Ботанико-фармакогностическое изучение караганы древовидной (caragana arborescens lam.) (стр. 2 )

Таблица 3 − Характеристика фенологических фаз ритма сезонного

развития генеративных растений караганы древовидной,

интродуцированных в Московской области

Фенологическая фаза	Условное обозна-чение	Параметр*	Год исследования
2005	2006	2007
Начало вегетации	Ф1	1	04.04	31.03	27.03
Бутонизация	Ф2	1	03.05	27.04	23.04
2	4,13+0,07	3,81+0,03	3,74+0,09
3	4,28+0,03	4,25+0,02	3,96+0,08
Массовое цветение	Ф3	1	13.05	15.05	08.05
2	3,22+0,02	3,12+0,06	2,86+0,07
3	7,64+0,04	7,39+0,09	8,02+0,21
Конец цветения- начало плодоношения	Ф4	1	10.06	06.06	03.06
2	6,12+0,04	5,96+0,04	6,02+0,09
3	11,24+0,14	12,95+0,82	10,45+0,57
Массовое созревание плодов	Ф5	1	23.07	26.07	17.07
2	7,51+0,11	7,02+0,07	7,48+0,09
3	8,28+0,21	8,36+0,12	7,12+0,39
Массовый листопад	Ф6	1	02.10	07.10	03.10
2	2,12+0,09	3,29+0,07	1,75+0,07
3	1,12+0,08	1,25+0,04	1,02+0,05
* Исследуемые параметры: 1 – календарная дата начала фенофазы; 2 – прирост боковой образцовой оси, см; 3 – биомасса листьев, цветков, плодов на 1 м образцовой оси, г.

Химический состав побегов караганы древовидной

Было проведено изучение качественного состава и количественного содержания биологически активных веществ в побегах караганы древовидной. С помощью качественных реакций и ТСХ установлено наличие в сырье флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, аминокислот, полисахаридов, дубильных веществ, кумаринов. Также в сырье были обнаружены следовые количества сапонинов. Во всех образцах наличия алкалоидов и антраценпроизводных нами не обнаружено.

Методом ТСХ в сырье были обнаружены и идентифицированы флавоноиды: апигенин, кверцетин, кемпферол, лютеолин, лютеолин-7-гликозид и рутин (рисунок 1) и фенолкарбоновые кислоты: кофейная, феруловая и хлорогеновая. Предварительно была исследована эффективность разделения смеси стандартных образцов рутина, лютеолина-7-гликозида, кверцетина и лютеолина в различных хроматографических системах (таблица 4). В результате была выбрана система этилацетат – кислота муравьиная безводная – вода (8:1:1), имеющая наибольший суммарный коэффициент разделения (ηсумм).

1. Рутин (Rf = 0,23)

2. Лютеолин-7-гликозид (Rf = 0,43)

3. Лютеолин (Rf = 0,92)

4. Кемпферол (Rf = 0,93)

5. Апигенин (Rf = 0,96)

6. Кверцетин (Rf = 0,97)

7. Водное извлечение

8. Спиртовое извлечение

Рисунок 1 – Схема хроматограммы водного и спиртового извлечения

из побегов караганы древовидной в системе

этилацетат – кислота муравьиная безводная – вода (8:1:1).

Таблица 4 – Величины Rf флавоноидов в апробированных хроматографических системах и коэффициенты разделения смеси флавоноидов

Наименование флавоноида	Хроматографическия система
этилацетат-муравьиная кислота безводная-вода (80:10:10)	бензол-этанол-кислота ледяная уксусная (45:8:3)	толуол-этилацетат-муравьиная кислота безводная (40:40:20)	хлороформ-этанол (40:10)
Рутин	0,21	0,02	0,10	0,02
Лютеолин-7-гликозид	0,33	0,08	0,12	0,03
Кверцетин	0,64	0,30	0,55	0,18
Лютеолин	0,72	0,44	0,60	0,25
Коэффициент разделения гликозидов (ηгли)*	3,0	1,5	0,5	0,2
Коэффициент разделения агликонов (ηагл)*	2,6	3,5	1,0	2,3
Суммарный коэффициент разделения (ηсумм)	5,6	5,0	1,5	2,5
* η = ΔRf(1-2) • L / 0,5(l1+l2), где: Rf(1-2) – разность величин Rf соседних зон; L – длина пробега, мм; l1 и l2 – длина продольного сечения соседних зон адсорбции, мм.

Сравнительную оценку количественного содержания флавоноидов в сырье побегов караганы древовидной по этапам онтогенеза и фенологическим фазам проводили по разработанной нами методике с применением спектрофотометрического метода в пересчете на рутин. На рисунок 2 приведены УФ-спектры рутина и спиртового извлечения из побегов караганы. Предварительно были изучены оптимальные условия экстракции флавоноидов. Установлено, что наиболее полное извлечение флавонодиов из сырья достигается при экстрагировании 70% этанолом, при соотношении сырья и экстрагента 1:30 и времени экстракции – 1 час. Метрологические характеристики методики представлены в таблице 5. Относительная ошибка методики не превышала + 1%. Отсутствие систематических ошибок было подтверждено методом добавок рутина.

При использовании разработанной методики было установлено, что максимальное содержание флавоноидов имеют побеги молодых и средневозрастных генеративных растений в фазу массового цветения (рисунок 3).

А Б

Рисунок 2 – Спектры поглощения ГСО рутина (А) и

спиртового извлечения из побегов караганы древовидной (Б).

Таблица 5 – Метрологические характеристики методики количественного определения флавоноидов в сырье побегов караганы древовидной

n	f	х, %	S2	S	Sх	Р	t (P, f)	∆х	∆х	ε, %
8	7	3,1915	0,001296	0,03600	0,0127	0,95	2,36	0,0850	0,0249	0,78

А Б

Рисунок 3 – Содержание флавоноидов в сырье побегов караганы древовидной в онтогенезе (А) и по фазам вегетации (Б).

Инструментальными методами анализа был изучен аминокислотный состав сырья караганы древовидной (таблица 6).

Таблица 6 − Аминокислотный состав сырья побегов караганы древовидной

Наименование аминокислоты
Содержание аминокислоты
в г/кг абс. сух. сырья	в % от суммы аминокислот
Аспарагиновая кислота	0,77	2,0
Серин	9,74	32,0
Глютаминовая кислота	0,64	1,5
Глицин	0,36	1,7
Гистидин	0,86	2,0
Аргинин	0,41	0,7
Треонин	1,10	3,1
Алании	3,83	14,8
Пролин	8,41	25,2
Цистин	0,62	0,9
Тирозин	0,39	0,7
Валин*	1,56	4,6
Метионин*	0,23	0,5
Лизин*	0,54	1,3
Изолейцин*	1,05	2,8
Лейцин*	0,89	2,4
Фенилаланин*	0,68	1,4
Триптофан*	1,21	2,4
* - Незаменимые аминокислоты

Суммарное содержание незаменимых аминокислот составило 15,4%, что позволяет считать сырье караганы древовидной перспективным источником получения аминокислот.