии клеток опытных вариантов находились в условиях имитации in vitro солевого стресса свыше 200 суток. Однако способность каллусной культуры к росту у сорта малины черной в условиях 1,0% NaCl сохраняется только в течение двух субкультивирований и полностью подавляется в третьем пассаже. В варианте опыта с добавлением в среду высокой дозы селективного агента (1,5% NaCl) наблюдается резкое снижение жизнеспособности клеток и полное ингибирование процесса новообразования клеточных колоний (сорта Кумберленд, Новость Кузьмина – 2 пассаж, сорт Молинг промис – 3 пассаж).

Таблица 14 - Применение ступенчатой селекции для получения каллусных линий сорта Карнавал резистентных к хлориду натрия

(среда Андерсона с 4,0 мг/л 2,4-Д, 1996г.)

Пассаж	Концентрация NaCl в среде, %	Длительность культивирования, суток	Частота каллусообразования, %
1	0	43	83,3±5,9
0,25	66,0±4,4
2	0	35	100
0,5	82,8±4,6
3	0	42	94,7±3,5
1,0	54,1±4,7
4	0	39	89,5±4,9
1,0	63,1±4,4
5	0	50	100
1,5	48,6±4,6
6	0	20	89,3±5,6
1,5	46,7±5,2
7	0	30	90,0±4,7
0*	62,5±7,6
8	0	25	89,7±4,8
1,5	65,0±7,5

Примечание*. Каллус, полученный в 6 пассаже на среде с 1,5% NaCl, культивировали без селективного агента.

Для отбора каллусных линий резистентных к NaCl (1,5%) и сохраняющих способность к росту на селективной среде использовался прием ступенчатой селекции (табл. 14). Цикл последовательных пассажей каллусных культур в селективных условиях составлял 284 суток и состоял из восьми пассажей. В результате культивирования каллусных клеток на среде с постоянно увеличивающейся концентрацией NaCl (0,25%→ 0,5%→1,0%→1,5%) отобраны линии, способные к росту в присутствии 1,5% соли (в опыте частота каллусообразования – 65,0%, в контроле – 89,7%). Следовательно, прием ступенчатой селекции позволяет выделить линии устойчивые к критической для пролиферации каллусных клеток малины концентрации солевого стрессора.

Выводы

1.  В результате проведенных исследований разработаны и усовершенствованы цитологические и биотехнологические приемы, способствующие решению проблемы повышения интенсификации селекционного процесса некоторых плодовых культур.

2.  Цитоэмбриологический метод в селекционных исследованиях способствует решению проблемы недостаточной семенной продуктивности отдаленных гибридов сливы разного уровня плоидности на основе исследования полного цикла развития женской генеративной сферы и прогамной фазы оплодотворения. Установлены характерные отклонения от нормы в формировании женских гаметофитов, которые влияют на фертильность семяпочек и плодоношение.

3.  Цитологический анализ кариотипов гибридов инконгруэнтных скрещиваний позволяет дать предварительный прогноз степени плодовитости. При гибридизации диплоидных и тетраплоидных форм сливы формируются аллотриплоиды (2n=3x=24) с геномным составом (х+2х) и полным бесплодием. При скрещивании диплоид х гексаплоид гибриды являются аллотетраплоиды (2n=4x=32), геномный набор хромосом (х+3х).

4.  Установлено, что для аллотриплоидов характерны значительные нарушения в процессах развития женских гаметофитов на всех этапах, что приводит к абортивности семяпочек и массовому опадению цветков (97,0 – 99,0%) и является причиной стерильности женской генеративной сферы и почти полного отсутствия плодоношения (1,3 – 1,7%).

5.  Показано, у аллотетраплоидных гибридов нарушения в формировании женской генеративной сферы выражены в меньшей степени. В период массового цветения в семяпочках гибридов формируется примерно 29,3 – 37,5% морфологически нормальных женских гаметофитов, что свидетельствует о частичной женской стерильности.

6.  Установлена степень совместимости в разных комбинациях скрещивания. Реакция несовместимости скрещиваемых компонентов связана с нарушениями механизма взаимоотношения мужского гаметофита со спорофитом пестика и является следствием проявления гаметофитной системы несовместимости.

7.  Показано, метод эмбриокультуры позволяет эффективно решить проблему преодоления в разной степени выраженного бесплодия отдаленных гибридов сливы. От почти полностью бесплодных и слабоплодовитых гибридов получено 52 растения F2. Среди которых выявлены формы со сдержанным ростом, высота сеянцев в пятилетнем возрасте не превышала 1 метра. Установлено, что выход жизнеспособных сеянцев прямо зависит от формирования морфологически нормальных женских гаметофитов и степени выполненности введенных в культуру зародышей.

8.  Введение в питательную среду 6-БАП позволяет индуцировать из каждого зародыша яблони по несколько дополнительных побегов и увеличить выход однородных сеянцев. Разработан прием ризогенеза у полученных из зародышей in vitro побегов путем воздействия контрастными температурами. Укоренение увеличивается в 2 раза и более раз.

9.  Показано, для повышения каллусообразующей способности экспланта и улучшения качественных показателей каллуса в среду необходимо вносит 2,4-Д (для малины) или ее сочетанием с ИУК и кинетином в соотношении 2:1:1 (для земляники). Установлено, что морфогенез in vitro у земляники осуществляется по типу адвентивного органогенеза. Показано, что в клеткахдневной каллусной ткани некоторых сортов малины наблюдается вариабельность кариотипов. Возникновение генетически нестабильных клеток составляет около 20% (сорт Карнавал).

10. Установлено, на регенерацию в культуре каллусных и листовых тканей земляники и малины оказывает влияние генетические особенности сорта, гормональный баланс питательной среды (их тип, концентрация, сочетания) и приемы воздействия на экспланты.

11. Выявлены различные сортовые реакции и специфические требования тканевых культур на введение в состав регенерационных сред регуляторов роста. Морфогенный эффект 6-БАП и его физиологическое свойство стимулировать регенерацию побегов реализуется при взаимодействии с экзогенными ауксинами.

12. На основе базовых сред Мурасиге – Скуга (для земляники) и Андерсона (для малины) разработаны регенерационные среды с одновременным введением 6-БАП и определенного препарата ауксиновой природы в соотношении 10:1 и 20:1, которые повышали морфогенетический потенциал каллусных и листовых тканей. Установлено положительное влияние контрастных температур и повышенного осмотического давления среды на регенерацию побегов из каллуса.

13. Разработана эффективная двухэтапная схема получения побегов in vitro в тканевых культурах модельных сортов земляники и малины, которая включает предварительное культивирование эксплантов в темноте с последующим помещением их в стандартные условия выращивания, что приводит к увеличению регенерация до 2-х раз (в зависимости от типа экспланта и генотипа сорта).

14. Установлено, уменьшение в среде Мурасиге – Скуга исходной концентрации NH4NO3 не оказывает существенного влияния на коэффициент размножения побегов, в то время как снижение содержания KNO3 ухудшает в 4 раза пролиферацию побегов. При культивировании апексов оптимальным является 16-часовой фотопериод. Затемнение среды на этапе ризогенеза посредством введения красителя метиленовой сини способствует получению растений-регенерантов с хорошо развитой корневой системой.

15. Растения-регенеранты, полученные в каллусной культуре земляники показывают значительную изменчивость репродуктивных органов, а именно количества цветоносов (V=26,4%) и ягод (V=22,4%) на растении, которая сохранялась в R1 и R2 вегетативном поколениях в течении 4 лет. В меньшей степени выражено варьирование этих признаков у регенерантов в культуре листовых дисков (для количества цветоносов V = 16,5%, ягод V = 3,9%.

16. Создание в культуре in vitro имитации солевого стресса способствует отбору путем одноступенчатой селекции колоний каллусных клеток малины, пролиферирующих на селективных средах с NaCl (0,25-1,0%). Применение ступенчатой селекции позволяет провести скрининг тканевых линий в условиях критической для роста клеток концентрации солевого стрессора (1,5%).

Рекомендации для практической селекции

1. Для наиболее полной реализации генетического потенциала рода Prunus Mill и создания ценного исходного селекционного материала рекомендуется использовать:

а) аллотетраплоидные формы, формирующие от 29,3 до 37,5% нормальных зародышевых мешков. Опыление следует проводить в первый день цветения, т. к. в этот период женский гаметофит достигает полного развития;

б) аллотриплоидные формы, способные формировать до 3% зародышевых мешков. Опыление необходимо проводить на 2-4 день цветения, увеличивая при этом количество опыляемых цветков до 1-2 тысяч штук и число вовлекаемых в гибридизацию форм.

2. Для повышения результативности скрещиваний с участием отдаленных гибридов сливы разной степени фертильности, рекомендуется использовать метод эмбриокультуры. При работе с культурой зародышей руководствоваться разработанными «Методическими рекомендациями по применению искусственной культуры тканей и органов в генетико-селекционных работах с плодовыми», раздел «Применение культуры зародышей для повышения эффективности отдаленной гибридизации» (Мичуринск, 1987).

3. Рекомендуется культивировать изолированные зародыши яблони на среде Мурасиге-Скуга дополненной 6-БАП (1,0-4,0 мг/л) в целях тиражирования и сохранения ценных генотипов.

4. При проведении экспериментов с культурой ткани предлагается использовать разработанные нами методические рекомендации «Индукция морфогенеза и тканевая селекция плодовых и ягодных культур», раздел «Регенерация растений из изолированных соматических тканей земляники и малины» (Мичуринск, 1996).

5. Индукцию адвентивного органогенеза в культуре изолированных каллусных тканей, листовых дисков и черешков следует проводить по схеме: I этап – культивирование эксплантов без освещения в течение 3 недель (земляника) и 6 недель (малина) при t=23±2 0С; II этап – культивирование эксплантов в стандартных условиях при t=23±2 0С и 16-часовом фотопериоде.

6. Для получения растений-регенерантов земляники с хорошо развитой корневой системой рекомендуется прием затемнения среды ризогенеза, содержащей 1,0 мг/л, за счет добавления нейтрального красителя метиленовой сини в концентрации 0,01 – 0,05%.

7. Селекцию каллусных линий малины, устойчивых к высоким концентрациям солевого стрессора, следует осуществлять на среде с постоянно увеличивающейся дозой NaCl (0,25 ® 0,5 ® 1,0 ® 1,5%).

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.  Курсаков, результаты цитологического изучения отдаленных гибридов сливы / , , // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. . – 1978. – Вып. 31. – С. 3-6.

2.  Курсаков, формирования женского гаметофита у отдаленных гибридов сливы / , , // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. . – 1980. – Вып. 34. – С. 3-9.

3.  Курсаков, изучение отдаленных гибридов сливы в связи с использованием их в селекции / , // Наука – производству: Тез. докл. науч. конф. – М., 1981. – С. 7-8.

4.  Расторгуев, совместимости при беккроссе аллотриплоидов сливы / // Биологические аспекты изучения и рационального использования животного и растительного мира: Тез. докл. конф. – Рига, 1981. – С. 80-81.

5.  Расторгуев, опыления аллотетраплоидов сливы методом люминесцентной микроскопии / // Пути интенсификации картофелеводства, плодоводства и овощеводства: Тез. докл. науч.-практ. конф. – Минск, 1981. – С. 16-17.

6.  Курсаков, особенностей роста пыльцевых трубок при отдаленной гибридизации косточковых растений методом люминесцентной микроскопии / , , // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. . – 1982. – Вып. 39. – С. 3-8.

7.  Расторгуев, метода люминесцентной микроскопии при отдаленной гибридизации сливы / // Проблемы повышения эффективности современного садоводства: Краткие тез. докл. III Всес. науч. конф. молодых ученых. – Мичуринск: ВНИИС им. , 1982. – С. 161-162.

8.  Денисов, определения морозоустойчивости растений яблони / , , // А. С. № 1 1983.

9.  Дубовицкая, изолированных зародышей в связи с отдаленной гибридизацией косточковых плодовых растений / , // Генетические особенности и практические результаты отдаленной гибридизации плодовых растений: Тр. ЦГЛ им. . – Мичуринск, 1984. – С.74-81.

10. Расторгуев, особенности аллополиплоидов сливы / , // Наука – сельскому хозяйству: Тез. докл. науч. конф. молодых ученых. – Мичуринск, 1985. – С. 25-26.

11. Расторгуев, устройства для просмотра и фотографирования цитологических препаратов в люминесцентном свете / , // Информ. листок, № 000-85. – Тамбов, ЦНТИ, 1985. – 4 с.

12. Шелаботин, для обработки предметных стекол хромовой смесью / , , // Информ. листок, № 000-85. – Тамбов, ЦНТИ, 1985. – 4 с.

13. Расторгуев, С. Л. К вопросу о микроклональном размножении ценных генотипов земляники / // Интенсификация садоводства – составная часть Продовольственной программы СССР: Тез. докл. науч. конф. – Мелитополь, 1985. – С. 11-12.

14. Курсаков, особенности и применение искусственной культуры зародышей при отдаленной гибридизации плодовых растений / , , // Гаметогенез, оплодотворение и эмбриогенез семенных растений, папоротников и мхов: Тез. докл. IX Всес. совещ. по эмбриологии растений. – Кишинев: Штиинца, 1986. – С. 222.

15. Тюленев, размножение земляники в искусственной культуре / , , // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. . – 1986. – Вып. 43. – С. 27-31.

16. Тюленев, методы в селекции плодовых растений // , , // V съезд ВОГИС им. : Тез. докл. – М., 1987. – Т.4. – Ч.4. – С. 251.

17. Шелаботин, , повышающее качество цитологических препаратов и производительности при их приготовлении / , , // Научные достижения – производству: Тез. докл. науч. конф. – М., 1987. – С.71-72.

18. Тюленев, способ размножения земляники / , , // Информ. листок, № 000-87. – Тамбов, ЦНТИ, 1987. – 4 с.

19. Курсаков, культуры зародышей для повышения эффективности отдаленной гибридизации / , , // Методические рекомендации по применению искусственной культуры тканей и органов в генетико-селекционных работах с плодовыми. – Мичуринск, 1987. – С. 12-16.

20. Тюленев, микроразмножение ценных генотипов плодовых культур / , , // Биология культивируемых клеток и биотехнология: Тез. междунар. совещ. – Новосибирск, 1988. – С. 320.

21. Методические рекомендации по применению цитологических методов в плодоводстве / , , . – М.: ВАСХНИЛ, 1988. – 52 с.

22. Тюленев, укоренения побегов яблони / , , // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. . – 1990. – Вып. 48. – С. 34-36.

23. Расторгуев, физиологически-активных веществ на развитие изолированных зародышей яблони / // Достижения науки – в практику: Краткие тез. докл. науч. конф. – М., 1990. – С. 110-111.

24. Расторгуев, регенерации из изолированных тканей земляники / , // Информ. листок, № 000-91. – Тамбов, ЦНТИ, 1991. – 3 с.

25. Тюленев, растений-регенерантов из изолированных тканей земляники / , , // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. . – 1991. – Вып. 50. – С.21-27.

26. Курсаков, прогамной фазы при отдаленных скрещиваниях сливы методом люминесцентной микроскопии / , , // // Бюл. науч. информ. ЦГЛ им. . – 1992. – Вып. 51. – С.15-20.

27. Тюленев, генетической изменчивости плодовых и ягодных растений в искусственной культуре / , , // Управление генетической изменчивостью с.-х. растений: Тез. докл. междунар. совещ. – Ялта, 1992. – С.100-101.

28. Тюленев, растений из изолированных тканей плодовых и ягодных культур / , , // VI съезд ВОГИС им. : Тез. докл. – Минск, 1992. – Ч.2. – С.156.

29. Тюленев, растений из изолированных соматических тканей плодовых культур / , , // Новые методы биотехнологии растений: Тез. докл. II Российского симпозиума. – Пущино, 1993. – С.173.

30. Tyulenev, V. M. Plant regeneration from isolated somatic tissues of fruit crops / V. M. Tyulenev, L. V. Osipova, S. L. Rastorguev // Trends in plant biotechnology: Abstracts second symposium. – Pushcino, 1993. – P.409

31. Тюленев, морфогенеза в тканевых культурах плодовых и ягодных растений / , , // Генетика. – 1994. – Т. 30. – С.160.

32. Будаговский, морфогенетической потенции и индуцированной иммунной реакции соматических тканей растений в культуре in vitro под действием низкоинтенсивного когерентного излучения лазеров / , , // Механизм действия сверхмалых доз: Тез. докл. II Междунар. симпозиума. – М., 1995. – С. 143-144.

33. Тюленев, растений из изолированных соматических тканей и анализ сомаклональной изменчивости земляники / , // Бюл. науч. информ. ВНИИГиСПР им. . – 1995. – Вып. 52. – С.55-56.

34. Биотехнология в селекции / , , // Программа и методика селекции плодовых, ягодных и орехоплодных культур. – Орел: ВНИИСПК, 1995. – С. 111-131.

35. Тюленев, биотехнологических методов в плодоводстве / , , // Современные проблемы плодоводства: Тез. докл. науч. конф. – Самохваловичи, 1995. – С.17.

36. Соловых, тканевых культур в селекции плодовых растений / , // Молодые ученые – садоводству России: Тез. докл. Всерос. совещ. – М., 1995. – С. 9-12.

37. Расторгуев, растений из изолированных соматических тканей земляники и малины / // Индукция морфогенеза и тканевая селекция плодовых и ягодных культур (Методические рекомендации). – Мичуринск, 1996. – С. 40-61.

38. Расторгуев, изолированных тканевых культур в селекции малины / // Сельскохозяйственное производство и высшая школа на переломном этапе реформирования: Мат. обл. науч.-практ. конф. – Мичуринск, 1996. – Сб.2. Плодоводство. – Ч.2. – С. 35-36.

39. Расторгуев, способов индукции растений-регенерантов земляники и малины в культуре тканей / // Использование биотехнологических методов для решения генетико-селекционных проблем: Докл. и сообщ. XVIII Мичуринских чтений. – Мичуринск, 1998. – С. 49-52.

40. Расторгуев, биотехнологических методов при отдаленной гибридизации сливы / // Проблемы и перспективы отдаленной гибридизации плодовых и ягодных культур: Тез. докл. и сообщ. ХХ Мичуринских чтений. – Мичуринск, 2000. – С.43.

41. Поляков, клонального микроразмножения сортов земляники / , , // Проблемы с.-х. производства в изменяющихся экономических и экологических условиях ХХI века: Мат. междунар. науч.-практ. конф. – Пенза, 2000. – С. 18-20.

42. Расторгуев, биотехнологических методов в селекции плодовых культур / // Проблемы с.-х. производства на современном этапе и пути их решения: Тез. докл. IV междунар. науч.-практ. конф. – Белгород, 2000. – С. 33-34.

43. Расторгуев, технологии в селекции плодовых и ягодных культур / // Вестник МичГАУ. – Мичуринск, 2001. – Т.1. – № 1. – Серия: плодоводство, цветоводство, овощеводство. – С. 99-103.

44. Поляков, особенности перспективных сортов земляники при ускоренном размножении / , , // Научное обеспечение современных технологий производства плодов и ягод в России и странах СНГ. – М., 2002. – С. 78-81.

45. Поляков, растений-регенерантов земляники к нестерильным условиям / , , // Повышение эффективности садоводства в современных условиях: Мат. Всерос. науч.-практ. конф. – Мичуринск-Наукоград РФ, 2003. – Т.2. – С. 335-339.

46. Расторгуев, in vitro в селекции плодовых культур / , // Мобилизация адаптационного потенциала садовых растений в динамичных условиях внешней среды: Междунар. науч.-практ. конф. – М., 2004. – С. 110-113.

47. Тюленев, современного использования стрессоров и антистрессоров в тканевой селекции плодовых и ягодных культур / , , // Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии: Мат. III междунар. науч. конф. – М., 2004. – С. 92.95.

48. Поляков, особенности перспективных сортов земляники на этапах ризогенеза и адаптации / , , // Вестник МичГАУ. – Мичуринск-Наукоград РФ, 2004. – Т. 2. – № 2. – Серия: плодоводство, цветоводство, овощеводство. – С. 106-108.

49. Расторгуев, адвентивного органогенеза из соматических тканей малины / // Современные достижения биотехнологии в виноградарстве и других отраслях с.-х.: Мат. конф. – Новочеркасск, 2005. – С. 116-121.

50. Расторгуев, растений и применение культуры тканей в селекции земляники / , // Аграрная наука. – 2005. - № 12. – С. 16-19.

51. Расторгуев, эмбриокультуры в селекционной работе с аллополиплоидами сливы / // Садоводство и виноградарство. – 2006. - № 2. – С. 13-15.

52. Расторгуев, морфогенеза в культуре каллусной ткани малины / // Вестник РАСХН. – 2006. - № 6. – С. 41-43.

53. Расторгуев, биотехнологических приемов для создания новых форм ягодных растений / // Вестник МичГАУ. – Мичуринск-Наукоград РФ, 2006. – № 1. – С. 53-57.

54. Расторгуев, тканевых культур малины устойчивых к солевому стрессу / // Вестник МичГАУ. – Мичуринск-Наукоград РФ, 2006. – № 2. – С. 55-58

55. Расторгуев, растений малины в условиях in vitro / // Аграрная наука. – 2007. – № 3. – С. 21-24.

56. Расторгуев, резистентных к хлориду натрия тканевых линий малины / // Агро XXI. – 2007. - № 4-6. – С. 38-39.

57. Расторгуев, приемов регенерации из каллусных культур малины / // Перспективы селекции яблони и других культур для промышленных насаждений: Мат. Всерос. науч.-практ. конф. – Мичуринск-Наукоград РФ, 2.

58. Расторгуев, растений в культуре изолированных зародышей яблони/ //Садоводство и виноградарство. – 2008. - №2.