Особенности ИЛ-8-продуцирующей способности нейтрофильных гранулоцитов в норме и при патологии (стр. 2 )

В результате проведенного комплексного исследования нами были установлены дефекты в функционировании системы НГ при ХГ. (Табл. 1.). Выявлено повышение (в 1,7 раза в обеих группах, относительно контроля) содержания CD16+-НГ. У больных 1-й группы в 1,5 раза по сравнению с контролем увеличено количество CD95+-НГ. В обеих группах отмечаются также выраженные тенденции к увеличению количества CD11b+-НГ.

Таблица 1.

Фенотип и функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов при хроническом активном гастрите в сравнении со здоровым контролем

Показатель	Контроль (n=29)	Группа 1 Поверхностное воспаление (n=10)	Группа 2 Деструктивное воспаление (n=10)
Нейтрофилы, % Абсолютн. в мм3	55,9±2,81 3071±203,7	58,2±1,07 3194±333,8	53,4±3,57 2738±615,1
CD11b-НГ, % Абсолютн. в мм3	42,06±3,4 1320±223	52,2±5,28 1627±169,2	56,8±4,62 1552±382,5
CD16-НГ, % Абсолютн. в мм3	41,56±3,12 1615±241,6	69,2±4,211) 2179±208,9	72,6±7,061) 1867±324
CD95-НГ, % Абсолютн. в мм3	22,94±1,76 625,1±106,2	34,6±4,921) 1068±160,4	27,4±4,57 747,5±193,9
ФАН, %	51,39±2,55	53,6±4,97	55,4±3,03
NBTсп, %ФПК	2,0	1,01)	1,01)
NBTст, %ФПК	7,0	1,01)	1,01)
КМ, усл. ед.	2,0	1,01)	1,01)

Примечание: достоверность различий между группами оценивалась с помощью критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони, для %ФПК и КМ – с использованием непараметрического критерия Крускала - Уоллиса и Данна. 1) - Р<0,05 в сравнении с контрольной группой.

Увеличение содержания НГ, несущих рецепторы адгезии (CD11b), антителозависимой цитотоксичности (CD16) и активационного рецептора, способствующего запуску апоптозной программы (CD95), в, можно рассматривать как стереотипное реагирование на имеющийся воспалительный процесс в СОЖ. Ранее установлено, что уровни реагирования рецепторного аппарата при воспалении в слизистой оболочке различных отделов ЖКТ могут в 1,5-2 раза превышать средние параметры нормы [ и др., 2004; , 2000]. Активация рецепторного аппарата НГ пациентов с ХГ не сопровождалась усилением их функциональных способностей. %ФАН не отличался от уровня контроля, что можно рассматривать как неадекватное реагирование на воспалительный процесс. Наиболее выраженные дефекты функционирования НГ при исследуемой патологии нами были выявлены при анализе активности NADPH-оксидаз. %ФПК у данной категории больных в обеих группах был снижен в 2 раза в спонтанном NBT-тесте (р<0,05). За исключением 2 больных, НГ остальных не были способны адекватно реагировать на дополнительную нагрузку in vitro: инкубация НГ с ОЗ (стимулированный NBT-тест) не приводила к увеличению %ФПК, в результате чего %ФПК в стимулированном NBT-тесте был в 7 раз (р<0,05) ниже аналогичного показателя в контрольной группе (Табл. 1.). Таким образом, изучение фенотипических и функциональных характеристик НГ при ХГ независимо от степени выраженности воспаления в СОЖ выявило однонаправленные изменения исследуемых показателей от контроля с отсутствием достоверных различия между группами больных.

Установлено, что ИЛ-8 играет важную роль в развитии Нр-ассоциированных заболеваний [, 1999; , , 2000; J. E. Crabtree et al., 1994]. НГ, пришедшие в места колонизации Нр, также продуцируют ИЛ-8, увеличивая локальный пул этого хемокина в СОЖ и поддерживая, тем самым, интенсивность клеточного ответа на бактериальную обсемененность [, , 2000; D.A. Peura, 1997]. Анализ полученных результатов выявил значительное повышение как спонтанной, так и ЛПС-индуцированной продукции ИЛ-8 НГ при ХГ. Так, уровень спонтанной продукции ИЛ-8 НГ составил 1139±141,3 пг/мл/106кл., что в 5,5 раз выше, чем у здоровых лиц (р<0,001). Концентрация ИЛ-8 в супернатанте после ЛПС-стимуляции НГ составила 1752±169,9 пг/мл/106кл., что в 5,4 раз выше аналогичного показателя в контрольной группе (р<0,001) и в 1,5 превышает уровень спонтанной продукции ИЛ-8 НГ у данных пациентов (р<0,01). Известно, что способность НГ отвечать на стимулы определяется исходным состоянием клеток, которое обусловлено предварительным воздействием на них в кровотоке различных биологически активных медиаторов. Установлено, что при воспалительных заболеваниях желудка (гастриты, язвенная болезнь) преобладают провоспалительные цитокины [ и др., 2002; T. Shimoyama et al., 1998], которые, возможно, и обуславливают значительное усиление ИЛ-8-продуцирующей способности НГ. Повышение секреции провоспалительных цитокинов периферическими НГ отмечается в литературе при воспалительных процессах в слизистой кишечника [S. Nikolaus et al., 1998]. Не исключено, также, что способность к повышенной спонтанной секреции ИЛ-8 НГ может быть генетически детерминирована у этих лиц, что может предрасполагать к развитию ИЛ-8-опосредованных воспалительных заболеваний. Существуют работы, показывающие связь между полиморфизмом гена IL-8 и патологией. Установлено, что комбинация генотипа IL-8-251TT и IL-10-819TT связана с высокой вероятностью персистенции инфекции Нр [D. Hacking et al., 2004; A. Heinzmann et al., 2004; J. Hull et al., 2000; O.A. Ross et al., 2004; A.C. van der Kuyl et al., 2004].

При изучении ИЛ-8-секретирующей активности НГ в зависимости от выраженности воспаления и наличия эрозивно-язвенных повреждений СОЖ было выявлено, что существенно повышенный уровень спонтанной продукции ИЛ-8 НГ по сравнению со здоровыми лицами наблюдается у пациентов, как с поверхностным воспалением СОЖ, так и с деструктивным, не отличаясь между этими группами (Табл. 2).

Таблица 2.

Продукция ИЛ-8 нейтрофильными гранулоцитами в зависимости от выраженности воспаления при хроническом активном гастрите (M±m)

Наименование групп	Спонтанная продукция пг/мл/106кл	Спонтанная продукция Кол-во людей (в %)	ЛПС-индуцированная продукция пг/мл/106кл	Индекс стимуляции	% ответа на ЛПС
Здоровые (n=29)	207,2±21,49	89,1	323,1±51,61 1)	1,63±0,3	58,6
Группа 1. Поверхностное воспаление (n=10)	1086±175,31)	100	2088±163,41,2,3)	2,08±0,39	90
Группа 2. Деструктивное воспаление (n=10)	1199±235,9 1)	100	1248±230,71,2,4)	0,94±0,21	50

Примечание: достоверность различий между группами оценивалась с помощью критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони: 1) - р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ здоровых лиц; 2) - р<0,05 в сравнении со ЛПС-индуцированной продукцией ИЛ-8 НГ здоровых лиц; 3) - р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ1-й группы; 4) - р<0,05 в сравнении с ЛПС-индуцированной продукцией НГ1-й группы.

В то же время нами были показаны статистически значимые различия в ЛПС-индуцированной продукции ИЛ-8 НГ при ХГ в зависимости от наличия эрозивно-язвенных повреждений СОЖ. Установлено, что НГ большинства больных (в 90% случаев) с поверхностным воспалением СОЖ (группа 1) сохраняют способность отвечать на стимуляцию ЛПС, увеличивая концентрацию продуцируемого ИЛ-8 до 2088 пг/мл/106кл., что в 1,9 раз выше спонтанно продуцируемого ИЛ-8 НГ в данной группе и в 6,5 раз выше ЛПС-индуцированной продукции ИЛ-8 НГ здоровых лиц (р<0,05). Индекс стимуляции составил 2,08±0,39. При этом добавление ЛПС в культуральную среду к НГ больных с деструктивным воспалением СОЖ (группа 2) только в 50% случаев незначительно стимулировало увеличение продукции ИЛ-8 НГ, вследствие чего уровень ЛПС-индуцированной продукции ИЛ-8 НГ практически не отличался от спонтанной продукции ИЛ-8 НГ в этой группе - 1248±230,7 и 1199±235,9 пг/мл/106кл, соответственно.

Отсутствие ответа на ЛПС в данной группе с более выраженным и длительным воспалительным процессом может быть обусловлено гиперактивацией НГ и, как следствие, истощением внутриклеточных запасов ИЛ-8. Известно, что деструктивный характер воспаления очень часто связан с типом патогенного штамма Hp [, , 2003; N. Figura, 1996]. Именно при эрозивно-язвенных изменениях СОЖ выявляется высокая частота (79,5%) ульцерогенных штаммов cagA+vacA+-H. Pylori [, , 2004]. Установлено также, что у лиц с более выраженной воспалительной реакцией, ассоциированой с язвенной болезнью, эрозивными процессами в СОЖ гораздо чаще, чем у больных с ХГ выделяются штаммы Нр с выраженной нейтрофил-активирующей способностью [D. Danielsson et al., 2000; H. Rautelin et al., 1993, 1994].

Изучая способность НГ продуцировать ИЛ-8 и их функциональную активность при ГСО, мы выбрали 2 различных варианта гнойно-септической патологии: ОДП, как модель системного воспаления и абсцессы брюшной полости - локальное воспаление, как модель малой гнойной инфекции. Комплексное исследование периферических НГ у этих больных также выявило наличие различных клеточных дисфункций. У большинства пациентов обеих групп наблюдался выраженный нейтрофилез с достоверным увеличением как процентного, так и абсолютного содержания НГ. У пациентов с ОДП было выявлено повышенное содержание (в 1,5 раза) CD11b+-, CD16+-, CD95+-НГ относительно контроля. Абсолютное количество НГ, экспрессирующих вышеуказанные рецепторы, было значительно выше, чем у здоровых лиц: в 3,4, 3,0 и 3,8 раза, соответственно (р<0,001). У пациентов с абсцессами активация рецепторного аппарата НГ была менее выраженной: наблюдались тенденции к увеличению содержания НГ, несущих CD11b- и CD16-рецепторы, а абсолютное количество CD11b+-, CD16+-, CD95+-НГ было достоверно выше контрольных значений в 2,4, 2,1 и 1,8 раза (р1<0,01, р2,3<0,05), соответственно (Табл. 3.). Активация рецепторного аппарата при ГСО сопровождалась повышенной спонтанной активностью мембранных оксидаз, что проявилось выраженной тенденцией к увеличению %ФПК в спонтанном NBT-тесте у пациентов обеих групп. Несмотря на повышенную экспрессию рецепторов адгезии, цитотоксичности и апоптоза и повышенную спонтанную активность NADPH-оксидаз, НГ пациентов с ГСО обладали более слабыми фагоцитарными способностями по сравнению с НГ здоровых лиц: %ФАН был снижен на 21,6% при ОДП и на 31,9% при абсцессе (р<0,05 и р<0,01, соответственно). Нами выявлены различия в активности кислородзависимых микробицидных систем НГ в нагрузочных тестах in vitro с ОЗ между двумя исследуемыми группами в зависимости от тяжести ГСО.

Таблица 3.

Фенотип и функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов пациентов с гнойно-септическими хирургическими осложнениями в сравнении со здоровым контролем

Показатель	Здоровые лица (контроль) (n=29)	Острый деструктивный панкреатит (n=16)	Абсцессы брюшной полости (n=12)
		М±m	P	М±m	P
Нейтрофилы, % Абсолютн. в мм3	55,9±2,81 3071±203,7	76,0±5,4 7302±1246	P=0.002 P=0.000	73,14±5,22 7408±2040	P=0.005 P=0.001
CD11b-НГ, % Абсолютн. в мм3	42,06±3,4 1320±223	61,17±10,79 4429±833,8	P=0.033 P = 0.000	55,57±11,16 3166±890,5	P=0.129 P=0.008
CD16-НГ, % Абсолютн. в мм3	41,56±3,12 1615±241,6	60,83±6,22 4786±935,8	P=0.006 P=0.000	56,71±12,92 3333±1142	Р>0,05 P=0.035
CD95-НГ, % Абсолютн. в мм3	22,94±1,76 625,1±106,2	32,67±5,84 2344±386,9	P=0.040 P=0.000	22,71±9,97 1149±268,1	Р>0,05 P=0.037
ФАН, %	51,39±2,55	40,29±3,74	P=0.031	35,0±2,74	P=0.002
NBTсп, %ФПК	3,16±0,42	5,43±1,59	P=0.061	5,57±1,77	P=0.063
NBTст, %ФПК	8,11±1,21	6,2±3,02	Р>0,05	19,57±6,49	P=0.012
КМ, усл. ед.	3,61±0,76	1,04±0,25	Р>0,05	9,05±5,95	Р>0,05

Примечание: достоверность различий по отношению к контрольной группе оценивалась с помощью t-критерия Стьюдента.