Биохимия (стр. 8 )

Результат занести в таблицу 18.

Таблица 18

Определяемый витамин	Используемые реактивы	Цветовое окрашивание
А
D
Е
К

Лабораторная работа №22

КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ВИТАМИНЫ ГРУППЫ В

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Витамин В1. В щелочной среде тиамин с диазореактивом образует сложное комплексное соединение оранжевого цвета.

Витамин В2. Окисленная форма витамина В2 представляет собой желтое флюоресцирующее в ультрафиолетовых лучах вещество. Реакция на витамин В2 основана на его способности легко восстанавливаться; при этом раствор витамина В2, имеющий желтую окраску, приобретает сначала розовый цвет (за счет образования промежуточных соединений), а затем обесцвечивается (восстановленная форма витамина В2 бесцветна).

Витамин В5 (РР). Витамин РР при нагревании с раствором ацетата меди образует плохо растворимый синий осадок медной соли никотиновой кислоты.

Витамин В6. Витамин В6 при взаимодействии с раствором хлорного железа образует комплексную соль типа фенолята железа красного цвета.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) витамина В1, 5 %; 2) витамин В2, 0,025 % раствор (перед определением раствор можно развести в 5 раз); 3) витамин РР, 3 % раствор в 10 % растворе уксусной кислоты; 4) витамин В6, 1 %; 5) сульфаниловая кислота, 1 %; 6) NaNО2, 5 %; 7) Na2CO3, 10 %; 8) HCl, конц.; 9) металлический цинк; 10) FeCl3, 1 %; 11) (CH3COO)2Cu, 5 %; 12) сухие пробирки, держатели, спиртовки; 13) флуороскоп.

ХОД РАБОТЫ:

1. Качественная реакция на витамин В1. В пробирку к 5 каплям 1 % раствора сульфаниловой кислоты добавляют 5 капель 5 % раствора NaNО2. К полученному диазореактиву добавляют 2 капли 5 % раствора витамина В1 и 5-7 капель 10 % раствора Na2СО3 (осторожно по стенке пробирки!). На границе двух жидкостей появляется кольцо оранжевого цвета.

Результат занести в таблицу 19.

2. Качественная реакция на витамин В2. В пробирку приливают 10 капель раствора витамина В2, добавляют туда 5 капель концентрированной HCl. В пробирку опускают 1 горошинку металлического цинка. Начинается выделение пузырьков водорода, жидкость постепенно розовеет, затем обесцвечивается. Сравнивают обе формы витамина В2 по флюоресценции, поместив пробирки у флуороскопа.

Результат занести в таблицу 19.

3. Качественная реакция на витамин В5 (РР). Перед определением раствор витамина РР взбалтывают! В пробирку вносят 20 капель витамина РР. Нагревают до кипения. Взбалтывают раствор ацетата меди (!) и прибавляют 20 капель его к нагретому раствору. Содержимое пробирки доводят до кипения и охлаждают под струей холодной воды. Наблюдают выпадение осадка медной соли никотиновой кислоты.

Результат занести в таблицу 19.

4. Качественная реакция на витамин В6. В пробирку вносят 5 капель 1 % раствора витамина В6 и добавляют 5 капель 1 % раствора хлорного железа. Пробирки встряхивают. Наблюдают развитие окрашивания.

Результат занести в таблицу 19.

Таблица 19

Определяемый витамин	Используемые реактивы	Цветовое окрашивание
В1
В2
В5 (РР)
В6

Лабораторная работа №23

КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ВИТАМИН С

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Обнаружение аскорбиновой кислоты основано на ее способности вступать в окислительно-восстановительные реакции. Окисляясь, аскорбиновая кислота восстанавливает такие вещества, как железосинеродистый калий, метиленовый синий, молекулярный йод.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) аскорбиновая кислота, 1 %; 2) NaOH, 10 %; 3) HCl, 10 %; 4) железосинеродистый калий, 5 %; 5) FeCl3, 1 %; 6) метиленовый синий, 0,01 %; 7) Na2CO3, 10 %; 8) раствор Люголя (0,1 % раствор йода в растворе йодистого калия); 9) пробирки, держатели, спиртовки.

ХОД РАБОТЫ:

1. Реакция с железосинеродистым калием. В пробирку приливают 1 каплю 10 % раствора NaOH, добавляют 1 каплю 5 % раствора железосинеродистого калия. Затем прибавляют 5 капель раствора аскорбиновой кислоты. Пробирку встряхивают и добавляют в нее 3 капли 10 % раствора HCl и 1 каплю 1 % раствора FeCl3. В пробирке образуется осадок берлинской лазури.

В другой пробирке проделывают эту же реакцию с водой. Наблюдается бурое окрашивание, обусловленное образованием железосинеродистой соли окиси железа.

Результат занести в таблицу 20.

2. Реакция с метиленовым синим. В пробирку вносят 1 каплю 0,01 % раствора метиленового синего и 1 каплю 10 % раствора Na2СО3. Затем добавляют 3-5 капель раствора аскорбиновой кислоты. Нагревают на спиртовке. Происходит обесцвечивание метиленового синего. В другой пробирке проделывают эту же реакцию с водой.

Результат занести в таблицу 20.

3. Реакция с раствором Люголя. В пробирку приливают 10 капель дистиллированной воды, добавляют 2 капли раствора Люголя и 10 капель раствора аскорбиновой кислоты. Раствор Люголя обесцвечивается в результате восстановления йода до йодисто-водородной кислоты. В другой пробирке проделывают эту же реакцию с водой.

Результат занести в таблицу 20.

Таблица 20

	Аскорбиновая кислота	Вода
Наблюдаемое окрашивание

Лабораторная работа №24

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА С

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Количественно витамин С определяют титрованием 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) картофель; 2) 2,6-дихлорфенолиндофенола, 0,001 н; 3) H2SО4, 10 %; 4) дистиллированная вода; 5) бюретка или мерная пипетка для титрования; 6) мерный цилиндр, воронка, фильтр; 7) весы.

ХОД РАБОТЫ:

1. Приготовление экстракта из растительного материала. Тщательно промытый и очищенный от кожуры картофель нарезают на мелкие кусочки. 5 г картофеля растирают в ступке, приливая туда 15 мл дистиллированной воды. Далее фильтруют вытяжку и измеряют объем.

2. Титрование. 10 мл фильтрата подкисляют 2-3 каплями 10 % H2SО4 и титруют 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до розового цвета, не исчезающего в течение 30 сек. Проводят расчет:

X = (0,088 х А х Б х 100) / В х Г = мг %, где

А - количество 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедшего на титро­вание (мл),

Б - общий объем вытяжки (мл),

В - количество вещества, взятое для анализа (г),

Г - объем вытяжки взятый для титрования (мл),

0,088 - коэффициент, соответствующий содержанию витамина С в 1мл 0,001 н раствора.

РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОД:

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ:

Что такое витамины?

Классификация витаминов.

Объясните принципы качественных реакций на исследованные водорастворимые витамины.

В состав каких ферментов входят рассмотренные витамины?

Раздел 3. НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ И ИХ ОБМЕН

Тема 9

СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ. НУКЛЕОПРОТЕИДЫ

Нуклеиновые кислоты – биополимерные молекулы, основная биологическая роль которых состоит в хранении и реализации генетической информации. Два вида нуклеиновых кислот – ДНК и РНК. Полимерная цепочка нуклеиновой кислоты состоит из мономерных звеньев – нуклеотидов, которые в свою очередь состоят из трех частей: азотистого основания (пуриновое: аденин, гуанин; пиримидиновое: урацил, цитозин, тимин) (рисунок 6, 7); остатка сахара (D-рибозы или D-дезоксирибозы); остатка фосфорной кислоты.

Пуриновые и пиримидиновые циклические соединения, входящие в состав нуклеиновых кислот, называют просто основаниями. N-гликозиды оснований, содержащие рибозу или дезоксирибозу, называются нуклеозидами (таблица 21). Фосфатные эфиры нуклеозидов – нуклеотидами (рисунок 8). Нуклеотиды связаны друг с другом фосфодиэфирными связями.

Рисунок 6. Пурин и его производные.

Рисунок 7. Пиримидин и его производные.

Рисунок 8. Структурная формула нуклеотида АТФ.

Таблица 21

Названия нуклеотидных звеньев РНК и ДНК

I. Нуклеотидные звенья РНК*
основания	Урацил Ura (U)	Цитозин Cyt (C)	Аденин Ade (A)	Гуанин Gua (G)
нуклеозиды	Уридин Urd	Цитидин Cyd	Аденозин Ado	Гуанозин Guo
5'-нуклеотиды	Уридин-5'-фосфат или 5'-уридиловая кислота Urd-5'-P или UMP	Цитидин-5'-фосфат или 5'-цитидиловая кислота Cyd-5'-P или CMP	Аденозин-5'-фосфат или 5'-адениловая кислота Ado-5'-P или AMP	Гуанозин-5'-фосфат или 5'-гуаниловая кислота Guo-5'-P или GMP
II. Нуклеотидные звенья ДНК*
основания	Тимин Thy (T)	Цитозин Cyt (C)	Аденин Ade (A)	Гуанин Gua (G)
нуклеозиды	(дезокси-) тимидин dThd	дезокси-цитидин dCyd	дезокси- аденозин dAdo	дезокси- гуанозин dGuo
5'-нуклеотиды	тимидин-5'-фосфат dTMP	дезоксицитидин-5'-фосфат dCMP	дезоксиаденозин-5'-фосфат dAMP	дезоксигуанозин-5'-фосфат dGMP

* Изомеры 5'-нуклеотидов, в которых фосфат связан с кислородом при С-3', называют 3'-нуклеотидами.