Максимальное количество укоренившихся побегов сорта Тютчевская было получено на среде Ли и де Фоссарда. По количеству корней на одно растение и по длине корней лучшей оказалась среда МС, разбавленная вдвое минеральной основой.
У сорта Лада образование корней отмечали лишь на среде МС, разбавленной вдвое. Средний процент укоренения составил 21,4. У подвоя груша 4 и вида груша березолистная ни в одном из предложенных вариантов сред укоренения не отмечали
На всех испытанных средах у всех форм груши отмечали гибель укорененных и неукорененных побегов, которая начиналась с апикального некроза.
Поэтому оптимальным сроком культивирования микропобегов на питательной среде для укоренения было четыре недели. Появление корней начинается через 1 – 3 недели и если в этот срок корни не образовывались, то происходило подсыхание среды и некроз тканей экспланта.
8 Определение типа, концентрации и способов аппликации
препаратов с ауксиновой активностью на ризогенез микрорастений
В результате экспериментов было установлено, что у побегов сорта Тютчевская наибольшую ризогенную активность вызывало введение в среду НУК в концентрации 1,0 мг/л. Средний процент укоренения составил 66,7. В основании побегов наблюдали рост небольшого количества каллуса. Образование максимального количества корней на одно растение вызывало введение в состав питательной среды 1,0 мл/л ИМК (2,7 шт.) и 0,5 мг/л НУК (2,9 шт.). Рост наиболее длинных корней отмечали в присутствии в среде 0,5 мг/л НУК, длина которых составила в среднем 16,2 мм. При добавлении сочетания ИМК и ИУК по 0,5 мг/л средняя длина корней достигала 21,2 мм. Введение сочетания НУК и ИУК (по 0,5 мг/л) приводило к образованию корней первого порядка. Введение ИУК в концентрации 0,5 и 1,0 мг/л укоренения побегов не стимулировало.
При изучении способов аппликации лучшие результаты были получены при обработке микрорастений груши сорта Тютчевская ИМК-содержащей пудрой. Замачивание в спиртовом растворе ИМК (50 мг/л) в течение 10 секунд не приводило к образованию корней.
У сорта Лада при всех испытанных способах индукции образования корней наибольшее среднее количество укоренившихся побегов получили при введении в питательную среду сочетания ИМК и ИУК в концентрации 0,5 мг/л - 48,6%. Введение в среду тех же препаратов в концентрации 1,0 мг/л образования корней не вызывало. При замачивании микропобегов груши в растворах ИМК и после обработки ауксинсодержащей пудрой процент укоренения был ниже и колебался от 1,5 до 29,4.
У подвоя груша 4 из восьми вариантов стимуляторов корнеобразования и четырех способов аппликации наибольший процент укоренения (41,2%) дало введение в питательную среду 1,0 мг/л НУК. В этом же варианте образовывалось наибольшее количество корней – 2,1 штук и самые длинные корни – до 7,7 мм.
У груши березолистной укоренения не наблюдали ни в одном из испытанных вариантов.
Замачивание микропобегов сорта Орловская летняя в спиртовом растворе ИМК в течение 10 секунд обеспечивало корнеобразование в 52,9% случаев.
Таким образом, из всех испытанных способов стимуляции корнеобразования наиболее существенное влияние на интенсивность ризогнеза оказали введение в питательную среду НУК (1,0 мг/л) и ИМК (1,0 мг/л), а также сочетаний ИМК и НУК (по 0,5 мг/л), НУК и ИУК (по 0,5 мг/л), ИМК и ИУК (по1,0 мг/л). Процесс замачивания в водном растворе ИМК и обработка ауксинпудрой также положительно сказались на процессе укоренения.
9 Адаптация пробирочных растений груши к нестерильным
условиям
С целью повышения приживаемости пробирочных растений груши in vitro в нестерильных условиях изучали влияние двух препаратов элиситорного действия – Эль-1 (аналог эмистима) и Экост 1/3. Контролем служили адаптация микрорастений без элиситоров (табл. 8).
Таблица 8 - Приживаемость микрорастений груши на этапе адаптации (%)
Форма | Элиситоры | Без элиситоров (контроль) | |
Эль-1 | Эль-1+Экост 1/3 | ||
Тютчевская | 43,7 | 37,5 | 26,6 |
Лада | 25,0 | * | 20,0 |
Орловская летняя | 15,3 | * | 10,0 |
Груша 4 | 53,8 | 69,2 | 0 |
Fф>F01 |
* - нет данных
Показано, что у сорта Тютчевская наибольшая приживаемость растений в нестерильных условиях была при внесении в субстрат препаратом Эль-1 - 43,7%. Контрольный вариант показал наименьшую приживаемость – 26,6%.
У подвоя груша 4 при совместном воздействии элиситоров успешно адаптировались к нестерильным условиям наибольшее число растений - 69,2%, в то время как в контрольном варианте не прижилось ни одного растения.
У сортов Лада и Орловская летняя препарат Эль-1 оказал положительное влияние на адаптацию растений in vitro к нестерильным условиям.
В результате эксперимента были получены корнесобственные растения груши изучаемых сортов и форм.
Таким образом, применение иммуностимулирующих препаратов на этапе адаптации оказало положительное влияние, повысив выход адаптированных растений груши и тем самым увеличив выход посадочного материала.
10 Метод микропрививки в процессе клонального
микроразмножения груши
Для повышения выхода растений груши в процессе клонального микроразмножения был использован метод микропрививки. Для лучшего срастания привоя и подвоя срезы последнего обрабатывали растворами аскорбиновой кислоты (50 мг/л), ДИЕКА (2 г/л) и ИМК (5 мг/л). У сорта Тютчевская при обработке срезов подвоя аскорбиновой кислотой наблюдали максимальную приживаемость прививки – 91,7% (табл. 9).
У сорта Лада при использовании раствора аскорбиновой кислоты (50 мг/л) выход жизнеспособных растений был выше в два с лишним раза по сравнению с этапом адаптации – 55%.
При использовании микропрививки у гибрида 40-4 наибольший выход растений (65%) получили при обработке срезов подвоев раствором аскорбиновой кислоты.
Признаком срастания привоя и подвоя было начало роста привоя. В течение месяца формировались побеги длиной до 2-4 см. Полученные растения высаживали в весенние теплицы.
Таблица 9 - Выход растений при различных способах выращивания (%)
Сорт, форма | Микропрививка | Адаптация укорененных in vitro микропобегов | ||
Обработка срезов аскорбиной кислотой | Обработка срезов ИМК | Обработка срезов ДИЕКА | ||
Тютчевская | 91,7 | 83,3 | 80,0 | 43,7 |
Лада | 55,0 | 10,0 | * | 25,0 |
40-4 | 65,0 | 20,0 | * | 0 |
Fсорта>F01 Fпрививки>F05 |
* - нет данных
Таким образом, в результате проведенных исследований показана возможность применения метода микропрививки на груше. С помощью этого метода можно получить жизнеспособные растения тех форм, которые плохо укоренялись и проходили этап адаптации (например, гибрид 40-4).
11 Депонирование изолированных микропобегов груши in vitro
Влияние концентрации минерального состава питательной среды. При изучении влияния концентрации минерального состава среды Мурасиге-Скуга было показано, что максимальный срок хранения у сорта Тютчевская – шесть месяцев обеспечивали среды с разбавленной минеральной основой в 4 и 8 раз. Минимальный срок – 5 месяцев на среде, разбавленной в 2 раза. В процессе хранения микропобегов пролиферации не наблюдали. После хранения микропобеги высаживали на среду Мурасиге-Скуга стандартного минерального состава и культивировали в течение четырех недель в условиях свекомнаты, где получили коэффициент размножения 5,9. Растения были жизнеспособны.
У побегов груши березолистной максимальный срок хранения составил 16 месяцев на среде с разбавленной в 4 раза минеральной основой. В процессе депонирования коэффициент размножения составил 7,3. Минимальный срок хранения 5 месяцев при разбавлении минеральной основы в два раза. Микропобеги также пролиферировали и коэффициент размножения составил 4,1. После пересадки в условия светокомнаты растения были способны к дальнейшему развитию. У этиолированных побегов отмечали некроз тканей, однако у основания образовывались дополнительные побеги, и коэффициент размножения достигал 2,6.
У сорта Аннушка наибольший срок хранения побегов 6 месяцев отмечен на средах с разбавленной минеральной основой в 4 и 8 раза. Первые признаки хлороза появились уже через 2 месяца. Пролиферации во время хранения не было. После пересадки на обычную среду Мурасиге-Скуга в условия свекомнаты растения остались жизнеспособны и продолжали образовывать дополнительные побеги. Максимальный коэффициент размножения был у тех растений, которые хранили 6 месяцев на среде с разбавленной в 4 раза минеральной основой.
У гибрида 40-4 максимальный срок хранения (4 месяца) зарегестрирован на среде Мурасиге-Скуга с разбавленной в 2 раза минеральной основой. Затем у микропобегов начинался некроз тканей. Изъятые из хранения растения высаживали на среды Мурасиге-Скуга и Ли и де Фоссарда. Развитие растений на среде Ли и де Фоссарда было более интенсивным, особенно со среды с разбавленным в 4 раза минеральным составом.
Исследования показали различную реакцию микропобегов груши изучаемых сортов и форм во время депонирования на уменьшение концентрации макро - и микросолей. Однако, при культивировании в условиях светокомнаты все они были способны к дальнейшему развитию.
Действие различных концентраций сахарозы на процесс хранения микропобегов груши. При хранении микропобегов сорта Тютчевская на среде МС с уменьшенным содержанием сахарозы, пролиферации побегов не было отмечено в течение всего периода хранения (5 месяцев). После пересадки на среду МС с обычным минеральным составом наблюдали дальнейшее развитие. Наибольший коэффициент размножения при этом составил 5,7 (табл. 10).
Таким образом, снижение концентрации сахарозы в питательной среде МС можно использовать как один из способов депонирования побегов груши.
Таблица 10 - Развитие эксплантов груши сорта Тютчевская в условиях
светокомнаты после депонирования на среде МС с уменьшенным
количеством сахарозы
Срок | Показатели | Разбавление минеральной основы | ||
В 2 раза | В 4 раза | В 8 раз | ||
3 месяца | Коэффициент размножения | 3,9±0,6 | 5,7±2,1 | 3,7±1,6 |
Длина побега, мм | 10,4±3,2 | 4,9±1,2 | 9,0±0,5 | |
Число листьев, шт. | 10,1±4,8 | 9,6±1,6 | 7,8±0,6 | |
5 месяца | Коэффициент размножения | 5,2±1,0 | 4,5±1,0 | 5,2±1,8 |
Длина побега, мм | 8,2±1,1 | 5,1±3,4 | 4,7±1,0 | |
Число листьев, шт. | 9,1±3,8 | 9,6±2,8 | 9,7±2,1 |
Реакция микропобегов груши на замену сахарозы маннитом. Наибольший срок хранения (14 месяцев) у сорта Тютчевская был отмечен при добавлении маннита в концентрации 3 г/л. При концентрации 1 г/л наблюдали 100% обводненность побегов, поэтому все растения изъяли из хранения через 3 месяца. После пересадки на среду Мурасиге-Скуга в условия светокомнаты наблюдали низкий коэффициент размножения. Образовывались неодномерные, тонкие и нежизнеспособные побеги.
У груши березолистная микрорастения были изъяты из хранения в два этапа – в 6 месяцев, когда начался некроз и в 14 месяцев при содержании маннита 5 г/л. В процессе хранения пролиферации не наблюдали, но растения остались зелеными. При культивировании в светокомнате у тех микропобегов, которые депонировали 6 месяцев отмечали пробуждение латеральных почек. Те, что изъяли из хранения через 14 месяцев, погибли. Эксперименты показали, что использование маннита вместо сахарозы вызывает гибель побегов груши, как во время хранения, так и во время выращивания в культивационной комнате.
Депонирование груши при различных концентрациях БАП. При хранении побегов груши in vitro максимальный срок хранения у сорта Тютчевская (14 месяцев) отмечали при введении в среду 3,0 мг/л и 10,0 мг/л БАП. Минимальный период хранения – 4 месяца, при концентрации 0,1 мг/л. В процессе депонирования побеги образовывали дополнительные почки и побеги. Отмечено, что чем выше концентрация цитокинина, тем больше образовывалось дополнительных побегов. После хранения растения высаживали на среду Мурасиге-Скуга в светокомнату. Через месяц культивирования после депонирования побеги продолжали расти и были способны к дальнейшему развитию. Наибольший коэффициент размножения отмечен у побегов, хранившихся на среде с 5,0 мг/л БАП в течение 13 месяцев – 4,0. Отмечали также образование побегов пригодных к укоренению, длина которых достигала в среднем 16,8 мм (табл.11).
Микропобеги груши березолистной хранили на среде МС, содержащей 10 мг/л БАП в течение 14 месяцев (табл. 12).
Таблица 11 - Развитие эксплантов груши сорта Тютчевская на питательной среде МС после депонирования МС с различной концентрацией БАП
Варианта | Показатели развития | ||
Коэффициент | Длина побега, | Число листьев, шт. | |
3 мг/л БАП | 3,0±0,2 | 16,8±1,1 | 15,8±4,8 |
5 мг/л БАП | 4,0±0,7 | 14,1±4,0 | 14,5±3,8 |
10 мг/л БАП | 2,7±0,5 | 15,0±2,1 | 15,5±3,4 |
Таблица 12 - Развитие эксплантов груши сорта березолистная в период
хранения на питательных средах с различной концентрацией БАП
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 |
