Повышение биоресурсного потенциала цыплят-бройлеров на основе усовершенствованной престартовой и стартовой системы выращивания (стр. 4 )

Рисунок 9 - Ножные мышцы цыплят-бройлеров контрольной группы в возрасте 40 дней. Перерождение мышечного волокна в жировую ткань.	Рисунок 10 - Ножные мышцы цыплят-бройлеров опытной группы в возрасте 40 дней. Мышечное волокно и жировая ткань в пределах нормы.

Морфологическим исследованиям крови цыплят в конце выращивания установлено достоверное снижение уровня лейкоцитов при использовании препарата Моноспорин, что подтверждается данными по отсутствию патологии органов пищеварительной и иммунной системы (табл. 12).

Таблица 12 - Гематологические показатели крови цыплят-бройлеров (x±Sx)

Показатели	Контрольная группа	Опытная группа
Лейкоциты,10е9/л	3,30±0,40	2,06 ±0,16**
Гемоглобин, г/л	84,67±3,18	91,00±17,62
Гематокрит, %	21,83±0,07	20,17±1,62
Эритроциты, 10е12\л	2,24±0,05	2,02±0,12
Средний объем эритроцита, ф/л	97,83±2,40	99,27±2,13
Ср. содерж. гемоглобина в одном эритроците, Пг	37,77±1,08	44,33±5,90
Распределение эритроцитов по объему, %	21,93±1,20	21,57±0,12
Тромбоциты, 10е9/л	27,67±12,72	18,33±7,43
Ср. объем тромбоцитов, ф/л	33,80±3,24	26,27±2,77
СОЭ, Мм/час	4,00±1,16	3,00±1,00

Примечание ** р< 0,01

Биохимические исследования крови показали, что достоверные изменения отмечены по электролитам крови цыплят опытной группы по сравнению с контрольной группой (табл. 13).

Таблица 13 - Биохимический анализ крови цыплят-бройлеров (x±Sx)

Показатели	Контрольная группа	Опытная группа
Общий белок, г/л	27,67±4,17	25,67±0,34
Альбумины, г/л	4,67±0,66	5,67±0,34
Глобулины, г/л	23,00±3,51	20,00±0,58
Кальций, ммоль/л	2,45±0,20	2,65±0,04
Фосфор, ммоль/л	2,99±0,66	2,64±0,19
Калий, ммоль/л	10,00±0,00	7,57±0,43***
Натрий, ммоль/л	117,00±9,82	152,00±2,08**
Хлор, ммоль/л	93,67±7,69	115,33±2,40*

Примечание ***р<0.001, **р<0.01, *р<0.05

Таким образом, в крови цыплят-бройлеров при использовании пробиотического препарата Моноспорин отмечен достоверно более низкий уровень лейкоцитов. Учитывая состояние внутренних органов цыплят опытной группы можно отметить, что при использовании пробиотика Моноспорин происходит нормализация кислотно-основного равновесия.

3.7. Эффект воздействия метаболитов B. Subtilis на синтез ДНК, РНК и белка на эмбриональной культуре клеток (ЭКК).

Для изучения эффектов жизнедеятельности B. Subtilis было проведено культивирование B. Subtilis и эмбриональных клеток из яиц кур родительского стада бройлеров. Для оценки влияния продуктов, синтезируемых B. Subtilis во время роста, ЭКК инкубировали в стандартной среде с добавлением стерилизованного супернатанта культуры роста B. Subtilis в соотношении 1/99, 10/90, 20/80, 30/70 (первая цифра – объем супернатанта культуры роста B. Subtilis, вторая – объем культуры ЭКК) .

Антибиотик «Энроколи» добавляли в среду инкубации ЭКК в количестве 0,1, 0,25, 2,5 и 25 мкг/мл среды.

Совместное влияние изучаемых препаратов исследовали посредством внесения в культуральную среду ЭКК обоих препаратов и проводили сравнение с показателями контрольной культуры (без добавления данных веществ).

Внесение в культуру ЭКК среды, содержащей продукты жизнедеятельности B. Subtilis, сопровождалось статистически достоверным изменением активности клеток в отношении синтеза ДНК (табл.14), причем в интервале соотношения объемов культур 1/99 – 20/80 наблюдается стимуляция синтеза ДНК (до 38,89%). Дальнейшее увеличение концентрации продуктов жизнедеятельности бактерий вызывает достоверное угнетение синтеза ДНК (на 11%) .

Таблица 14 - Влияние продуктов жизнедеятельности B. Subtilis и антибиотика Энроколи на включение 214С-тимидина в ДНК эмбриональных клеток в условиях культуры. (x±Sx)

Включение 214С-тимидина в ДНК (Бк/106 кл)	Концентрация антибиотика мкг/мл
Соотношение объемов сред инкубации (v/v)		0	0,1	0,25	2,5	25
0	5,4±0,09	4.36±0.07*	4.73±0.08*	1.25±0.04*	0.33±0.02*
1/99	6.7±0.11*	4.81±0.04*#	4.29±0.12*	1.48±0.11*	0.47±0.03*#
10/90	7.9±0.11*	5.62±0.13#	4.64±0.07*	1.64±0.05*#	0.32±0.06*
20/80	7.5±0.12*	4.31±0.07*	4.12±0.05*#	1.16±0.05*	0.33±0.07*
30/70	4.8±0.04*	4.27±0.27*	4.53±0.08*	1.13±0.10*	0.28±0.04*

Примечание * - достоверное отличие от контроля (без добавления среды роста B. Subtilis и антибиотика. # - достоверное отличие включения 214С-тимидина в ДНК в культуре с добавлением среды роста B. Subtilis и антибиотика от культуры только с добавлением антибиотика в соответствующей концентрации.

Здесь и далее достоверным считали отличие при р< 0,05

Установлено, что это связано с образованием B. Subtilis веществ, обладающих способностью угнетать пролиферацию не только микроорганизмов, но и ЭКК. Однако данный эффект проявляется лишь при замещении среды инкубации ЭКК средой кондиционированной B. Subtilis на треть по объему.

Выявлено, что внесение в культуру ЭКК антибиотика Энроколи в диапазоне концентраций 0,1-25 мкг/мл вызывает стойкое угнетение включения селективной метки в ДНК (на 20% уже при концентрации 0,1 мкг/мл и на 93,89% - в максимальной концентрации). Последнее можно объяснить присутствием в составе Энроколи энфрофлоксицина – препарата фторхинолинового ряда, механизм действия которого заключается в ингибировании синтеза ДНК. Привнесение в среду продуктов роста бактерий, обладающих стимулирующим эффектом в отношении синтеза ДНК, несколько улучшает ситуацию. Так, при концентрации антибиотика 0,1 мкг/мл применение кондиционированной среды B. Subtilis в соотношении 10/90 угнетения синтеза ДНК не наблюдалось (данные не отличались от контроля). Однако при остальных концентрациях угнетающий эффект антибиотика сохранялся, хотя и был выражен в меньшей степени. Определено, что синтезируемые бактериями вещества способны реактивировать топоизомеразы, блокируемые фторхинолинами, а также синтезировать вещества, способные «расплетать» двойную цепочку ДНК, оказывая топоизомеразоподобный эффект. Это многостадийный процесс, проявляющийся в снижение поступления антибиотика внутрь клетки и его ускоренную внутриклеточную деградацию.

Установлено, что включение радиоактивно меченого предшественника синтеза РНК 14С-уридина продемонстрировал в целом сходную картину с той лишь разницей, что выявленные на примере синтеза клетками ДНК эффекты были более выраженными. Так, продукты жизнедеятельности бактерий вызывали увеличение синтеза РНК на 50-80%, а в максимальной концентрации не оказывали ингибирующего эффекта (табл. 15).

Механизм действия исследуемого антибиотика заключается в блокировании топоизомераз, наряду с нарушением репликации ДНК так же будет наблюдаться и нарушение транскрипции. Полученные данные в полной мере соответствуют этому предположению. Так, добавление антибиотика в культуральную среду сопровождалось дозозависимым подавлением синтеза РНК на 47-87%% .

Таблица 15 - Влияние продуктов жизнедеятельности B. Subtilis и антибиотика Энроколи на включение 14С-уридина в РНК эмбриональных клеток курицы в условиях культуры (x±Sx)

Включение 14С-уридина в РНК (Бк/106кл)	Концентрация антибиотика мкг/мл
Соотношение объемов сред инкубации (v/v)		0	0,1	0,25	2,5	25
0	21,44±1,05	11.31±0.13*	5.23±0.20*	4.11±0.19*	4.33±0.17*
1/99	32.65±1.08*	22.89±0,97#	18,55±0,69#	13,72±0,80#	9,11±0,57#
10/90	39.61±0.99*	21,51±0,73#	23.40±1,11#	18,74±1,12#	10,23±0,63#
20/80	35.64±1.20*	23,52±0,24#	21,79±0,74#	22.46±0,88#	13,47±0,08#
30/70	28.64±0.91	20,49±0,15#	21,11±0,42#	20,64±1,30#	16.7±0,73*#

Примечание * - достоверное отличие от контроля (без добавления среды роста B. Subtilis и антибиотика), # - достоверное отличие включения 14С-уридина в РНК в культуре с добавлением среды роста B. Subtilis и антибиотика от культуры только с добавлением антибиотика в соответствующей концентрации