3. Катехины проявляют 1%-ным раствором ванилина в концентрированной хлороводородной кислоте, в видимом свете наблюдается красное окрашивание.
Реже используют реактив Вильсона, 2%-ный метанольный раствор хлорокиси циркония, раствор пятихлористой сурьмы в хлороформе, диазореактив.
В ГФ Х1 изд. (2 том, 1990) приводится методика исследования методом БХ халконов и ауронов в траве череды, изофлавонов в корнях стальника; хроматографии в тонком слое сорбента на "Силуфоле" – флавоноидов в цветках и плодах боярышника, флавон-5-гликозидов в траве хвоща полевого.
Количественное определение
Для количественного определения флавоноидов в лекарственном растительном сырье используют физико-химические методы анализа. Преимущественно фотоэлектроколориметрические и спектрофотометрические методы.
Фотоэлектроколориметрический метод (ФЭК).
ФЭК-метод основан на измерении оптической плотности окрашенных растворов, полученных по реакции флавоноидов с солями металлов и азосочетания с солями диазония.
ГФ Х1 изд. (2 том, 1990) дает ФЭК-метод для определения содержания суммы флавоноидов в листьях вахты трехлистной. Предварительно сырье очищают от хлорофилла хлороформом, получают спиртовое извлечение флавоноидов, затем проводят реакцию образования азокрасителя с диазотированным стрептоцидом и измеряют оптическую плотность окрашенного раствора с помощью ФЭК. Содержание суммы флавоноидов рассчитывают по калибровочному графику, построенному по стандартному образцу рутина.
Спектрофотометрический метод (СФМ).
СФ метод основан на способности флавоноидов или их окрашенных комплексов поглощать монохроматический свет при определенной длине волны.
1. Получают спиртовое извлечение и измеряют собственное поглощение:
– в цветках бессмертника песчаного при длине волны 315 нм, рассчитывают содержание флавоноидов на изосалипурпозид с использованием оптической плотности Государственного стандартного образца (ГСО) изосалипурпозида;
– в корнях стальника при длине волны 260 нм; рассчитывают содержание изофлавоноидов на ононин с учетом оптической плотности ГСО ононина;
– в цветках пижмы измеряют оптическую плотность флавоноидов и фенол-карбоновых кислот в буферном растворе и пересчитывают содержание флавоноидов и фенолкарбоновых кислот на лютеолин с учетом оптической плотности ГСО лютеолина.
2. Получают спиртовое извлечение, затем проводят реакцию образования комплекса с 2%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида и измеряют оптическую плотность:
– в траве зверобоя в пересчете на рутин с учетом оптической плотности ГСО рутина;
– в траве горца перечного в пересчете на кверцетин с учетом удельного показателя поглощения комплекса кверцетина с алюминия хлоридом;
– в траве горца птичьего в пересчете на авикуларин с учетом удельного показателя поглощения комплекса авикуларина с алюминия хлоридом.
3. Получают извлечение антоцианов 1%-ным раствором хлороводородной кислоты из цветков василька синего, при этом образуются окрашенные оксониевые соли, у которых измеряют оптическую плотность и пересчитывают на 3,5-дигликозид цианидина (цианин) с учетом удельного показателя поглощения цианина в 1%-ном растворе хлороводородной кислоты.
Хроматоспектрофотометрический метод
Хроматоспектрофотометрический метод – более совершенный метод количественного определения флавоноидов, используется в сочетании с хроматографией, что позволяет произвести очистку и разделение суммы веществ на отдельные компоненты.
1. Предварительное разделение флавоноидов в тонком слое сорбента (цветки боярышника).
Стадии определения:
– получают спиртовое извлечение;
– очистка извлечения;
– хроматографическое разделение флавоноидов на пластинке "Силуфол" в системе растворителей хлороформ-метанол (8:2) вместе со свидетелем ГСО гиперозида;
– идентификация гиперозида и свидетеля на пластинках в УФ-свете;
– элюируют гиперозида и ГСО смесью диоксана и воды (1:1);
– измеряют оптическую плотность испытуемого раствора и ГСО при длине волны 365 нм;
– пересчитывают содержания гиперозида.
2. Предварительное разделение на колонке с полиамидом (плоды боярышника).
Стадии определения:
– получают спиртовое извлечение;
– отгоняют спирт и обрабатывают остаток 10%-ным раствором натрия хлорида;
– полученный раствор наносят на колонку с полиамидом;
– элюируют флавоноиды с колонки 95%-ным этанолом, собирают окрашенный в желтый цвет элюат в мерную колбу на 25 мл;
– измеряют оптическую плотность элюата при длине волны 365 нм;
– параллельно измеряют оптическую плотность элюата ГСО гиперозида, полученного аналогично элюату флавоноидов;
– пересчитывают на гиперозид с учетом оптической плотности элюата ГСО гиперозида.
3. В траве сушеницы топяной выделяют следующие стадии количественного определения:
– получают спиртовое извлечение;
– отгоняют спирт и остаток обрабатывают 10%-ным раствором натрия хлорида;
– полученный раствор переносят на колонку с полиамидом;
– элюируют флавоноиды с колонки 95%-ным этанолом и собирают окрашенный темно-желтый цвет элюат в мерную колбу на 50 мл;
– измеряют оптическую плотность элюата при длине волны 338 нм;
– параллельно определяют оптическую плотность раствора стандартного образца вещества сравнения (СОВС) калия бихромата;
– пересчитывают содержание флавоноидов на гнафалозид А с учетом оптической плотности СОВС и коэффициента пересчета калия бихромата на гнафалозид А и поправочного коэффициента на неполное элюирование гнафалозида А с полиамидного сорбента.
4. Количественное содержание ксантонов в траве золототысячника:
– получают извлечение подкисленным 60%-ным этанолом;
– 2 мл извлечения наносят на колонку с полиамидным сорбентом;
– элюируют ксантоны 95%-ным этанолом и собирают окрашенный в желтый цвет элюат в мерную колбу на 50 мл;
– получают окрашенный комплекс с алюминия хлоридом;
– измеряют оптическую плотность окрашенного комплекса;
– параллельно измеряют оптическую плотность окрашенного комплекса ГСО алпизарина с алюминия хлоридом;
– пересчитывают на алпизарин с учетом оптической плотности комплекса ГСО алпизарина с алюминия хлоридом.
ЗАГОТОВКА, СУШКА, ХРАНЕНИЕ СЫРЬЯ
Заготовка сырья проводится в фазу наибольшего накопления флавоноидов.
Заготовку проводят в период:
– бутонизации: бутоны софоры японской, трава череды;
– начала цветения: цветки бессмертника песчаного, пижмы, трава пустырника;
– массового цветения: цветки василька синего, трава зверобоя, горцев перечного, почечуйного и птичьего, астрагала шерстистоцветкового, фиалки, сушеницы топяной;
– вегетации: трава хвоща полевого, листья чая китайского;
– плодоношения: плоды боярышника, рябины черноплодной, софоры японской;
- осенью: корни стальника и шлемника байкальского; корни солодки можно заготавливать круглый год.
Сырье необходимо сушить вскоре после заготовки, т. к. флавоноидные гликозиды под влиянием ферментов в присутствии влаги легко гидролизуются на сахар и агликон, а свободные агликоны могут окисляться. Сушить сырье следует в тени или в сушилках с искусственным и естественным обогревом.
Так, если флавоноиды содержатся в сырье преимущественно в виде гликозидов, то сырье сушат в сушилках при температуре 50-60°С или воздушно-теневой сушкой в хорошо проветриваемом помещении. Не допускается сушка на солнце. Медленная сушка, особенно на солнце, ведет к разрушению флавоноидов.
Сырье необходимо оберегать от влаги и прямых солнечных лучей. Хранят в плотно укупоренной таре в сухом хорошо проветриваемом помещении по общему списку.
ПРИМЕНЕНИЕ ФЛАВОНОИДОВ В МЕДИЦИНЕ И ИХ ПРЕПАРАТЫ
Диапазон терапевтического применения лекарственного растительного сырья, богатого флавоноидами, очень широк. Флавоноиды не токсичны для человека при любом способе введения.
Ранее среди других биологических свойств флавоноидов было обнаружено их сосудоукрепляющее действие. Благоприятное влияние флавоноидов на состояние капиллярной системы обычно проявляется в снижении патологически повышенной проницаемости капилляров и в устранении их ломкости и хрупкости. Именно это свойство витамина Р открывает широкие возможности для терапевтического его применения, так как повышение проницаемости и ломкости сосудов довольно часто встречается в патологии человека. Так, изменение сосудистой стенки наблюдается при ревматизме, гипертонической болезни, Базедовой болезни, пневмониях и при многих инфекционных заболеваниях. Установлено, что флавоноиды способствуют сохранению аскорбиновой кислоты в организме, приводят к её накоплению в органах, прежде всего в надпочечниках. Учитывая эти данные, флавоноиды рекомендуют больным С-гиповитаминозом в комплексе с аскорбиновой кислотой.
Кроме того, флавоноиды оказывают нормализующее влияние на лимфоток, с чем, по-видимому, согласуется их противоотечное действие.
Наряду с действием на сосуды, флавоноиды известны и как слабые
кардиотонические средства: они способны урежать ритм сердечных сокращений и увеличивать их амплитуду. По другим данным, кверцетин, рутин и другие флавонолы восстанавливают силу утомленного или гиподинамического сердца, нормализуют пульс. Некоторые флавоноиды обладают слабым гипотензивным действием.
Флавоноидные соединения влияют на состав крови, снижают уровень
холестерина и г-липопротеидов, что наблюдали под действием кверцетина,
лютеолина и других Р-витаминных препаратов.
Многобразное действие флавоноидов
Флавоноиды различаются своими физическими и химическими свойствами, поэтому им нельзя приписать какое-то единое действие. Но все же некоторые действия для них характерны: они помогают при нарушениях проницаемости капилляров, при определенных нарушениях сердечной и сосудистой деятельности, при судорогах пищеварительного тракта. В суммарную эффективность того или иного лекарственного перпарата флавоноиды без сомнения вносят значительный вклад.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 |
