Оптимизация системы контроля эпизоотического процесса некробактериоза крупного рогатого скота (стр. 4 )

Одним из основных факторов, способствующих появлению некробактериоза, являлась сырость на пастбище и в загонах. Заболеваемость коров некробактериозом прекратилась в конце августа, когда установилась сухая погода.

Второй случай некрабактериоза отмечен в пастбищный период в ЗАО “Целинный” Коченевского района Новосибирской области. Заболеванию был подвержен молодняк в возрасте 12 мес.: 60% телочек из 450 голов и 50% бычков из 320 голов. У животных поражались участки кожи над венчиком задних конечностей. Клинические признаки заболевания: хромота, образование воспалительного отека, что сопровождалось припуханием кожи и повышением местной температуры. Затем развивался абсцесс, с последующим образованием язвы; от раны исходил запах сероводорода. Появление болезни было связано с травмированием стеблями сухой травы кожи конечностей в результате засушливого жаркого лета.

Третий случай клинического проявления некробактериоза связан с поражением кожи сосков вымени. Эта форма некробактериоза была отмечена у высокоудойных коров в одном из хозяйств Новосибирской области. При осмотре кожи сосков обнаруживались гнойно-некротические язвы. Бактериологическим исследованием выделили чистую культуру, патогенную для белых мышей. Поражения кожи сосков вымени были вызваны травмированием ее резиной стаканов доильных аппаратов в процессе доения.

Поражение мышечной ткани тазовых конечностей при некробактериозе наблюдали в нескольких хозяйствах Сибири (Новосибирская и Томская области, Красноярский край). В этих хозяйствах некробактериозом заболевали высокопродуктивные коровы и первотелки. Коровы не хромали; дистальный отдел конечностей не поражался. При убое животных отмечали гнойно-некротические поражения мышц тазового пояса, бедренной кости и эпифизарной части костного мозга. Мышечная ткань была вишневого цвета, дряблой консистенции, от нее исходил неприятный запах. Костная ткань эпифиза на разрезе наполнена кровью, костный мозг серо-коричневого цвета, мягкой консистенции.

Согласно данным других исследований, с интенсификацией откорма крупного рогатого скота участились случаи появления гнойного воспаления тканей хвоста, вызванные возбудителем некробактериоза F. necrophorum. Они связывают это с односторонним кормлением бычков и неудовлетворительными условиями содержания ( и , 1982; , 1989; P. Klucznick, 1976; W. Goldhorn, 1984).

Имеются сообщения об этиологической роли F. necrophorum в воспалении половых органов (I. M. Sheldon et al., 2004; E. J. Williams et al., 2005) и вымени животных (T. Shinjo, 1983). Эндометриты встречаются у 20–40% коров после отела. По данным зарубежных исследователей, этиология послеродовых болезней у коров может быть связана со следующими возбудителями: Arcanobacterium pyogenes, Fusobacterium necrophorum, Bacteroides melaninogenicus. Синергизм между Arcanobacterium pyogenes и Fusobacterium necrophorum усиливает их вирулентность, в результате чего эндометрит у коров протекает очень тяжело. Fusobacterium necrophorum продуцирует лейкотоксин, который способствует распространению Arcanobacterium pyogenes в ткани органов животных. В то же время, Arcanobacterium pyogenes вырабатывает фактор роста для Fusobacterium necrophorum (R. A. Laven, A. R. Peters, 1996; G. S. Lewis, 1997; E. Malinowski, 2004).

, , и др., (2003), (2004) в результате вирусологических и бактериологических исследований доказали, что этиологическими агентами, вызывающими инфекционный баланопостит откормочных бычков, являются герпесвирус типа 1 и бактерии Fusobacterium necrophorum. Впервые установлено, что баланопостит у откормочных бычков протекает, в основном, в виде смешанной инфекции.

В КП “Беклемишевское” Читинской области поражение бычков некробактериозом в форме баланопостита составляло до 35% (, , 2002; , 2004).

При лабораторном исследовании проб секретов из сосков вымени коров в летний период содержания в 35% случаев выделяли Corynebacterium pyogenes, Peptococcus indolicus – 31% и Fusobacterium necrophorum – 22% (J. M. Van Den Bogaard, M. J. HazenU Vecht, 1987).

Некробактериозные поражения хвоста были отмечены у бычков на откорме в одном из хозяйств Новосибирской области. Заболевали бычки, находившиеся на втором периоде откорма. Болезнью было охвачено 23,5% животных.

Следовательно, некробактериоз животных следует рассматривать не как местное поражение тканей дистального отдела конечностей, а как системное заболевание, которому свойственен эпизоотический процесс. Ведущими же факторами, влияющими на степень его проявления, выступают условия кормления и содержания. Исходя из этих положений, необходимо совершенствовать диагностические, лечебные и профилактические мероприятия.

2.2.2 Совершенствование методов диагностики некробактериоза сельскохозяйственных животных

2.2.2.1 Усовершенствование метода отбора биоматериала из пораженной конечности для лабораторного исследования

По данным экспертиз районных и областных ветеринарных лабораторий в большинстве случаев диагноз на некробактериоз не подтверждается. Одной из причин таких заключений лабораторий мы связываем с трудоемкостью взятия для бактериологического исследования некротизированных тканей из пораженного пальца внутри роговой капсулы. Второй причиной, на наш взгляд, является то, что некротизированные участки тканей для исследования отбираются с поверхности пораженного органа. На поверхности пораженных тканей органа присутствует, как известно, большое количество аэробных микроорганизмов. А возбудитель некробактериоза относится к анаэробным микроорганизмам и в пораженном органе находится глубоко, на границе здоровой и некротизированной тканей.

Для исследования в лабораторию направляют обычно пораженную фалангу по путовый сустав. Взятие из глубины пораженной фаланги некротизированных фрагментов тканей скальпелем, ножницами, пинцетом или ложкой Фолькмана, как правило, всегда очень затруднительно.

Мы предлагаем пораженную фалангу механически расчленить на несколько фрагментов (3-4), в зависимости от степени поражения. Затем в боксе из пораженных участков фаланги ложкой Фолькмана, скальпелем, ножницами или пинцетом, предварительно обработанных 70% спиртом или подвергнутых фломбированию над пламенем горелки, отбирают пробы некротизированных тканей для исследований. Дальнейшее бактериологическое исследование проводят согласно “Методическим указаниям по лабораторной диагностике некробактериоза” (1987).

При исследовании 15 пораженных конечностей диагноз на некробактериоз подтвердился при усовершенствованной методике отбора биологического материала для лабораторного исследования в 93,3 % случаев, а при обычной методе в 60%.

Таким образом, новый метод отбора биоматериала из пораженной конечности способствовал увеличению эффективности диагностики некробактериоза на 33,3% и может быть рекомендован для ветеринарных диагностических лабораторий.

2.2.2.2 Сравнительная эффективность индикации Fusobacterium necrophorum бактериологическим методом и с помощью гнездовой ПЦР

Исследования по разработке гнездовой ПЦР для диагностики некробактериоза проводили совместно с лабораторией генной инженерии (заведующий ). Нами проводилась индикация возбудителя некробактериоза и сопутствующей микрофлоры, накопление бактериальной массы, и взятие биологических образцов.

Первоначально проверена специфичность разрабатываемой диагностичес­кой тест-системы. Положительные анализы продуктов ПЦР получали только тогда, когда в качестве матрицы использовали ДНК патогенного возбудителя F. necrophorum subsp. necrophorum. Анализы были отрицательными, когда использовали ДНК других бактерий: стафило­кокков, стрептококков, кишечной палочки, протея, микоплазмы.

Затем провели тестирование возбудителя некробактериоза в пробах, полученных от коров из разных хозяйств Кемеровской, Новосибирской областей и Алтайского края. Пробы были взяты от животных по клиническим показаниям.

Во всех случаях бактериологическое исследование биоматериала из пораженных конечностей (фаланга, костный мозг фаланги, кровь фаланги) при положительной биопробе на белых мышах совпадало с положительным результатом ПЦР, преимущественно с внутренним праймером (табл.1).

При исследовании абсцессов печени совпадение бактериологического исследования и ПЦР составило 50%.

Таблица 1 – Результаты сравнительных исследований биологических
образцов на некробактериоз

№ проб	Исследуемый материал	Бактериологическое исследование	ПЦР с праймерами
питательные среды и биопроба	получена чистая культура	наружные	внутренние
1	Фаланга 1	+	+	-	+
2	Фаланга 2	+	-	-	+
	3	Фаланга 3	+	-	-	+
	4	Фаланга 4	+	+	-	+
	5	Фаланга 5	+	+	-	+
	6	Фаланга 6	+	-	-	+
	7	Фаланга 7	+	-	-	+
	8	Фаланга 8	+	-	-	+
	9	Фаланга 9	+	+	-	+
	10	Фаланга 10	+	+	-	+
11	Костный мозг фаланги	+	+	+	+
	12	Кровь фаланги	+	-	-	+
13	Абсцесс печени 1	+	-	-	-
14	Абсцесс печени 2	+	-	-	-
15	Абсцесс печени 3	+	+	-	-
16	Абсцесс печени 4	+	-	-	+
17	Абсцесс печени 5	+	-	-	+
18	Абсцесс печени 6	+	+	-	+
	19	Абсцесс мышц	+	-	-	+
	20	Биоматериал от мыши	+	-	+	+
	21	Некротич. очаг от мыши	+	-	-	+
22	F. necroph. из коллекции	+	+	-	+
	23	F. necrophorum лиофилизиров. 1	+	н/и	-	+
	24	F. necrophorum лиофилизиров. 2	+	н/и	-	+
	25	F. necrophorum.	+	+	-	+

Примечание: “ + ” положительный результат,