Лабораторная работа №1
КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ВИТАМИНЫ
1. Проба Друммонда на ретинол (витамин А).
Метод основан на способности концентрированной серной кислоты отнимать воду от ретинола с образованием окрашенных продуктов.
Ход определения. В пробирку вносят 2 капли рыбьего жира, 5 капель хлороформа и 1-2 капли концентрированной серной кислоты. Появляется голубое окрашивание, переходящее в буро-красное.
2. Обнаружение кальциферола (витамин D).
Метод основан на взаимодействии кальциферола с гидрохлоридом анилина с образованием окрашенных продуктов.
Ход определения. В сухую пробирку помещают 10 капель анилинового реактива и прибавляют 5 капель рыбьего жира. Содержимое пробирки осторожно при постоянном перемешивании нагревают до кипения и кипятят в течение 30с. В присутствии витамина D желтая эмульсия приобретает вначале грязно-зеленое, а затем буро-красное или красное окрашивание.
3. Качественная реакция на токоферол (витамин Е).
Метод основан на образовании соединений хиноидной структуры, окрашивающихся в красный цвет, при действии сильных окислителей (концентрированной азотной кислоты) на токоферол.
Ход определения. В сухую пробирку вносят 5 капель 0,1% спиртового раствора токоферола и добавляют 10 капель концентрированной азотной кислоты. Встряхивают. Наблюдают за развитием красного окрашивания.
4. Качественная реакция на никотиновую кислоту (витамин РР).
Метод основан на том, что никотиновая кислота при нагревании с раствором уксуснокислой меди (II) образует синий осадок плохо растворимой медной соли (никотинат меди).
Ход определения. Растворяют 10 мг никотиновой кислоты в 20 каплях 10%-го раствора уксусной кислоты при нагревании. К нагретому до кипения раствору добавляют равный объем 5%-го раствора уксуснокислой меди (II). При постепенном охлаждении раствора выпадает синий осадок медной соли никотиновой кислоты.
5. Качественная реакция на цианкобаламин (витамин В12).
Метод основан на способности кобальта, входящего в состав витамина В12, при высокой температуре взаимодействовать с тиомочевиной с образованием комплекса зеленого цвета.
Ход определения. На беззольный фильтр наносят 2-3 капли 10%-ного раствора тиомочевины, высушивают на спиртовке, после чего наносят 1-2 капли раствора витамина В12 и снова высушивают. Образуется зеленое кольцо.
6. Обнаружение тиамина (витамин В1).
Метод основан на способности тиамина образовывать с диазофенилсульфоновой кислотой комплекс оранжево-красного цвета в щелочной среде.
Ход определения. В пробирку вносят 5 капель раствора 1% сульфаниловой кислоты и прибавляют 5 капель 5% раствора нитрита натрия. К полученному диазореактиву добавляют на кончике скальпеля порошок тиамина и 5 капель раствора карбоната натрия. Встряхивают. Появляется оранжево-красное окрашивание.
7. Качественная реакция на витамин В6
Ход определения: в пробирку вносят 1мл 1% хлорида железа и 1мл 1% раствора витамина В6. Смесь встряхивают. В присутствии витамина железо образует с ним комплексную соль по типу фенолята желза красного цвета.
8. Качественная реакция на викасол (витамин К3).
Метод основан на том, что раствор в щелочной среде окрашивается в желто-оранжевый цвет.
Ход работы. В пробирке смешивают по 5 капель 0,05%-го раствора викасола и 0,025%-го раствора цистеина. Добавляют 1 каплю 10%-го раствора NaOH. Смесь окрашивается в желто-оранжевый цвет.
9. Качественная реакция с анилином (обнаружение витамина К3)
Ход определения. В пробирку вносят 2мл 0,05% спиртового раствора викасола, добавляют 2 капли анилина. Осторожно встряхивают содержимое пробирки и наблюдают красное окрашивание, что обусловлено образованием 1-метил-2-фенил-аминонафтохинола.
Оформление работы: Результаты оформить в таблице и сделать вывод.
№опыта | Материал | Исследуемый витамин | Реакция | Наблюдаемая окраска |
Практическое значение работы. Качественные реакции на витамины позволяют обнаружить их наличие в лекарственных препаратах и после экстракции в пищевых продуктах и лекарственных растениях. Принцип, положенный в основу качественных реакций на витамины, используется при разработке количественного определения их в различных природных объектах и лекарственных средствах.
Лабораторная работа №2
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ВИТАМИНОВ
1. Определение содержания витамина С в лекарственных растениях.
Ход определения. Приготовить навески лекарственного сырья: цвет бузины, лист крапивы, цветы тысячелистника, кора крушины, лист сенны, витаминный чай и плоды аронии черноплодной по 0,5г.; шиповник, очищенный от семян – 0,2г. Исследуемый материал переносят в ступку, измельчают скальпелем и растирают с 5 мл раствора соляной кислоты.
Вытяжку фильтруют через тонкий слой ваты в мерную колбу вместимостью 100 мл. Извлечение витамина из той же навески повторяют 3 раза с таким же объемом 2% соляной кислоты, фильтруя каждый раз полученную вытяжку в ту же мерную колбу. Содержимое колбочки доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают.
Для определения отбирают 10 мл вытяжки в стаканчик и титруют содержимое раствором 0,001М 2,6-дихлорфенолиндофенола, налитого в микробюретку, до появления розового окрашивания, не исчезающего в течении 30с.
Расчет проводят по формуле:
где Х – содержание аскорбиновой кислоты, мг/кг; F – фактор-поправка на титр индикатора; 0,088 – масса аскорбиновой кислоты, соответствующая 1мл 0,001М раствора 2,6-ихлорфенолиндофенола, мг; 100 – разведение взятой пробы; 1000 – коэффициент пересчета на 1кг сырья; 10 – объем жидкости, взятый для титрования, мл; V - объем 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедший на титрование, мл; в – навеска исследуемого материала.
Оформление работы. Полученные данные оформить в виде таблицы и сделать вывод о значении исследованного растительного материала как источника аскорбиновой кислоты. Указать в выводе о целесообразности применения растительного сырья с целью профилактики С-витаминной недостаточности.
Материал | Навеска, г | Объем 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедшего на титрование, мл | Содержание аскорбиновой кислоты, мг/кг |
2. Определение содержания витамина С в пищевых продуктах.
Ход определения. Отвесить исследуемый материал в следующих количествах: шиповник – 0,2г; картофель, яблоки, лук репчатый, капуста – по 5г, фруктовый сок – 5мл. Навеску перенести в фарфоровую ступку и растирать с 5 мл раствора соляной кислоты. Солянокислый экстракт отфильтровать через тонкий слой ваты в мерную колбу на 100 мл. Ступку трижды сполоснуть раствором соляной кислоты и содержимое каждый раз перенести в мерную колбу. Экстракт в мерной колбе довести водой до метки и перемешать. В колбочку для титрования отобрать 10 мл полученного раствора и титровать из бюретки раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления стабильного розового окрашивания, не исчезающего в течение 30с.
Расчет проводят по формуле:
где Х – содержание аскорбиновой кислоты, мг в 100г исследуемого материала; F – фактор-поправка на титр индикатора; V - объем 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедший на титрование, мл; 0,088 – масса аскорбиновой кислоты, соответствующая 1мл 0,001М раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, мг; 100 – общее количество вытяжки, мл; 100 – перерасчет содержания аскорбиновой кислоты, мг в 100г исследуемого материала; 10 – количество вытяжки, взятой для титрования, мл; С – навеска исследуемого материала, г.
Оформление работы. Полученные результаты исследования оформить в виде таблицы и сделать вывод о содержании аскорбиновой кислоты в исследуемом материале.
№ | Продукт | Количество аскорбата в мг на 100г продукта | |
Норма | Опыт | ||
1 | Шиповник сухой, очищенный | 1200-25000 | |
2 | Картофель сырой | 10-40 | |
3 | Капуста белокочанная | 25-66 | |
4 | Лук репчатый | 20-50 | |
5 | Яблоки | 5-48 |
Практическое значение работы. Определение содержания аскорбиновой кислоты в пищевых продуктах и лекарственных растениях необходимо для составления правильного рациона, удовлетворяющего потребность организма в этом витамине. Богаты витамином С плоды шиповника, черной смородины, цитрусовых и т. д. Содержание его снижается при хранении овощей и фруктов, а также при термической обработке пищи. Аскорбиновая кислота применяется для профилактики гиповитаминоза и простудных заболеваний, для лечения воспалительных процессов, атеросклероза. Она способствует усилению регенеративных процессов. Аскорбиновая кислота участвует в окислительно-восстановительных процессах при синтезе стероидных гормонов, обмене ароматических аминокислот, образовании соединительной ткани. Как антиоксидант аскорбиновая кислота добавляется в различные пищевые изделия и безалкогольные напитки.
3. Определение содержания витамина Р (рутина) в различных сортах чая
Метод основан на способности витамина Р окисляться перманганатом калия. В качестве индикатора применяется индигокармин, который вступает в реакцию с перманганатом калия после окисления всего витамина Р, причем синяя окраска индигокармина меняется на желтую.
Ход определения. К 100 мг чая прилить 50 мл дистиллированной воды, довести до кипения и экстрагировать в течение 5 мин. В колбочек прилить по 5 мл экстракта чая, дистиллированной воды, раствора индигокармина и тировать до появления устойчивой желтой окраски, не исчезающей в течение 30с.
Расчет проводят по формуле:
где Х – содержание витамина в чае, мг в 100г исследуемого чая; 3,2 – количество витамина, окисляющегося 1 мл 0,05н раствор перманганата калия, пошедшего на титрование, мл; 50 – количество воды, взятое для анализа, мл; 100 – перерасчет в мг в 100 г исследуемого чая, 5 – количество вытяжки, мл; 0,1 – количество сухого вещества, г; 1000 – перевод мкг в мг.
Оформление работы. Результаты исследования оформить в виде таблицы и сделать вывод о содержании рутина в различных сортах чая.
№ | Сорт чая | Количество витамина Р |
Практическое значение работы. Суточная потребность взрослого человека в витамине Р составляет около 25 мг. Биофлавоноидами богаты свежие фрукты и ягоды, особенно черноплодная рябина, черная смородина, яблоки, виноград, лимоны, а также листья чая и плоды шиповника. Витамин Р взаимодействует с аскорбиновой кислотой в процессе образования коллагена и тем самым укрепляет стенки капилляров.
