Биохимия (стр. 7 )

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Протеолитическую активность пепсина наблюдают, добавив к его подкисленному раствору небольшое количество фибрина. Фибрин, нерастворимый в воде, под действием пепсина гидролизуется до растворимых в воде пептидов.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) 1 % раствор препарата пепсина в 0,2 % растворе HCl; 2) фибрин; 3) водяная баня; 4) пробирки; 5) пипетки; 5) термометр.

ХОД РАБОТЫ:

В пробирку №1 приливают 15 капель или 0,5 мл раствора пепсина, в пробирку №2 – такое же количество предварительно прокипяченного раствора пепсина. В каждую пробирку опускают небольшой кусочек фибрина. Обе пробирки помещают в водяную баню при температуре 38 оС на 60 минут. Наблюдают растворение фибрина.

Результаты занести в таблицу 13.

Таблица 13

№	Фермент	Субстрат	Изменение субстрата	ВЫВОД

Лабораторная работа №18

ОБНАРУЖЕНИЕ КАТАЛАЗЫ В КРОВИ

По химической природе каталаза является геминферментом. Каталаза катализирует разложение перекиси водорода на молекулярный кислород и воду: 2Н2О2 → О2↑ + 2Н2О

Биологическая роль каталазы заключается в обезвреживании перекиси водорода, образующейся в организме во время течения окислительно-восстановительных процессов.

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Об активности каталазы крови судят по бурному выделению пузырьков кислорода при добавлении перекиси водорода к капле крови.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) кровь; 2) Н2О2, 1 % раствор; 3) штатив с пробирками; 4) капельницы.

ХОД РАБОТЫ:

В пробирку наливают 10-15 капель 1 % раствора Н2О2 и добавляют каплю крови. Жидкость вспенивается, так как происходит бурное выделение пузырьков кислорода.

Результат занести в таблицу 14.

Таблица 14

№	Фермент	Субстрат	Реакция, катализируемая ферментом	Выявление действия фермента

Лабораторная работа №19

ДЕЙСТВИЕ ЛИПАЗЫ НА ЖИРЫ

Липаза ускоряет гидролиз нейтрального жира. У человека она содержится в небольшом количестве в желудке; главным же образом липаза входит в состав сока поджелудочной железы. Желудочная липаза может действовать только на предварительно эмульгированные жиры, например на жир молока.

В кишечнике желчные кислоты и белки способствуют эмульгированию липидов и тем самым активируют действие липазы поджелудочной железы.

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Липазу открывают, добавив ее раствор к молоку, подщелоченному раствором карбоната натрия до бледно-розовой окраски на фенолфталеин. В присутствии липазы происходит гидролитическое расщепление жира молока на глицерин и жирные кислоты, реакция среды сдвигается в кислую сторону, розовая окраска исчезает.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) вытяжка из препарата поджелудочной железы или 5 % раствор панкреатина; 2) сухие сливки, 5 % раствор; 3) фенолфталеин, 1 % спиртовой раствор; 4) карбонат натрия, 1 % раствор; 5) бюретки; 6) пробирки; 7) пипетки; 8) водяная баня; 9) термометры.

ХОД РАБОТЫ:

В 2 пронумерованные пробирки наливают по 10 капель 5 % раствора сухих сливок. В пробирку №1 добавляют 5 капель вытяжки из поджелудочной железы или раствор панкреатина, содержащий липазу. В пробирку №2 добавляют такое же количество воды. В обе пробирки приливают по 1 капле 1 % раствора фенолфталеина и по каплям 1 % раствор карбоната натрия до появления бледно-розовой окраски (нельзя добавлять избыток раствора карбоната натрия). Пробирки помещают в водяную баню или термостат при температуре 38 оС на 30 минут. Наблюдают изменение окраски.

Результаты занести в таблицу 15.

Таблица 15

№	Фермент	Субстрат	Окраска на фенолфталеин	ВЫВОД
исходная	конечная

Лабораторная работа №20

ДЕЙСТВИЕ ПЕРОКСИДАЗЫ КРОВИ

К пероксидазам относятся ферменты, катализирующие окисление субстрата с помощью перекиси водорода. От субстратов под действием пероксидазы переносятся электроны на перекись водорода. Образуется окисленный субстрат и вода.

Пероксидазы относятся к геминовым ферментам; с состав их простетической группы входит гем.

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Об активности пероксидазы судят по изменению окраски бензидина. Окисленный бензидин приобретает зеленую, синюю, постепенно переходящую в бурую окраску.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) кровь, разбавленная водой; 2) Н2О2, 3 % раствор; 3) бензидин, 1 % раствор в ледяной уксусной кислоте; 4) штатив с пробирками; 5) капельницы.

ХОД РАБОТЫ:

В 2 пронумерованные пробирки наливают по 5 капель 1 % раствора бензидина и по 5 капель 3 % раствора Н2О2. В пробирку №1 добавляют 5 капель разбавленной крови, в пробирку №2 – 5 капель воды. Наблюдают за изменением окраски.

Результаты занести в таблицу 16.

Таблица 16

№	Фермент	Субстрат	Реакция, катализируемая ферментом	Выявление действия фермента

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ:

Классификация и номенклатура ферментов. Охарактеризуйте свойства ферментов.

Какие ферменты и как действуют на пептидные связи?

До каких продуктов расщепляет пепсин белки?

Ферменты, действующие на сложноэфирные связи.

Чем определяется ход ферментативных процессов и какое влияние оказывают продукты распада на эти процессы?

Какие ферменты активируют окисление веществ путем дегидрирования?

Какие вещества входят в состав коферментов дегидрогеназ?

Тема 8

ВИТАМИНЫ, КАК СТРУКТУРНЫЕ КОМПОНЕНТЫ ФЕРМЕНТОВ

К витаминам относятся вещества различного химического строения. Всех их объединяет то, что они необходимы для нормального течения процессов обмена веществ и не синтезируются в организме человека (а если некоторые из них и синтезируются, то в недостаточном количестве). Поэтому они должны поступать с пищей. Отсутствие витаминов в пище приводит к развитию авитаминозов. Чаще встречаются гиповитаминозы – относительная недостаточность какого-либо витамина. Некоторые витамины входят в состав простетических групп ферментов, являются коферментами.

Витамины делятся на растворимые в воде и растворимые в жирах.

v  ЗАДАНИЕ: заполнить таблицу 17.

Таблица 17

Название витамина, формула	Формула кофермента, в состав к-ого входит данный витамин	Биологическая роль	Признаки	Суточная потребность, мг	Источники витамина
гипо-витами-ноза	гипер- витами- ноза
I. Жирорастворимые витамины
II. Водорастворимые витамины

Лабораторная работа №21

КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ЖИРОРАСТВОРИМЫЕ ВИТАМИНЫ

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Если рыбий жир содержит витамин А, то при добавлении серной кислоты, обладающей водоотнимающим свойством, возникает фиолетово-красное окрашивание, быстро переходящее в бурое.

Витамин D. Витамин D при взаимодействии с анилиновым реактивом при нагревании окрашивается в красный цвет.

Спиртовой раствор витамина Е в присутствии концентрированной азотной кислоты окисляется в хиноидное соединение, окрашенное в красный цвет.

Витамины этой группы обладают группы выраженным антигеморрагическим действием. Обнаруживают по цветной реакции с щелочным раствором цистеина.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) раствор рыбьего жира в обезвоженном хлороформе; 2) масляный раствор эргокальциферола - 1,25 г/л; 3) витамин Е, 0,1 % спиртовой раствор; 4) викасол, 0,1 % спиртовой раствор; 5) H2SO4, конц.; 6) НNO3, конц.; 7) сахароза в порошке; 8) анилиновый реактив (15 частей анилина и 1 часть концентрированной соляной кислоты); 9) хлороформ; 10) цистеин, 0,025 %; 11) NaOH, 10 %; 12) часовое стекло или чашка Петри; пробирки; пипетки обычные и глазные; держатели; спиртовки.

ХОД РАБОТЫ:

1. Качественная реакция на витамин А. На сухое стекло наносят 5 капель раствора рыбьего жира в хлороформе и 1 каплю концентрированной серной кислоты. Образуется красно-фиолетовое окрашивание.

Результат занести в таблицу 18.

2. Качественная реакция на витамин D. В сухую пробирку вносят 2 капли масляного раствора эргокальциферола, 10 капель хлороформа и 1-2 капли анилинового реактива, осторожно нагревают при постоянном помешивании. Отмечают результат реакции.

Результат занести в таблицу 18.

3. Качественная реакция на витамин Е. В сухую пробирку вносят 6 капель 0,1 % раствора витамина Е. Затем туда добавляют несколько крупинок сахарозы и 10 капель концентрированной HNO3 (осторожно по стенке пробирки!). Пробирки слегка встряхивают. Через 1-2 мин наблюдают развитие окрашивания.

Результат занести в таблицу 18.

4. Качественная реакция на витамин К. В сухую пробирку наливают 1мл 0,1% спиртового раствора викасола, добавляют 2 капли 0,025 % раствора цистеина и 2 капли 10 % раствора NaOH. Наблюдают за развитием окрашивания.