Патологическая физиология системы крови (стр. 1 )

ПАТОЛОГИЧЕСКАЯ ФИЗИОЛОГИЯ СИСТЕМЫ КРОВИ

Ц е л ь з а н я т и й. Изучить нарушения, возникающие в животном организме при изменении количества крови, количественного и качественного состава ее форменных элементов, гемопоэза.

Задание 1. Изучить последствия изменений общей массы крови у животных.

О п ы т 1. Гиповолемия у кролика.

М а т е р и а л ь н о е о с н а щ е н и е: клетки для кроликов (4); кюветы (4); изогнутые ножницы (2); инъекционные иглы (2); стеклянные капилляры (26); микроцентрифуги (2); 70%-ный раствор этилового спирта (6 мл); эфир (6 мл); гепарин (5000 ЕД в 1 мл) (1,5 мл); подопытные животные: кролики (4).

П о с т а н о в к а о п ы т а. Для проведения занятия с подгруппой студентов берут двух однополых кроликов массой более 2,5 кг. Одного из них за трое суток до опыта лишают воды и сочных кормов, содержат только на сухих кормах (сено, овес, комбикорма).

В часы занятий обоих кроликов помещают в деревянные решетчатые клетки. Выстригают шерсть над краевой веной уха. Кожу обезжиривают спиртом и эфиром. У одного, а затем у второго кролика инъекционной иглой прокалывают кожу и венозный сосуд. Выступающую каплю крови снимают ватой, последующую порцию крови используют для заполнения стеклянного капилляра. Стеклянные капилляры, предназначенные для определения величины гематокрита, перед употреблением должны быть вымыты, обезжирены, внутренние стенки обработаны гепарином, высушены.

Гематокритную величину определяют по одной из следующих методик.

1.Пипетку Панченкова предварительно промывают гепарином, высушивают, набирают в нее кровь до 100 мм, закрывают резиновым кольцом. Кольцо сначала слегка натягивают на кончик пипетки, а потом закрывают ее верхний конец. После этого пипетку помещают в гнездо центрифуги и центрифугируют в течение 10 мин при 5000-6000 мин (в -1 степени). При центрифугировании вследствие разной удельной массы форменных элементов и плазмы в нижней части капиллярной трубки оседают эритроциты, в верхней – плазма соломенно-желтого цвета. Этот метод прост и удобен в практической работе.

2.Для определения величины гематокрита используют ручную микроцентрифугу Шкляра.

В гнезда насадки вкладывают градуированные микропипетки, заполненные кровью. Для предупреждения ее просачивания в гнезда насадки вмонтированы резиновые прокладки. Насадку укрепляют на оси центрифуги. Вращают рукоятку в течение 7-9 мин со скоростью 60-70 мин (в -1 степени) (насадка с капиллярами вращается со скоростью не менее чем 7000 мин в -1 степени). После центрифугирования отсчитывают деления с центрифугированными форменными элементами крови и определяют величину гематокрита.

3.Используют электрическую микроцентрифугу Шкляра (рис. 29) в соответствии с инструкцией. При работе с центрифугой запрещено следующее: работать без заземления корпуса прибора, пользоваться центрифугой с открытой крышкой, включать сразу большую скорость, открывать крышку до полной остановки электродвигателя.

4.Применяют эритровольтметр.

Расчет гематокритной величины проводят по формуле:

высота столба эритроцитов

----------------------------------- · 100 гематокрит, %

высота всего столба крови

У кроликов она колеблется от 35 до 45.

Согласно международной системе единиц (СИ) величина гематокрита выражается в литрах (объем эритроцитов) на 1 л крови (у кролика 0,35-0,45 л/л).

Одним из перечисленных способов определяют и сопоставляют величины гематокрита у интактного, контрольного кроликов и кролика, которому в течение трех дней не давали воды.

О ф о р м л е н и е п р о т о к о л а о п ы т а. Записывают схему опыта и использованную методику определения гематокритной величины. Отмечают результаты исследования. Делают выводы о влиянии водного голодания на показатель гематокрита.

О п ы т 2. Влияние гиперволемии на кровообращение в сосудах языка лягушки.

М а т е р и а л ь н о е о с н а щ е н и е: препаровальные дощечки (15); булавки (105); кюветы (15); микроскопы стереоскопические (6); микроскопы обычные (9); шприцы на 5 мл с иглой (15); глазные пипетки (15); раствор Рингера для холоднокровных (100 мл); 10%-ный раствор этилового спирта (300 мл); подопытные животные: лягушки (15).

П о с т а н о в к а о п ы т а. Лягушку наркотизируют алкоголем, помещают на препаровальную дощечку брюшком вверх. Булавками фиксируют верхнюю челюсть у края круглого отверстия и все четыре лапки. Иссекают кожу и грудную кость над областью сердца для лучшего доступа к сердечной мышце. Из ротовой полости осторожно извлекают язык, расправляют его над отверстием. Препарат кладут на предметный столик стереоскопического или обычного микроскопа. Изучают стереоскопическую и микроскопическую картину кровоснабжения ткани языка. В полость желудочка вводят 5-6 мл раствора Рингера и наблюдают за характером кровотока. Обращают внимание на скорость движения крови, число функционирующих сосудов, количество форменных элементов в осевом слое тока крови. Сопоставляют с исходным кровотоком.

О ф о р м л е н и е п р о т о к о л а о п ы т а. Записывают ход эксперимента. Отмечают изменения кровотока, возникшие после существенного увеличения объема циркулирующей крови.

О п ы т 3. Влияние гетерогенной гемотрансфузии на организм кролика.

М а т е р и а л ь н о е о с н а щ е н и е: клетки для кролика (2); кюветы (2); шприцы на 5 мл с иглой (2); электрокардиографы (2); предметные стекла (2); стеклянные палочки (2); изогнутые ножницы (2); кровь коровы (8 мл); 5%-ный лимоннокислый натрий (2 мл); 70%-ный раствор этилового спирта (10 мл); подопытные животные: кролики (2).

П о с т а н о в к а о п ы т а. Кролика массой тела 1,8-2,5 кг помещают в деревянную клетку, ограничивающую движения. Над краевой веной уха выстригают шерсть, кожу протирают спиртом, сосуд прокалывают и набирают в пробирку 3-5 мл крови. После ее свертывания каплю сыворотки наносят на поверхность чистого предметного стекла, в которую добавляют небольшой объем гетерогенной крови, предназначенной для переливания. Сыворотку с кровью смешивают легкими касаниями стеклянной палочки. Спустя 3-5 мин обнаруживают склеивание эритроцитов, их агглютинацию.

На конечности животного накладывают электроды. Регистрируют исходную электрокардиограмму в трех стандартных отведениях. Визуально подсчитывают число дыхательных движений в 1 мин. После этого в краевую вену уха медленно вводят 3 мл гетерогенной крови, стабилизированной лимоннокислым натрием. Во время трансфузии, а также спустя 5-10-15 мин ведут запись электрокардиограммы и подсчитывают число дыхательных движений. Обращают внимание на общее состояние животного.

О ф о р м л е н и е п р о т о к о л а о п ы т а. Записывают определение несовместимости крови. В тетрадь вклеивают электрокардиограммы, которые затем обрабатывают. Обобщают весь материал, полученный в ходе опыта. Делают вывод о влиянии гетеротрансфузии на организм реципиента.

Задание 2. В опытах на животных изучить изменения количественного и качественного состава эритроцитов.

О п ы т 1. Моделирование и изучение гемолитической анемии у кроликов.

М а т е р и а л ь н о е о с н а щ е н и е: клетки для кроликов (4); кюветы (4); шприцы на 5 мл с иглой (2); смесители для красной крови (15); микроскопы (15); камеры Горяева (15); электрофотоколориметры (2); стандартный набор для определения гемоглобина гемоглобинцианидным методом; гемометры Сали (15); аппараты Панченкова для определения СОЭ (2); вата (50 г); фильтровальная бумага (30 г); 5%-ный раствор фенилгидразина (20 мл); 70%-ный раствор этилового спирта (20 мл); 1%-ный раствор натрия хлорида (70 мл); 0,1 н. раствор хлористоводородной кислоты (5 мл); 5%-ный раствор лимоннокислого натрия (5 мл); подопытные животные: кролики (4).

П о с т а н о в к а о п ы т а. На кролика массой тела более 2 кг действуют гемолитическим ядом – фенилгидразином, вызывающим тяжелую форму анемии. За четыре дня до занятий кролику в краевую вену уха в течение трех дней подряд вводят 1%-ный раствор фенилгидразина из расчета 1 мл на 1 кг массы тела. В день занятий измеряют ряд показателей красной крови у подопытного и контрольного кроликов.

Пробы периферической крови берут из сосудов уха, для чего выстригают шерсть, кожу протирают спиртом, после высыхания прокалывают краевую вену уха иглой, вытекающую кровь используют для анализов.

Определение числа эритроцитов. В абсолютно чистый и высушенный смеситель для красной крови набирают кровь до метки 0,5. Манипуляцию взятия проводят быстро. При этом следят, чтобы не попали пузырьки воздуха. После взятия крови кончик капилляра быстро вытирают ваткой или фильтровальной бумагой, погружают в сосуд с 1%-ным раствором натрия хлорида и набирают до метки 101. Смеситель закрывают с обоих концов большим и средним пальцами рук и осторожно встряхивают содержимое в течение 1-2 мин для получения равномерной взвеси эритроцитов. Получают разведение крови в 200 раз. Подсчет форменных элементов красной крови осуществляют в камере Горяева (рис. 30), которую предварительно покрывают шлифованным стеклом, притертым до появления радужных кругов (ньютоновых колец). Из меланжера (смесителя) удаляют на ватку три первые капли содержимого, а затем одну капельку взвеси эритроцитов подводят под среднюю пластинку камеры, куда жидкость поступает в силу капиллярности. Между покровным стеклом и пластинкой не должно быть пузырьков воздуха.

Поверхность сетки разделена на большие и малые квадраты. Часть больших разделена на 16 малых квадратов, площадь каждого составляет 1/400 мм², высота всех камер равна 1/10 мм. Таким образом, объем малого квадрата 1/4000 мм³. Подсчет клеток проводят под малым увеличением микроскопа в пяти больших квадратах, начиная с левого маленького квадрата. Считают эритроциты, расположенные в каждом маленьком квадрате, и те, которые касаются левой и верхней стенок. Эритроциты, касающиеся правой и нижней стенок, не учитывают.

Для определения числа эритроцитов в 1 мкл крови (Х) используют формулу

А·4000·b

Х = -------------- ,

В