ДУДЕНКОВА Мария Евгеньевна
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ Анализ и стандартизация лекарственных форм тропоксина и ладастена - препаратов нейротропного действия
14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата фармацевтических наук
Москва – 2012
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии имени » РАМН (г. Москва).
Научный руководитель:
Кандидат фармацевтических наук
Официальные оппоненты:
Доктор фармацевтических наук, начальник лаборатории химико – фармацевтических препаратов № 1 Испытательного центра экспертизы качества лекарственных средств ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития России
Кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармацевтической и токсикологической химии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени Минздравсоцразвития России
Ведущая организация:
научный центр по безопасности биологически активных веществ» ( БАВ»)
Защита диссертации состоится « _____ » ___________ 2012 г. в _____ часов на заседании Диссертационного совета Д 208.040.09 при ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени Минздравсоцразвития России , строение 1, НИЦ.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени Минздравсоцразвития России г. Москва, Нахимовский проспект, 49.
Автореферат разослан « _____ » ______________ 2012 г.
Ученый секретарь
Диссертационного совета
доктор фармацевтических наук,
профессор
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Проблема головной боли – одна из самых распространенных в современной медицине, при этом значительная роль в возникновении головной боли принадлежит мигрени. В настоящее время существует много препаратов, созданных для облегчения или купирования приступов мигрени, но большинство из них малоэффективны (неспецифические анальгетики) или обладают серьезными побочными эффектами (препараты спорыньи).
Не менее актуальной проблемой в настоящее время является лечение астенических состояний различной этиологии. Для коррекции этих состояний применяются лекарственные средства различных фармакотерапевтических групп, в их числе и психостимуляторы. Вместе с тем для применяемых в мировой практике психостимуляторов характерно нежелательное последействие в виде истощающего влияния и существенного снижения резервных возможностей организма, узкий дозовый диапазон психостимулирующего действия, зависимость фармакологического эффекта как от вида осуществляемой деятельности, так и от исходного состояния субъекта, индивидуальная чувствительность, довольно высокая токсичность и способность вызывать лекарственную зависимость.
Выбор рационального курса лечения указанных заболеваний – сложная проблема, одним из путей решения которой является поиск и разработка новых эффективных и безопасных лекарственных препаратов с противомигренозной и антиастенической активностью.
В НИИ фармакологии имени РАМН были синтезированы лекарственные средства, одно из группы производных оксима тропинона – противомигренозное средство тропоксин, второе, производное адамантана – психостимулятор ладастен. Эффективность этих лекарственных средств подтверждена фармакологическими исследованиями, разработаны твёрдые дозированные лекарственные формы препаратов.
Необходимым условием внедрения новых лекарственных препаратов в медицинскую практику является разработка современных методик их анализа и установление экспериментально обоснованных норм, позволяющих поддерживать их качество на современном уровне эффективности и безопасности.
Цель исследования. Целью исследований являлось изучение физико-химических свойств, разработка современных методик фармацевтического анализа и стандартизации лекарственных форм препаратов нейротропного действия тропоксина и ладастена и создание соответствующих нормативных документов – проектов фармакопейных статей предприятия (ФСП).
Задачи исследования
1. Изучить физико-химические свойства и спектральные характеристики лекарственных форм тропоксина и ладастена для дальнейшей оценки их фармакопейных показателей качества;
2. Изучить хроматографическую подвижность исследуемых лекарственных средств, полупродуктов их синтеза, продуктов деструкции с помощью методов тонкослойной (ТСХ) и высокоэффективной (ВЭЖХ) хроматографии;
3. Разработать методики качественного и количественного анализа тропоксина и ладастена в лекарственных формах;
4. Провести изучение стабильности лекарственных форм тропоксина и ладастена, определить условия их хранения и сроки годности;
5. Установить экспериментально обоснованные нормы качества лекарственных форм тропоксина и ладастена, оформить проекты фармакопейных статей предприятия на эти препараты.
Научная новизна. Изучены физико-химические свойства и спектральные характеристики лекарственных форм тропоксина и ладастена, их хроматографическая подвижность методами изократической и градиентной ВЭЖХ. Подобраны оптимальные условия, позволяющие разделить действующие вещества, их промежуточные продукты синтеза, продукты разложения и неидентифицированные примеси. Показана возможность использования разработанных методов в качественном и количественном анализе, как субстанций, так и лекарственных форм тропоксина и ладастена.
Изучена стабильность таблеток тропоксина и ладастена, полученных прямым прессованием, и таблеток ладастена, полученных влажным гранулированием. Показано, что таблетки тропоксина, полученные прямым прессованием, и таблетки ладастена, полученные как прямым прессованием, так и влажным гранулированием, выдерживают хранение методом «ускоренного старения», предварительный срок годности составил 2 года.
Практическая значимость работы
Разработаны методики фармацевтического анализа лекарственных форм ладастена и тропоксина. По результатам проведенных исследований установлены научно-обоснованные нормы качества и сроки годности этих препаратов.
На основании проведенных исследований разработаны два проекта ФСП на лекарственные формы: таблетки тропоксина 50 мг, полученные прямым прессованием и таблетки ладастена 50 мг, полученные прямым прессованием.
Утверждена ФСП на ладастен, таблетки 50 мг (ФСП , ).
Апробация работы
Основные результаты проведенных исследований были представлены на межлабораторных конференциях НИИ фармакологии имени РАМН, на X, XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва 2003, 2010), 5-й Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва 2010).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, из них 2 в журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук
Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным планом НИИ фармакологии имени РАМН в рамках комплексной темы исследований: «Изучение механизмов эндо - и экзогенной регуляции функций центральной нервной системы. Разработка новых оригинальных нейропсихотропных средств», номер государственной регистрации 01.2.006.06601.
Личный вклад автора
Экспериментальные исследования выполнены автором лично. Изучены физико-химические свойства, разработаны и валидированы методики фармацевтического анализа лекарственных форм тропоксина и ладастена. Проведена статистическая обработка полученных результатов. Установлены научно обоснованные нормы качества изучаемых лекарственных препаратов и разработаны проекты ФСП.
Соответствие диссертации паспорту научной специальности
Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и 3 паспорта специальности 14.04.02 «фармацевтическая химия, фармакогнозия».
Основные положения, выносимые на защиту:
- Результаты изучения физико-химических, спектральных свойств и хроматографической подвижности лекарственных форм тропоксина и ладастена и обоснование использования полученных результатов в анализе качества этих препаратов;
- Методики качественного и количественного анализа лекарственных форм тропоксина и ладастена с валидационными характеристиками;
- Оценка стабильности лекарственных форм ладастена и тропоксина при различных режимах хранения;
- Экспериментальное обоснование норм качества лекарственных форм ладастена и тропоксина.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», двух глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы и трех приложений. Работа изложена на 202 страницах машинописного текста, содержит 49 таблиц и 23 рисунка. Библиография включает 158 источников, из них 107 отечественных.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Объекты и методы исследования
Исследования по разработке методик фармацевтического анализа лекарственных препаратов были проведены на следующих объектах: серийные образцы таблеток тропоксина 50мг, полученные прямым прессованием; образцы субстанции тропоксина, исходные и промежуточные продукты его синтеза (таблица 1); серийные образцы таблеток ладастена 50 мг, полученные прямым прессованием и влажным гранулированием; образцы субстанции ладастена, исходные и промежуточные продукты его синтеза (таблица 2).
В процессе исследований были использованы методы УФ-спектрофотометрии (УФ-СФМ), ТСХ, ВЭЖХ.
Для изучения спектральных характеристик использовали УФ-спектрофотометр UV-1700 (Shimadzu, Япония), Для хроматографического анализа в тонком слое сорбента использовали пластинки Kieselgel 60 F254 (Merck, Германия). Анализ методом ВЭЖХ проводили на жидкостном хроматографе Golden System (Beckman, США) со спектрофотометрическими детекторами с переменной длиной волны.
Таблица 1
Структурные формулы тропоксина и веществ-свидетелей
Тропоксин |
|
Исходные и промежуточные продукты синтеза тропоксина: 1- Тропинон (ТН); 2- Оксим тропинона (ОТН); 3- 3,4,5-триметоксибензойная кислота (ТМБК); 4- Этиловый эфир 3,4,5-триметокси-бензойной кислоты (ЭТМБК). |
|
Таблица 2
Структурные формулы ладастена и веществ-свидетелей
Ладастен |
|
Исходные и промежуточные продукты синтеза ладастена: 1- п-броманилин (ПБА); 2- N(2-адамантил)п-бромформанилид (АПБФА) |
|
Фармацевтический анализ и стандартизация лекарственной формы тропоксина
По внешнему виду таблетки тропоксина белого или белого со слегка кремоватым оттенком цвета плоскоцилиндрической формы без риски. Средняя масса и однородность по массе, а так же распадаемость серийных образцов соответствовали требованиям ГФ СССР XI издания.
Хроматографические методы в анализе чистоты таблеток тропоксин
Исследования хроматографической чистоты таблеток тропоксина проводили с помощью методов ТСХ и ВЭЖХ.
Анализ методом тонкослойной хроматографии проводили в системе растворителей хлороформ – спирт этиловый 95% – аммиака раствор концентрированный (7:3:0,1). В качестве экстрагента для извлечения тропоксина и примесей из таблеточной массы использовали хлороформ. Обнаружение зон адсорбции исследуемых соединений проводили в УФ-свете при длине волны 254 нм.
В этих условиях величины Rf тропоксина, ТН, ОТН, ТМБК и ЭТМБК составляли около 0,74; 0,54; 0,23; 0,11; 0,45 соответственно. На хроматограмме извлечения из плацебо зон адсорбции не наблюдалось.
Для проверки пригодности хроматографической системы готовили раствор с содержанием РСО тропоксина 0,4 мг/мл и образца примеси ТМБК 0,1 мг/мл. Пригодность хроматографической системы оценивали по следующим параметрам: на хроматограмме раствора ППХС должны четко делились пятна тропоксина и 3,4,5-триметоксибензойной кислоты; величина Rf основного пятна на хроматограмме испытуемого раствора составляла около 0,74.
В указанных условиях был проведен анализ серийных образцов таблеток тропоксина. На хроматографическую пластинку наносили 10 мкл извлечения из таблеток тропоксина (50 мкг тропоксина). Содержание посторонних примесей в серийных образцах таблеток оценивали визуально, путем сравнения величины и интенсивности зон адсорбции примесей и раствора сравнения образца ТМБК, нанесенного на хроматографическую пластинку в объеме, эквивалентном 0,25 и 0,5 мкг (0,5% и 1,0%).
В образцах таблеток тропоксина были обнаружены примесь ТМБК (Rf»0,11) и одна неидентифицированная примесь (Rf»0,90) в содержании менее 0,5% каждая. Суммарное содержание примесей не превышало 1,0%.
Хроматографическая подвижность тропоксина и свидетелей исходных и промежуточных продуктов синтеза (ТН, ОТН, ТМБК, ЭТМБК) с помощью метода ВЭЖХ была изучена в подвижных фазах, включавших ацетонитрил, метанол, воду, добавки фосфорной кислоты и 0,1М раствора натрия гидроксида, фосфатных буферных растворов с различными значениями рН.
В результате проведенных исследований были выбраны следующие условия хроматографирования: колонка Ultra C18 BDS 5мкм (250 x 4,6 мм), градиентный режим хроматографирования с применением подвижных фаз (ПФ): 0,02М фосфатного буфера с рН 7,65 и ацетонитрила (85:15, по объему) (ПФА); смесь ацетонитрил ацетонитрила, метанола и 0,02М фосфатного буфера с рН 7,65 (77:77:46, по объему) (ПФ Б). Режим градиента: соотношение ПФ А/ПФ Б от 100:0 до 0:100 за 6 минут, скорость потока – 1 мл/мин, температура колонки комнатная. Аналитическая длина волны (220 нм) лежала в области совпадения максимумов поглощения УФ-спектров тропоксина и примесей.
В выбранных условиях относительные времена удерживания ТН, ОТН, ТМБК, ЭТМБК (относительно тропоксина) составляли 0,50; 0,34; 0,40; 1,12 соответственно. Пределы обнаружения составляли: ТН-2,2 × 10-3 мкг; ОТН-4,0 × 10-4 мкг; ТМБК-4,5 × 10-4 мкг; ЭТМБК-5,25 × 10-4 мкг; тропоксин-1,0 × 10-3 мкг.
На модельных смесях тропоксина, свидетелей примесей и плацебо было показано, что пики извлечения из вспомогательных веществ не перекрывают пики тропоксина и примесей и их определению не мешают (рис. 1).
Рисунок 1. Хроматограмма раствора таблеток тропоксина (1 мг/мл) с добавлением веществ-свидетелей: 1-ОТН; 2-ТМБК; 3-ТН; 4-Тропоксин; 5- ЭТМБК (по 0,005 мг/мл каждого соединения).
Для проверки пригодности хроматографической системы готовили раствор с содержанием РСО тропоксина 0,01 мг/мл и образца примеси ТМБК 0,01 мг/мл. Пригодность хроматографической системы оценивали по эффективности хроматографической колонки, рассчитанной по пику тропоксина (не менее 5000 теоретических тарелок), коэффициенту асимметрии пика тропоксина (не более 1,5), относительному стандартному отклонению, рассчитанному для площадей пиков тропоксина в пяти параллельных измерениях (не более 2%) и tотн ТМБК относительно тропоксина (около 0,40).
Оценку содержания примесей в серийных образцах таблеток тропоксина проводили относительно раствора сравнения РСО тропоксина с концентрацией 0,01 мг/мл. В образцах таблеток были обнаружены две примеси (ТМБК и ОТН) и одна неидентифицированная примесь с относительным временем удерживания 0,64. Содержание единичной примеси не превышало 0,05%, суммарное содержание примесей не превышало 0,10%.
Количественное определение таблеток тропоксина
В качестве методов количественного определения тропоксина в таблетках опробованы методы УФ-СФМ и ВЭЖХ.
При разработке методики УФ-СФМ для извлечения тропоксина из таблеточной массы использовали воду очищенную, измерение оптической плотности проводили при длине волны 272 нм, соответствующей положению максимума водных растворов тропоксина.
Извлечение из компонентов плацебо не мешало проведению анализа, поскольку при аналитической длине волны (272 нм) электромагнитное излучение оно практически не поглощало.
На модельных смесях тропоксина и плацебо показано, что линейная зависимость оптической плотности растворов тропоксина от концентрации наблюдается в интервале от 0,001 мг/мл до 0,1 мг/мл; коэффициент корреляции 0,9998. При концентрации тропоксина 0,02 мг/мл оптическая плотность составляла около 0,573, эта концентрация была выбрана как рабочая.
Правильность и сходимость результатов определения оценивали путем анализа модельных смесей плацебо с известным содержанием тропоксина (около 100% от рабочей концентрации). Относительная погрешность методики, определенная на модельных смесях, не превышала 1,0% (см. табл. 3).
Анализ серийных образцов таблеток тропоксина показал, что содержание действующего вещества во всех сериях таблеток соответствовало требованиям ГФ СССР XI издания (50 мг ± 7,5%) и составляло от 0,04978 г до 0,05115 г тропоксина (см. табл. 4).
Таблица 3.
Результаты количественного определения тропоксина в модельных
растворах методом УФ-СФМ
Взято тропоксина, г | 0,2004 | 0,2007 | 0,1994 | 0,2005 | 0,2003 |
Найдено тропоксина, г | 0,2004 | 0,2006 | 0,1993 | 0,2006 | 0,2005 |
Метрологические характеристики (Р=95%, n=5) |
|
|
|
|
|
Таблица 4
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 |
