Ботанико-фармакогностическое изучение караганы древовидной (caragana arborescens lam.) (стр. 4 )

Результаты исследований позволили считать сырье караганы древовидной перспективным источником биологически важных элементов; была выявлена экологическая безопасность сырья для организма человека в отношении содержания тяжелых металлов и радиоактивных элементов.

Фармакологическая активность и токсичность

экстрактов караганы древовидной

Испытания на острую и хроническую токсичность проводили на здоровых белых мышах при внутрибрюшинном введении и на половозрелых беспородных белых крысах при пероральном введении. Рабочие растворы готовили из сухих экстрактов караганы, полученных с использованием воды очищенной и этанола 70% и 90% .

Сухие экстракты растворяли в горячей воде очищенной в концентрации 50 мг/мл и 200 мг/мл. Каждую серию растворов испытывали на 6-12 животных в дозах 100, 500, 1000, 1500, 2000 мг/кг. Полученные данные свидетельствовали о том, что вещества караганы древовидной относятся к категории нетоксичных.

Гепатопротекторная активность оценивалась по восстановлению уровня маркерных ферментов крови аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартат-аминотрансферазы (АсАТ) и щелочной фосфатазы (ЩФ) после воспроизведения гепатита 50% масляным раствором четыреххлористого углерода (таблица 8). Опыты проводили на белых беспородных крысах-самцах. Сухие экстракты растворяли в горячей воде очищенной в концентрации 50 мг/мл, вводили животным внутрижелудочно в течение 7 дней.

Установлено достоверное снижение уровней АлАТ и АсАТ в сыворотке крови животных по сравнению с контролем при введении растворов сухих экстрактов, полученных с использованием этанола. Результаты гепатопротекторной активности караганы древовидной были сопоставимы с действием лекарственного препарата «Карсил».

Таблица 8 – Гепатопротекторная активность экстрактов караганы древовидной

Рабочий раствор	Доза, мг/кг	Уровень маркерных ферментов крови
АлАТ, мкМоль/л·ч	АсАТ, мкМоль/л·ч	ЩФ, ед/л·ч ∙10-2
Раствор сухого экстракта, полученного с использованием воды очищенной	125	0,39±0,08	0,72±0,05	5,38±0,01
Раствор сухого экстракта, полученного с использованием 70% этанола	125	0,35±0,03*	0,62±0,04*	5,34±0,02
Раствор сухого экстракта, полученного с использованием 90% этанола	125	0,36±0,04*	0,60±0,02*	5,26±0,03
Препарат «Карсил»	2,1	0,36±0,03*	0,63±0,06*	5,02±0,03
Контроль	0	0,42±0,07	0,75±0,05	5,45±0,02
Интактные животные	0	0,27±0,02	0,54±0,05	4,18±0,02
* - Достоверное снижение уровня маркерных ферментов крови при р<0,05.

Исследована гипогликемическая активность экстрактов караганы древовидной на модели эпинефринового диабета у белых крыс-самцов. Показано достоверное снижение уровня глюкозы в крови животных по сравнению с контролем при введении растворов сухих экстрактов, полученных с использованием воды очищенной, что сопоставимо с действием гипогликемического растительного сбора «Арфазетин» (таблица 9).

Рабочий раствор	Время с начала эксперимента, мин.
30	60	90	120	150	180
Раствор сухого экстракта, полученного с использованием воды очищенной	9,92+ 0,10*	10,24+ 0,06*	8,22+ 0,09*	6,86+ 0,05*	7,24+ 0,05*	7,24+ 0,05*
Раствор сухого экстракта, полученного с использованием 70% этанола	16,62+ 0,12	16,91+ 0,09	15,44+ 0,06	9,63+ 0,10	8,45+ 0,08	8,40+ 0,09
Раствор сухого экстракта, полученного с использованием 90% этанола	16,25+ 0,08	16,43+ 0,11	15,98+ 0,12	9,95+ 0,13	9,23+ 0,10	8,48+ 0,11
Настой сбора «Арфазетин»	10,75+ 0,09*	11,22+ 0,11*	7,57+ 0,09*	6,94+ 0,08*	7,12+ 0,08*	7,12+ 0,08*
Контроль	15,93+ 0,13	16,22+ 0,09	15,75+ 0,10	9,46+ 0,06	8,23+ 0,09	8,23+ 0,09
* - Достоверное снижение содержания глюкозы в крови при р<0,05.

Таблица 9 – Гипогликемическая активность экстрактов караганы древовидной (содержание глюкозы в крови животных, Моль/мл)

Изучение противовоспалительного и ранозаживляющего действий караганы древовидной проводили на модели экспериментальной гнойной раны у кроликов. Образование струпа и уменьшение раневой поверхности на 60-70% наблюдали на 1-2 сутки при нанесении раствора сухого экстракта, полученного с использованием 70% этанола, и на 2-3 сутки – раствора сухого экстракта, полученного с использованием 90% этанола. Эпителизация ран наступала на 4-7 сутки. В контрольной группе животных образование струпа и эпителизация ран наблюдались позднее на 2-4 суток.

При исследовании антимикробной активности экстрактов караганы древовидной методом диффузии в агар антимикробного действия не установлено.

Стандартизация качества сырья караганы древовидной

С целью стандартизации сырья побегов караганы древовидной были установлены его диагностические морфологические и анатомические признаки. Диагностическое значение имели: форма и размер листа, наличие и вид прилистников, цвет и строение цветка и цветоноса. Характерными отличительными особенностями анатомического строения являлись: форма и расположение волосков, отсутствие устьиц на верхней эпидерме листа, наличие жилок с кристаллоносной обкладкой.

Разработаны методики качественного обнаружения и количественного определения флавоноидов в сырье караганы.

Исследованы показатели качества побегов караганы древовидной с учетом результатов товароведческого анализа проб тестируемых партий сырья, заготовленных с различных мест произрастания. Для цельного и измельченного сырья установлены следующие показатели: влажность – не более 8,0%; золы общей – не более 9,0%; золы, нерастворимой в 10% растворе НСl – не более 1,0%. Предложены нормы содержания органической примеси – не более 1,0%; минеральной примеси – не более 0,5%; содержание стеблей – не более 20,0%; содержание флавоноидов – не менее 2,5%. С целью установления сроков годности сырья были проведены исследования стабильности показателей качества сырья в процессе хранения. Рекомендован срок хранения – 2 года. На основании полученных данных были разработаны и утверждены: Технические условия (ТУ) «Побеги караганы древовидной», Опытно-промышленный регламент (ОПР) на производство сырья побегов караганы древовидной, Инструкция по сбору и сушке побегов караганы древовидной.

Получение сухого экстракта караганы древовидной

и стандартизация его качества

Для получения сухого экстракта караганы была разработана и апробирована в лабораторных условиях технологическая схема производства. Она включала две технологические стадии и заключалась в экстрагировании биологически активных веществ 70% этанолом способом дробной мацерации по типу противотока, с последующим концентрированием извлечения, сепарированием, вакуумной сушкой, фасовкой, упаковкой и маркировкой товара. Предварительно были определены технологические показатели цельного и измельченного сырья; оптимизирован процесс экстракции биологически активных веществ из сырья по факторам: измельченность сырья, гидромодуль, продолжительность экстракции, количество экстракции.

С целью стандартизации сухого экстракта караганы были изучены его потребительские свойства, предложены показатели качества, установлены их нормы: влажность - не более 5,0 %; растворимость: растворим в спирте этиловом 70%, умеренно растворим в горячей воде, мало растворим в холодной воде, очень мало растворим в хлороформе; гигроскопичность – малогигроскопичен, наличие тяжелых металлов - отсутствуют. Разработаны методики качественного обнаружения и количественного определения флавоноидов в сухом экстракте. Предложена норма содержания флавоноидов в сухом экстракте – не менее 9,0 %. Исследована стабильность сухого экстракта в процессе хранения. Рекомендован срок хранения – 2 года.

Полученные результаты позволили разработать проекты нормативной документации: технические условия (ТУ) и опытно-промышленный регламент (ОПР) на сухой экстракт караганы древовидной.

ВЫВОДЫ

1.  В результате проведенных исследований дано ботанико-фармакогностическое обоснование возможности расширения сырьевой базы лекарственных растений за счет использования караганы древовидной.

2.  Изучены особенности онтогенеза и ритма сезонного развития караганы древовидной, интродуцированной в Московской области. Жизненный цикл караганы дифференцирован на четыре возрастных периода и девять возрастных состояний. В ходе онтогенеза выявлены изменения морфолого-анатомических признаков. Показано влияние интродукции на продолжительность вегетационного периода и возрастных состояний онтогенеза растений. Установлено, что для заготовки на сырье целесообразнее использовать побеги генеративных растений.

3.  Исследован качественный химический состав биологически активных веществ в побегах караганы. Установлено наличие в сырье флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, аминокислот, полисахаридов, дубильных веществ, кумаринов. Выделено и идентифицировано шесть основных флавоноидов: апигенин, кверцетин, кемпферол, лютеолин, лютеолин-7-гликозид, рутин. Проведен сравнительный анализ количественного содержания флавоноидов в сырье растений различных возрастных состояний и фенологических фаз. Установлено, что для рационального и эффективного использования караганы древовидной следует заготавливать на сырьё побеги молодых и средневозрастных генеративных растений в фазу массового цветения.

4.  Изучен качественный и количественный аминокислотный и минеральный состав сырья караганы древовидной. Установлено наличие 18 аминокислот, среди которых 7 – незаменимые. Суммарное содержание незаменимых аминокислот составило 15,4% от общего количества аминокислот в сырье. Идентифицировано 58 макро - и микроэлементов в сырье караганы. Показана перспектива использования сырья караганы древовидной в качестве источника аминокислот и биологически важных макро - и микроэлементов.

5.  Изучена гепатопротекторная активность экстрактов караганы древовидной. Показано на модели экспериментального гепатита у крыс соответствие влияния экстрактов на восстановление уровней маркерных ферментов крови действию препарата «Карсил». При исследовании гипогликемической активности экстрактов караганы на модели эпинефринового диабета у крыс было установлено соответствие результатов по снижению уровня глюкозы в крови действию настоя из сбора «Арфазетин». Изучены противовоспалительное и ранозаживляющее действия экстрактов караганы. Установлено, что вещества караганы древовидной относятся к категории нетоксичных.

6.  С целью стандартизации качества сырья караганы древовидной были установлены диагностические морфологические и анатомические признаки, предложены показатели качества и их нормы. Разработаны методики качественного обнаружения и количественного определения флавоноидов в сырье и сухом экстракте караганы. Относительные ошибки методик определения количественного содержания флавоноидов не превышали + 1%. Изучена стабильность сырья и сухих экстрактов караганы в процессе хранения.

7.  На основании проведенных исследований разработаны и утверждены технические условия на побеги караганы древовидной, опытно-промышленный регламент на производство сырья, инструкция по сбору и сушке побегов караганы; разработаны проекты технических условий и опытно-промышленного регламента на производство сухого экстракта караганы древовидной.

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах:

1.  , Хасаншина медицинского применения растений рода карагана (Caragana Lam.) // Материалы заочной международной конференции «Приоритеты фармацевтической науки и практики». − М., 2006. – С. 234-235.

2.  , Хасаншина элементного состава караганы древовидной // Материалы научно-практической конференции с международным участием, посвященной 25-летию фармацевтического факультета ЯГМА «Современные вопросы теории и практики лекарствоведения». – Ярославль, 2007. – С. 302-304.

3.  , Хасаншина диагностических признаков сырья караганы древовидной (Caragana arborescens Lam.) // Материалы научно-практической конференции, посвящённой 70-летию Ташкентского фармацевтического института, "Интеграция образования, науки и производства в фармации". – Ташкент, 2008. – С. 215-216.

4.  , , и др. Разработка пелоидных композиций, содержащих экстракты растений семейства бобовых // Материалы научно-практической конференции «Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации». – Ташкент, 2008. – С. 71-72.

5.  , , и др. Изучение высвобождения флавоноидов из пелоидных композиций, содержащих экстракты растений семейства бобовых // Материалы научно-практической конференции «Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации». – Ташкент, 2008. – С. 334-335.

6.  , , и др. Изучение факторов, влияющих на высвобождение биологически активных веществ из пелоидных композиций // Сборник материалов ХVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (тезисы докладов). – М., 2009. – С. 613.

7.  , , и др. Высвобождение биологически активных веществ из пелоидных композиций в опытах in vivo// Сборник материалов ХVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (тезисы докладов). – М., 2009. – С. 613.

8.  , , Бабаскина флавоноидов в побегах караганы древовидной // Фармация. – 2009. – №5. – С. 20-22.