полисахаридов из бурых водорослей Тихого океана в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С
На правах рукописи
Иммуно-патогенетическая характеристика эффективности применения
полисахаридов из бурых водорослей Тихого океана в комплексе с базисной
терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С
14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Владивосток – 2012
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии»
Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, Государственном бюджетном учреждении здравоохранения «Краевая клиническая инфекционная больница»
Научный руководитель: доктор медицинских наук
Официальные оппоненты:
- доктор медицинских наук, доцент кафедры инфекционных болезней ГБОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
– кандидат медицинских наук, ассистент
кафедры биологической химии, клинической лабораторной диагностики, общей и клинической иммунологии ГБОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Ведущая организация:
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. »
Российской академии медицинских наук
Защита состоится 24 мая 2012г. в 13.00 часов
на заседании диссертационного совета ДМ 208.007.02 при ГБОУ ВПО
«Владивостокский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации г. Владивосток, проспект Острякова, 2
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Автореферат разослан « 23 » апреля 2012 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы: Вирусный гепатит С является актуальной проблемой современного здравоохранения в связи с распространенностью в популяции, высокой частотой формирования цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы, развитием внепеченочных проявлений, определяющих трудности диагностики заболевания и его лечения (, 2004; Chang K. M., 2003; Hoofnagle J.H., 2002; Matsuzaki К. et al., 2007).
Важной особенностью HCV-инфекции является способность вируса к длительной персистенции в организме хозяина (Argentini С. et al., 2009). Генетическая вариабельность HCV, высокая скорость мутаций, подавление иммунного ответа под действием структурных и неструктурных белков вируса, а также инфицирование вирусом иммунокомпетентных лимфоидных клеток, являются факторами, способствующими хронизации инфекции (Argentini С. et al., 2009; Blackard J. T. et al., 2008; Yan F. et al., 2000). Персистенция вируса гепатита С в клетках, выполняющих функцию иммунного надзора, может сопровождаться морфологической и функциональной дезорганизацией иммунной системы, наиболее значимым проявлением которой являются количественные и функциональные нарушения клеток, участвующих в иммунных реакциях ( с соавт., 2000; , 2004; , 2004). Несмотря на многочисленные исследования в этой области, многие аспекты иммунопатогенеза HCV-инфекции остаются недостаточно изученными.
Трудной и до конца не решенной проблемой современной медицины является лечение хронического вирусного гепатита С (ХВГС), которое предполагает комплексный подход и включает два основных направления: базисное и этиотропное (, 1998). Этиотропная терапия ХВГС предусматривает использование препаратов рекомбинантных интерферонов-α в сочетании с синтетическими аналогами нуклеозидов. Базисное лечение включает в себя охранительный режим, лечебное питание, дезинтоксикационную и метаболическую терапию (, 2005; с соавт., 2007; Shepherd J. et al., 2004). В настоящее время в дополнение к базисному и этиотропному лечению ХВГС используют иммуномодулирующую терапию рекомбинантными интерлейкинами (ронколейкин, беталейкин), ростовыми и колониестимулирующими факторами, индукторами интерферонов ( с соавт., 2001; с соавт., 2003; с соавт., 2008). Однако, резистентность некоторых пациентов к интерферонам и иммуномодулирующим препаратам, наличие множества противопоказаний к их назначению, побочные эффекты, недостаточная эффективность, длительность терапии и высокая ее стоимость ( с соавт., 2007; , 2000) привели к необходимости поиска новых эффективных средств терапии.
Одним из возможных подходов к эффективному патогенетически обоснованному лечению пациентов с ХВГС является включение в комплексную терапию биокорректоров. Среди природных соединений несомненный интерес представляют полисахариды, выделенные из морских бурых водорослей, обладающие противовоспалительными, цитокининдуцирующими, иммуномодулирующими, гепатозащитными, антивирусными, антиоксидантными свойствами (, 2006; с соавт., 2003; Cumashi А. et al., 2007; Alekseyenko T.V. et al., 2007; Mandal P. et al., 2007; Lee J. et al., 2004; , 2011). Настоящая работа посвящена исследованию возможности коррекции дисфункции иммунной системы у пациентов с ХВГС при включении в комплекс терапевтических мероприятий биологически активной добавки к пище (БАД) «Фуколам» на основе полисахаридов из бурых водорослей.
Цель исследования: изучить влияние полисахаридов из бурых водорослей на состояние иммунной системы и воспалительный процесс в печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С для оптимизации базисной терапии.
Задачи исследования:
1. Исследовать состояние системы врожденного и адаптивного иммунитета у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации
2. Исследовать состояние цитокиновой системы у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации
3. Оценить иммуно-патогенетическую эффективность применения полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации
4. Исследовать влияние полисахаридов из бурых водорослей на воспалительный процесс в печени
Научная новизна: установлены особенности дисфункции иммунной системы у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации с низкой и умеренной степенью биохимической активности, выражающиеся в изменении функциональной активности лимфоцитов (нарушение процессов активации, продукции цитокинов), нейтрофилов (снижение фагоцитарной активности) на фоне нормальных количественных параметров субпопуляционного состава и активации гуморальных факторов иммунитета. Установлено иммуномодулирующее действие полисахаридов из бурых водорослей, применяемых в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С: изменение процессов активации лимфоцитов периферической крови; нормализация баланса Th1- и Th2-цитокинов, уровня иммуноглобулинов и иммунных комплексов; стимуляция фагоцитарной активности нейтрофилов; восстановление баланса между процессами перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты. В экспериментальных и клинических исследованиях доказано, что полисахариды из бурых водорослей Тихого океана снижают воспалительный процесс в печени.
Практическая значимость: Обоснована целесообразность применения полисахаридов из бурых водорослей для коррекции иммунной дисфункции, нормализации свободнорадикальных процессов и снижения воспалительного процесса в печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С.
Разработана и внедрена в практическое здравоохранение Приморского края (ГБУЗ «Краевая клиническая инфекционная больница») методика применения полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, определена перспектива ее практического использования при гепатитах различной этиологии, представлены методические рекомендации “Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С” (утверждены Департаментом здравоохранения администрации Приморского края), определены наиболее информативные критерии оценки степени выраженности иммунных нарушений у пациентов с ХГВС (уровень экспрессии активационных антигенов на поверхности лимфоцитов крови).
Апробация материалов работы: Результаты работы были представлены на научно – практических конференциях и симпозиумах международного, российского и регионального уровня: XII Международной научной конференции с международным участием «Здоровье семьи – XXI век» и III Международной научной конференции «Онкология - XXI век» (г. Эйлат, Израиль, 2008), Всероссийской научно-практической конференции «Иммуномодуляторы
природного происхождения» (Владивосток, 2009), V научно-практической конференции «Инфекционная патология в Приморском крае» (Владивосток, 2010), III Съезде военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных Сил Российской Федерации «Достижения науки и практики в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия Вооруженных Сил Российской Федерации» (Санкт-Петербург, 2010), VIII Российской конференции иммунологов Урала (Сыктывкар, 2010), научной конференции с международным участием «Этиологические, эпидемиологические и клинические аспекты инфекционных болезней» (Иркутск, 2010), III Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2011), V Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов « (Новосибирск, 2011), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Дни иммунологии в Сибири» (Абакан, 2011), Χ Региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии» (Владивосток, 2012).
Публикации: По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для публикации основных положений диссертации.
Объем и структура диссертационной работы: Диссертация изложена на 166 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, включающего 310 источников, из них 161 отечественных и 149 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 22 таблицами и 7 рисунками.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Состояние иммунной системы у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации с низкой и умеренной степенью биохимической активности характеризуется нарушением процессов активации лимфоцитов, дисбалансом сывороточных цитокинов, сниженной интерферонпродуцирующей и фагоцитарной функцией клеток крови, активацией гуморальных факторов иммунитета.
2. Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисным лечением у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С оказывает иммуномодулирующее действие на показатели цитокинового статуса, гуморальные и клеточные факторы адаптивного и врожденного иммунитета, способствуя коррекции метаболической иммуносупрессии.
3. Полисахариды из бурых водорослей снижают воспалительный процесс в печени - нормализуют биохимические и морфометрические показатели печени, восстанавливают баланс системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты.
Личный вклад автора: Анализ данных отечественной и зарубежной литературы по теме диссертации, комплексное исследование иммунного статуса пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, ретроспективный анализ историй болезни пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, статистическая обработка полученных результатов и их анализ, подготовка основных публикаций, написание диссертации выполнено лично автором. Отдельные исследования выполнены совместно со специалистами ФГБУН ТИБОХ им. ДВО РАН, что нашло отражение в совместных публикациях.
СОДЕРЖАНИЕ, РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ РАБОТЫ
Экспериментальные и клинические исследования проведены в лаборатории иммунологии ФГБУ «НИИЭМ» СО РАМН (заведующая лабораторией д. м.н. ), а также на базе ГБУЗ «Краевая клиническая инфекционная больница» г. Владивостока (главный врач, к. м.н. ). Отдельные разделы работы выполнены совместно с лабораторией химии ферментов ФГБУН Тихоокеанского института биоорганической химии им. ДВО РАН (заведующая лабораторией д. х.н. ). Все экспериментальные и клинические исследования проведены с разрешения Комитета по биомедицинской этике ФГБУ «НИИЭМ» СО РАМН (протокол от 01.01.2001 г.)
Контингент, материалы и методы: Обследовано 57 пациентов с ХВГС (37 женщин и 20 мужчин в возрасте от 18 до 49 лет), находящихся на лечении в ГБУЗ «Краевая клиническая инфекционная больница» г. Владивостока в период с 2008 по 2010 годы. Диагноз ХВГС устанавливали на основании клинико-эпидемиологических и биохимических данных и подтверждали выявлением у пациентов специфических серологических маркеров инфицирования методом иммуноферментного анализа (ИФА) (наличие анти-НСV-сум., анти-HCV-IgG, анти-HCV-IgM, анти-HCV-NS(3-5), обнаружением RNA-HCV в крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), а также данными УЗИ органов брюшной полости и фибросканирования печени. Критерии включения: ХВГС в фазе реактивации (репликации вируса), низкая или умеренная степень биохимической активности гепатита, информированное согласие пациента на участие в проведении исследования. Критерии исключения: ХВГС в стадии фиброза или цирроза печени, наличие хронической алкогольной интоксикации, употребление наркотических и психотропных средств, включение в комплекс лечения пациентов с ХВГС противовирусных и иммуномодулирующих препаратов. Исследование было рандомизированным, обеспечивающим случайное распределение пациентов в однородные группы. Все больные были разделены на 2 группы: контрольная группа (30 человек) - пациенты, получавшие только базисное лечение, включающее охранительный режим, лечебное питание, дезинтоксикационную и метаболическую терапию; опытная группа (27 человек) - пациенты, получавшие в комплексе с базисной терапией БАД «Фуколам»1 по 1 капсуле, содержащей 100 мг фукоидана из Fucus evanescens и 400 мг солей альгиновых кислот из бурых водорослей, внутрь два раза в сутки в течение 21 дня. С целью сравнения исследуемых показателей использовали кровь 22 здоровых доноров. Исследования выполнялись дважды: до начала лечения и после его окончания.
Экспериментальная часть работы выполнена на 40 мышах линии (СВАхС57В1/6) F1, а также на 80 неинбредных мышах массой 18-20 граммов, полученных из питомника РАМН “Столбовая”, находившихся на стандартной диете в боксированных помещениях с соблюдением всех правил и международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных работах (Страсбург, 1986).
____________________________________________________________________
|
Направления, методы и объем проведенных исследований
Таблица 1
№ | Направления исследования | Методы исследования | Объем исследования |
1 | Клинико-лабораторные исследования | 1.Анкетирование пациентов 2.Комплексное клиническое обследование больных в динамике 3.Расширенный мониторинг клинико-биохимических и инструментальных (УЗИ, фибросканирование) показателей | 57 чел. 57 чел. 57 чел. |
2 | Маркерная диагностика ХВГС | 4.Определение антител к HCV методом ИФА 5.Качественное определение RNA-HCV в крови методом ПЦР с генотипированием (Simmonds P., 1995) | 57 чел. 57 чел |
3 | Исследование показателей иммунного статуса | 6.Определение субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови методом проточной цитометрии (Qouzi A.A. et al., 2002) 7. Исследование основных классов иммуноглобулинов в сыворотке крови (IgG, IgM, IgA) методом радиальной иммунодиффузии (Manchini G. et al., 1964) 8. Определение уровня и размеров циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови (, 1981; с соавт., 1985) 9. Исследование фагоцитарной активности нейтрофилов крови в латекс-тесте (, 1990) | 114 проб 114 проб 114 проб 114 проб |
4 | Исследование показателей цитокинового статуса | 10.Исследование концентрации цитокинов в сыворотке крови и супернатантах лимфоцитов периферической крови (ЛПК) методом твердофазного ИФА с помощью диагностических наборов (Санкт-Петербург), согласно прилагаемой инструкции | 228 проб |
5 | Исследование показателей системы ПОЛ/АОЗ | 11.Определение малонового диальдегида (МДА) в эритроцитах крови спектрофотометрическим методом (, 2003) 12.Определение общей антиокислительной активности плазмы крови спектрофотометрическим методом (, 2003) | 114 проб 114 проб |
6 | Исследование влияния фукоидана из Fucus evanescens на воспалительный процесс в печени | 13.Исследование морфометрических показателей печени у мышей с экспериментальным хроническим токсическим гепатитом методом магнитно-резонансной томографии (МРТ) с использованием томографа высокого разрешения «PharmaScan 70/16 US» фирмы Bruker с программным обеспечением Para Vision 3.0.2 16.Определение массы печени у экспериментальных животных 17.Определение содержания аминотрансфераз (АлАТ, АсАТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), общего билирубина, глюкозы в сыворотке крови экспериментальных животных при помощи коммерческих наборов «Ольвейкс Диагностикум», Санкт-Петербург в соответствии с прилагаемой инструкцией. | 40 мышей линии (СВАхС57В1/6) F1 80 неинбредных мышей 80 неинбредных мышей |
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью прикладной программы “Statistica 7.0”. Использовали следующие методы статистического анализа: проверку нормальности распределения количественных признаков при малом числе наблюдений (W-критерий Шапиро-Уилка), проверку гипотез о равенстве дисперсий (F-критерий Фишера), кластеризацию признаков методом К-средних. Для оценки значимости различий при нормальном распределении количественных признаков использовали t-критерий Стьюдента (для независимых выборок и для двух связанных между собой вариационных рядов), при распределении, отличающемся от нормального - критерий Вилкоксона (W) для связанных вариационных рядов и критерий Манна-Уитни (U) для несвязанных меду собой выборок. Выборочные параметры, приводимые далее в таблицах, имеют следующие обозначения: среднее арифметическое (М), стандартное отклонение (σ), медиана (Me), нижний и верхний квартили (LQ-UQ), объем анализируемой группы (n), достигнутый уровень значимости (р). Уровень доверительной вероятности был задан равным 95%.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 |
