Особенности ИЛ-8-продуцирующей способности нейтрофильных гранулоцитов в норме и при патологии (стр. 3 )

Так, у пациентов с абсцессами (более легкое течение патологического процесса) наблюдалась стимуляция кислородзависимого метаболизма НГ в ответ на ОЗ (в 2,5 раз по сравнению с контролем, р<0,05).В то же время при ОДП (более тяжелое течение), на фоне повышенной спонтанной продукции супероксиданиона, выявлена значительная депрессия кислородзависимых микробицидных систем в ответ на дополнительную стимуляцию НГ in vitro, что количественно отразилось на КМ, который снизился на 71,2% по сравнению с контролем. Таким образом, более тяжелое течение ГСО сопровождалось феноменом дезадаптации НГ, - блокировалась их способность к адекватному ответу на дополнительную нагрузку.

Анализируя ИЛ-8-продуцирующую активность НГ при ОДП, нами была выявлена секреция ИЛ-8 НГ без их дополнительной стимуляции в 100% случаев. При этом у 12 пациентов (75%) средний уровень спонтанной продукции ИЛ-8 НГ составил 378,4±30,69 пг/мл/106кл., что в 1,5 раза превышает аналогичный показатель у здоровых лиц (р<0,001). У 2-х пациентов уровень спонтанной продукции ИЛ-8 был значительно ниже, чем у большинства больных ОДП (58,7 и 63,2 пг/мл/106кл.), а у еще 2-х – существенно выше (2032 и 2070 пг/мл/106кл.). У 11 пациентов (91,7%) с абсцессами спонтанная продукция ИЛ-8 НГ не отличалась от контроля – 239,9±52,92 пг/мл/106кл., только у 1 больного уровень спонтанной продукции ИЛ-8 НГ составил 2500 пг/мл/106кл. Однако, в данной группе, как и при ОДП, спонтанная секреция ИЛ-8 НГ наблюдалась в 100% случаев. Возможно, что выявленное повышение спонтанной продукции ИЛ-8 НГ у большинства пациентов с ОДП обусловлено их предварительной активацией в кровотоке как ЛПС, так и провоспалительными цитокинами, так как известно, что ОДП в отличие от абсцесса, где имеется локально-ограниченный воспалительный процесс, сопровождается системным воспалительным ответом.

Кроме различий в спонтанной продукции, наблюдались также различия и в характере ответа НГ на стимуляцию ЛПС между этими группами (Рис. 3).

Рис. 3. Изменение продукции ИЛ-8 нейтрофильными гранулоцитами под влиянием ЛПС в норме и при гнойно-септических осложнениях. По вертикали: концентрация ИЛ-8 (пг/мл) в супернатанте; 1) - р<0,05; в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ здоровых лиц; 2) - р<0,05; в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ при абсцессе.

Было установлено, что НГ у 80% пациентов с абсцессами и только у 35,7% с ОДП “отвечали” на ЛПС, в отличие от 58,6% в контроле. В связи с этим, средний уровень ЛПС-индуцированной секреции ИЛ-8 НГ у пациентов с абсцессами, превышал спонтанную в 1,7 раз и составил 402,6±47,07 пг/мл/106кл. А так как у большинства пациентов с ОДП НГ реагировали не увеличением продукции ИЛ-8 в ответ на ЛПС, а ее снижением, то средний уровень ЛПС-индуцированного ИЛ-8 при ОДП не отличался от спонтанного у данной категории больных, составив 363±42,33 пг/мл/106кл.

Наши данные совпадают с результатами, полученными ранее Marie C. et al. [1998], где показана сниженная продукция ИЛ-8 НГ в ответ на ЛПС при развитии синдрома системного воспалительного ответа инфекционного и неинфекционного генеза. Установлено, что не инфекционный, а именно воспалительный компонент септического синдрома является существенным для изменения механизма синтеза ИЛ-8 НГ. Предполагают, что одной из причин редуцированного уровня высвобождения ИЛ-8 НГ в ответ на ЛПС при системном воспалении является находящийся в кровотоке ИЛ-10, обладающий супрессирующим воздействием на функционирование НГ [F. Randow et al., 1995].

Одной из задач настоящего исследования входило изучение влияния пептидов: γ-D-глутаминил-L-триптофана (Бестима, БС) и глюкозаминилмурамилдипептида (ГМДП), являющихся основой эффективных в отношении НГ иммунотропных препаратов, на секрецию ИЛ-8 НГ в норме и при патологии в эксперименте in vitro для возможного предварительного обоснования их применения при дисфункциях НГ, связанных с их цитокин-секретирующей активностью.

Изучая влияние БС на продукцию ИЛ-8 НГ здоровых лиц, мы установили, что добавление пептида в инкубационную среду без предварительной ЛПС-активации НГ не влияло на уровень продуцируемого ИЛ-8 (Рис. 4).

Рис. 4. Влияние Бестима на продукцию ИЛ-8 нейтрофильными гранулоцитами здоровых лиц. По вертикали: концентрация ИЛ-8 в пг/мл/106кл. Контроль – спонтанная продукция ИЛ-8; ЛПС – 10 нг/мл; Бестим - 0,1 мкг/мл.

В то же время было отмечено увеличение продукции ИЛ-8 НГ при добавлении БС после предварительного 30-минутного праймирования НГ здоровых лиц ЛПС. При этом уровень продуцируемого ИЛ-8 после добавления БС значительно превышал значения, полученные только при добавлении ЛПС в инкубационную среду: концентрация ИЛ-8 возрастала в среднем до 308,2±65,53 пг/мл, что превышало спонтанную продукцию ИЛ-8 НГ в 2,3 раза (p<0,05), а ЛПС-индуцированную продукцию без БС в 1,7 раз. При этом НГ секретировали ИЛ-8 в 100% случаев. Таким образом, БС, не влияя на продукцию ИЛ-8 интактными НГ здоровых лиц, способен оказывать стимулирующее воздействие на ЛПС-индуцированную продукцию ИЛ-8 НГ.

При изучении влияния БС на продукцию ИЛ-8 НГ при патологии установлены следующие особенности (Табл. 4). Аналогично тому, что было отмечено у здоровых лиц (контроль), при ГСО (ОДП, абсцессы) БС проявлял свое действие только после предварительной ЛПС-стимуляции НГ, не оказывая собственного влияния на ИЛ-8-продуцирующую способность клеток. Однако в отличие от контроля, где наблюдалось усиливающее действие БС на ЛПС-индуцированную продукцию ИЛ-8 НГ, при ГСО БС проявлял супрессирующий эффект. У больных ОДП было выявлено снижению продукции ИЛ-8 НГ в 1,9 раз (р<0,05) при добавлении БС после ЛПС. При абсцессах также наблюдалось выраженное и статистически значимое снижение ЛПС-индуцированной продукции ИЛ-8 НГ под влиянием БС: при введении ЛПС в инкубационную среду продукция ИЛ-8 НГ составила 402,6±87,07, что в 1,7 выше спонтанной, а добавление БС после ЛПС снижало концентрацию ИЛ-8 в супернатанте до 189,1±41,01 пг/мл/106 (р<0,05).

Таблица 4.

Влияние бестима на спонтанную и ЛПС-индуцированную продукцию ИЛ-8 нейтрофильными гранулоцитами при патологии (М±m)

№ п/п	Группы	1. Контроль n=10	2. ОДП n=10	3. Абсцесс n=11	4. Хронический гастрит n=10
1.	Спонтанная	1.1 135,6±43,47	2.1 369,5±26,261)	3.1 239,9±32,92	4.1 1228±151,91)
2.	ЛПС-индуцированная (10 нг/мл)	1.2 181,8±48,3	2.2 387,7±69,65	3.2 402,6±47,073)	4.2 1485±371,21,5)
3.	Бестим (0,1 мкг/мл)	1.3 124,2±73,89	2.3. 447,5±78,04	3.3. 229,9±61,73	4.3 772,3±83,984,5)
4.	ЛПС + Бестим	1.4. 308,2±65,531)	2.4. 199,6±33,072,6)	3.4 189,1±41,017)	4.4. 1507±536,45)

Примечание: достоверность различий в группах оценивалась с помощью критерия Стьюдента с поправкой Бонферроне: 1)-р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ контрольной группы (группа 1.1.); 2)-р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ при ОДП (группа 2.1.); 3)-р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ при абсцессе (группа 3.1.); 4)-р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ при хроническом гастрите (группа 4.1.); 5)-р<0,05 в сравнении с ЛПС-индуцированной продукцией ИЛ-8 НГ контрольной группы (группа 1.2.); 6)-р<0,05 в сравнении с ЛПС-индуцированной продукцией ИЛ-8 НГ при ОДП (группа 2.2.); 7)-р<0,05 в сравнении с ЛПС-индуцированной продукцией ИЛ-8 НГ при абсцессе (группа 3.2).

В то же время при ХГ, где уровень как спонтанной, так и ЛПС-индуцированной продукции ИЛ-8 НГ значительно превышает аналогичные показатели здоровых лиц, БС без предварительного праймирования ЛПС на 60% супрессирует продукцию ИЛ-8 НГ: 1228±151,9 пг/мл/106 составляла спонтанная продукция ИЛ-8 НГ при ХГ и 772,3±83,98 пг/мл/106 после добавления БС в инкубационную среду (р<0,05). При этом БС не оказывает никакого влияния на ЛПС-индуцированную продукцию ИЛ-8 НГ при данной патологии.

Анализ результатов, полученных при изучении влияния ГМДП на секрецию ИЛ-8 НГ здоровых лиц, позволил выявить различия в механизмах действия двух исследуемых пептидов – ГМДП и БС. В отличие от БС при добавлении в инкубационную среду ГМДП было установлено усиление продукции ИЛ-8 НГ без их предварительной стимуляции ЛПС (Рис. 5). В данном случае регистрировалось повышение уровня ИЛ-8 в среднем до 271,4±35,61 пг/мл/106кл (максимум 587,7 пг/мл/106кл), что в 2 раза больше контрольных значений. Однако при одновременной инкубации НГ с ГМДП и ЛПС продукция ИЛ-8 не отличалась от показателей ЛПС-индуцированной продукции ИЛ-8 НГ (без ГМДП) и была ниже, чем при инкубации с одним ГМДП. Возможно, это связано с конкуренцией ГМДП с ЛПС за один и тот же рецептор связывания. Известно, что одним из типов поверхностных рецепторов, способных связывать мурамилдипептиды, является рецептор ЛПС – CD14 антиген [B. Weidemann et al., 1997].

Рис. 5. Влияние ГМДП на продукцию ИЛ-8 нейтрофильными гранулоцитами здоровых лиц. Контроль – спонтанная продукция ИЛ-8; * - р<0,05 в сравнении с контролем.

Исследуя влияние ГМДП на способность НГ секретировать ИЛ-8 при патологии, мы, как и в случае с БС, смогли выявить определенные различия в результирующих эффектах ГМДП (Табл. 5).

Таблица 5.

Влияние ГМДП на спонтанную и ЛПС-индуцированную продукцию ИЛ-8 нейтрофильными гранулоцитами при патологии (М±m)

№ п/п	Группы	1. Контроль n=10	2. ОДП n=12	3. Абсцесс n=10	4. Хронический гастрит n=15
1.	Спонтанная	1.1 135,6±43,47	2.1 369,5±26,261)	3.1 263,1±57,3	4.1 1274±155,41)
2.	ЛПС-индуцированная (10 нг/мл)	1.2 181,8±48,3	2.2 387,7±49,655)	3.2 404,5±43,321,3,5)	4.2 1794±136,14)
3.	ГМДП (0,1 мкг/мл)	1.3 271,4±35,611)	2.3. 235,5±51,132,6)	3.3. 256,9±52,067)	4.3 1934±156,21,4)
4.	ЛПС + ГМДП	1.4. 182,6±41,02	2.4. 380,8±66,02	3.4 207,8±37,577)	4.4. 1919±258,81,4)

Примечание: достоверность различий в группах оценивалась с помощью критерия Стьюдента с поправкой Бонферроне: 1)-р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ контрольной группы (группа 1.1.); 2)-р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ при ОДП (группа 2.1.); 3)-р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ при абсцессе (группа 3.1.); 4)-р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ при хроническом гастрите (группа 4.1.); 5)-р<0,05 в сравнении с ЛПС-индуцированной продукцией ИЛ-8 НГ контрольной группы (группа 1.2.); 6)-р<0,05 в сравнении с ЛПС-индуцированной продукцией ИЛ-8 НГ при ОДП (группа 2.2.); 7)-р<0,05 в сравнении с ЛПС-индуцированной продукцией ИЛ-8 НГ при абсцессе (группа 3.2.).