УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»
Приказом Росздравнадзора от _________ 2011г. № ______ | Руководитель организации-заявителя ________________ «___»______________ 2011 г. |
М. П.
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
к набору реагентов для определения креатинина
в биологических жидкостях по методу Яффе
(кинетический вариант)
Назначение
Область применения – клиническая медицина, клиническая лабораторная диагностика.
Набор предназначен для определения содержания креатинина в биологических жидкостях.
Характеристика метода
Принцип метода:
Метод основан на регистрации скорости образования окрашенного комплекса креатинина с пикратом натрия в щелочной среде. Определение проводится без предварительной депротеинизации образцов по двухточечному измерению изменения оптической плотности раствора с неизвестной концентрацией креатинина и стандарта в точно фиксированные моменты времени (при 25 ºС через 30 и 120 секунд после начала реакции).
Состав набора:
1.Раствор пикриновой кислоты, 0.035 моль/л - 220 мл
2. Раствор гидроксида натрия, рН 1мл
3. Стандартный раствор креатинина, 177 мкмоль/л–10 мл
Аналитические и диагностические характеристики
Набор рассчитан на проведение 100 – 400 анализов (в зависимости от объема рабочего кюветы, используемой при фотометрировании растворов)
Проведение анализа и регистрация результатов
Приготовление рабочего раствора:
Растворы пикриновой кислоты и гидроксида натрия доводят до температуры измерения оптической плотности (18-25ºС) выдерживанием в помещении лаборатории либо, лучше, в термостате (при 25ºС).
В емкости из бурого стекла смешивают оба компонента в соотношении 1:1. Полученный раствор может быть использован через 20 минут после приготовления.
Рабочий раствор, устойчивый в течение 5 часов, рекомендуется хранить в плотно укупоренной склянке (!) при температуре не выше 25 ºС; в случае выполнения измерений при более высокой (37 ºС) температуре (спектрофотометр PV-1251 C “СОЛАР”) порцию рабочего раствора необходимо прогреть до соответствующей температуры в течение 30 минут непосредственно перед употреблением.
После приготовления рабочего раствора исходные растворы тщательно закрыть!
Проведение анализа:
К 1.0 мл рабочего раствора добавляют 0.1 мл исследуемой биологической жидкости. Пробу перемешивают, вносят в кювету фотометрического измерительного прибора и спустя 30 и 120 секунд после добавления анализируемой жидкости к реагенту измеряют оптическую плотность в области длин волн 490-510 нм при 25 ºС (в случае, если измерение проводится при других температурах, руководствоваться примечанием 4). Находят разность значений показателей оптической плотности второго и первого измерений.
Аналогичные операции выполняют также с 0.1 мл (или другим объемом, соответствующим объему исследуемой биологической жидкости) стандартного раствора креатинина.
Расчет концентрации креатинина в пробе
(С, мкмоль/л) проводят по формуле:
С=(Δ Аобразца /Δ Астандарта) • 177, где
Δ Аобразца и Δ Астандарта ― значения разностей
показателей оптической плотности вторых и первых
измерений опытного образца и стандарта;
177 ― концентрация креатинина (мкмоль/л) в стандарт-
ном растворе.
Примечания:
1. Объемы рабочего раствора и биологической жидкости могут быть изменены (в зависимости от вместимости кюветы) в сторону увеличения либо уменьшения, но соотношение между ними должно оставаться неизменным.
2. При работе с приборами, требующими установки нулевой точки (КФК-2, СФ-26 и др.), готовят раствор сравнения: к рабочему раствору добавляют дистиллированную воду в соотношении 0.1 мл дистиллированной воды на 1.0 мл рабочего раствора.
3. Измерение стандартного раствора креатинина необходимо проводить перед анализом опытных образцов ежедневно.
4. При более низкой температуре (ниже 25 ºС) рекомендуется увеличить длительность проведения реакции до 10 секунд на каждый градус; при Т = 37 ºС (спектрофотометр PV-1251 C “СОЛАР”) следует проводить измерения через 20 и 60 секунд после начала реакции.
5. Мочу перед определением креатинина необходимо разбавить дистиллированной водой в 50-100 раз, а полученный результат ― умножить на кратность разведения. При анализе сыворотки крови в случае выявления низкого содержания креатинина рекомендуется увеличить объем пробы не менее чем в 2 раза (уменьшив соответственно результат анализа во столько же раз). При этом необходимо довести объемы стандартного раствора и раствора сравнения дистиллированной водой до объема пробы.
Нормальное содержание креатинина:
в сыворотке крови: мужчины 53-110 мкмоль/л
женщины 44-95 мкмоль/л
в суточном количестве мочи: 8.8-15.9 ммоль/сут
Условия хранения и срок годности
Набор реактивов хранить при температуре 5-25 ˚ С в крытых вентилируемым помещениях, не допуская воздействия прямых солнечных лучей.
Срок годности – 1 год.
Начальник производства __________________
(подпись)
____________________________________________________________________________/________________Должность руководителя ЛПУ, (подпись, печать) (ФИО)
проводившего медицинские
испытания
