- Результаты исследовательской работы внедрены в учебный процесс кафедр микробиологии, вирусологии и иммунологии, стоматологии детского возраста, инфекционных болезней и эпидемиологии ДВГМУ, включены в программу усовершенствования врачей-бактериологов ФПК и ППС ДВГМУ, ГУЗ Институт повышения квалификации специалистов здравоохранения Хабаровского края в качестве лекционного и дополнительного учебно-методического материала.
Апробация материалов диссертации.
Материалы диссертации доложены на различных научных форумах международного, всероссийского, межрегионального уровня: 11-ом Международном симпозиуме фонда медицинского обмена Японии-России и стран Северо-восточной Азии (Ниигата, Япония, 2004), 12-ом Международном симпозиуме фонда медицинского обмена Японии-России (Красноярск, 2005), научно-практической конференции с международным участием, посвященной 70-летию НГМА «Медицина и образование в XXI веке» (Новосибирск, 2005), межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию стоматологической службы республики Саха (Якутия) «Актуальные проблемы и перспективы развития стоматологической службы» (Якутск, 2005), областной научно-практической конференции «Актуальные вопросы детской стоматологии в Амурской области» (Благовещенск, 2006), всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины», посвящённой 55-летию Читинской гос. медицинской академии (Чита, 2008), межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвящённой 50-летию стоматологического факультета Кемеровской государственной медицинской академии, (Кемерово, 2009), научно-практической конференции «Актуальные проблемы стоматологии», посвящённой 30-летию стоматологического факультета Дальневосточного государственного медицинского университета (Хабаровск, 2009), XI международном конгрессе МАКМАХ/ESCMID по антимикробной терапии (Москва, 2009).
Результаты диссертационного исследования обсуждены на заседаниях общества бактериологов Хабаровского края 2005-2009 г. г., на расширенном межкафедральном заседании кафедр микробиологии, вирусологии и иммунологии, инфекционных болезней и эпидемиологии, детских инфекционных болезней, стоматологии детского возраста, нормальной физиологии, гистологии, патологической физиологии, ДВГМУ, ЦНИЛ ДВГМУ, ФГУН «Хабаровский НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора», ХФ ДНЦ ФПД СО РАМН НИИ Охраны материнства и детства, 12 мая 2010 года, протокол № 5.
Личный вклад автора. Автором осуществлена систематизация и анализ материалов по частоте выявляемости и структуре лептотрихиозов. Лично автором проведено выделение, идентификация и оценка чувствительности к антибиотикам штаммов лептотрихий. При непосредственном участии автора подготовлены и проведены иммунологические исследования, все методы статистической обработки выполнены автором лично. Подготовлены публикации, рационализаторские предложения и заявки на изобретения. Доля участия в накоплении материала составляет 85%, в обобщении материала – до 100%.
Протокол научно-плановой комиссии № 8 от 01.01.01 года.
Номер государственной регистрации темы: 01.2.007 00903.
Публикации:
По теме настоящей диссертации опубликовано 16 научных статей, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ, и 2 методических пособия.
Объём и структура диссертации:
Диссертация изложена на 218 страницах машинописного текста, проиллюстрирована 23 таблицами и 18 рисунками. Она состоит из введения, обзора литературы, трёх глав собственных исследований, заключения, общих выводов, рекомендаций для внедрения результатов работы в медицинскую науку и практику здравоохранения, учебный процесс и приложений. Список литературы содержит 263 источника, из которых 90 отечественных и 173 иностранных авторов.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Leptotrichia buccalis являются потенциальными патогенами человека, вызывающими лептотрихиозы слизистых оболочек полости рта. Заселение представителями рода Leptotrichia полости рта у детей в основном происходит в период после прорезывания зубов. Leptotrichia можно отнести к маркерным микроорганизмам для выявления риска развития суб/декомпенсированных форм кариеса зубов у детей и развития гастродуоденита и язвенной болезни желудка и 12-ти перстной кишки.
2. Leptotrichia buccalis из числа региональных изолятов обладают выраженным патогенным потенциалом: ведущими факторами персистенции, адгезивной и коадгезивной активностью. Leptotrichia чувствительны к в-лактамным антибиотикам, цефалоспоринам, метронидазолу, проявляют устойчивость к аминогликозидам, фторхинолонам, макролидам, продуцируют бета-лактамазы.
3. Частота встречаемости лептотрихиозов слизистых оболочек полости рта за многолетний период увеличилась, возрастает число микст-инфекций и хронических форм. Возрастное распределение - лептотрихиозы СОПР характерны для лиц старше 46 лет и детей 1-3 лет, сезонность весенне-летняя.
4. Иммунобиологические изменения показателей клеточного и гуморального звеньев иммунитета могут стать достоверными критериями прогноза развития лептотрихиоза и/или перехода заболевания в хроническую форму.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Объекты, объём и методы исследования. Исследования выполнены в 2003-2009 г. г. на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО ДВГМУ Росздрава (при консультативной помощи руководителя клинико-диагностической лаборатории Хабаровского филиала ДНЦ ФПД Сибирского отделения РАМН НИИ Охраны материнства и детства, ведущего научного сотрудника, к. м.н, ). Все экспериментальные и клинические исследования проведены с разрешения комиссии по биомедицинской этике ГОУ ВПО «ДВГМУ Росздрава» (протокол г.)
Контингент обследованных был разделен на 4 группы по характеру выполняемой работы. В первую группу вошли 680 взрослых и 420 детей населения г. Хабаровска и Хабаровского края (жители города и села, русские и представители этнического населения – нанайцы) для исследования распространённости лептотрихий среди населения Хабаровского края. Вторую группу составили 99 детей от 14 дней до 3 лет (изучение этапов колонизации полости рта анаэробами), в третью группу вошли 96 детей 3, 6 и 12 лет по рекомендации ВОЗ для исследования кариеса зубов. Четвёртую группу составили пациенты острыми и хроническими формами лептотрихиозов слизистых оболочек полости рта, 116 человек. Среди осмотренных лиц преобладали женщины в возрасте от 46 до 69 лет - 67,5%. Подбор групп по возрасту, национальности осуществлен с учетом репрезентативности выборки. Углубленное стоматологическое обследование с использованием инструментальных, лабораторных методов исследований проведены совместно с профессором кафедры стоматологии детского возраста, д. м.н.
Материалом для микробиологических исследований были соскобы с корня языка, содержимое десневого желобка, мазки со слизистой полости рта, слюна, ротовая жидкость. Изучение микрофлоры полости рта (в 1-й группе - 1080, 2-й группе – 99, в3-ей группе – 96 человек, в 4-й группе – 116 человек) проводилось качественными и количественными методами с использованием среды Уриселект, кровяного агара, желточно-солевого агара, среды Эндо, энтеро-бактагар (, 2004). Исследование микрофлоры полости рта проводилось в соответствии с приказом МЗ СССР № 000 от 22.04.85г. «Об унификации микробиологических методов исследований, применяемых в клинико-диагностических лабораториях». Состояние микрофлоры полости рта оценивали качественными и количественными методами (-Литвак, 1997).
Количество микроорганизмов определяли в 1 г исследуемого материала, выражали в десятичных логарифмах (lg КОЕ/г). Идентификацию микроорганизмов проводили по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам с применением тест-систем (Lachema, Чехия и ПБДЭ, ПБДС, Н. Новгород; Candi Select, Уриселект - фирмы «Biorad»). Для изучения факторов патогенности использованы по 28 штаммов бактерий Leptotrichia spp., Streptococcus spp., Staphylococcus aureus и дрожжеподобных грибов рода Candida spp., выделенных в виде монокультур и в ассоциации друг с другом.
Для выявления адгезивной способности штаммов лептотрихий, была изучена их гистадгезивная активность. Количественную оценку гистадгезивной активности и коадгезивной активности в естественных условиях проводили в соответствии с методами, разработанными авторским коллективом кафедры ( с соавт., 2009-10 г. г.) Для определения факторов, способствующих сохранению жизнеспособности лептотрихий, стафилококков, стрептококков и дрожжеподобных грибов рода Candida в полости рта, проводили изучение свойств персистенции: антилизоцимную (АЛА) и антикомплементарную активность (АКА), антиинтерфероновую (АИА) по методу «отсроченного антагонизма» ( и соавт., 1986 г., 1992 г., 1996 г.)
Статистическую обработку результатов осуществляли с применением пакета прикладных программ EXCELL в операционной системе Windows 2003. Использовались методы параметрической статистики (средняя арифметическая и её стандартная ошибка). Достоверность различий между сравниваемыми средними значениями в основной и контрольной группах устанавливали критерием Стьюдента ( с соавт., 2001). Основные направления, методы и объём исследования изложены в таблице 1.
Таблица 1
Направления, методы и объём исследования
№ п/п | Направления исследований | Методы исследований | Объём исследован-ного материала |
1 | 2 | 3 | 4 |
1. | Анализ научных литературных источников | Контент-анализ, сравнительный анализ | 263 литературных источника: 90 отечественных 173 иностранных |
2. | Эпидемиологич. статистика | Ретроспективный и оперативный эпидемиологический стат. анализ | Все данные |
3. | Клинико-анамнестический анализ | 1.Анализ данных ККВД г. Хабаровска по заболеваемости лептотрихиозом. 2. Изучение амбулаторных карт пациентов ККВД, поликлиники ДВГМУ «Унистом», МУЗ Детской поликлиники № 17 3. Опрос и обследование больных ЛСОПР 4. Опрос и обследование детей на носительство Leptotrichia. 5. Опрос и обследование взрослых на носительство Leptotrichia | Журналы лабораторного исследования 1999-2008 г. г. 224 карты 118 карт 243 карты 116 человек 420 детей 680 человек |
4. | Микробиологические исследования | 1. Взятие клинического материала (соскоб с корня языка) у всех обследуемых групп. 2.Микроскопия мазка с окраской м. Грама 3.Получение чистой культуры Leptotrichia 4.Метод идентификации анаэробов микротест-системами ANAEROtest 23 и в автоматическом режиме на баканализаторе АТВ с использованием тест-систем API 20А (производства компании «Био-Мерье», Франция) 4.Получение чистых культур Staphylococcus, Streptococcus, Candida, et. сtr. из микробных ассоциаций c Leptotrichia 5.Исследование микробного пейзажа корня языка, десневого желобка, слюны бактериологическим методом на стандартных средах 6. Экспресс-определение в-лактамазы (пенициллиназы) йодометрическим методом у штаммов Leptotrichia | 1080 проб 1080 проб 334 пробы, 28 чистых культур 28 проб 28 проб 334 пробы, 108 чистых культур из ассоциаций 334 пробы 28 проб Leptotrichia + 102 пробы ассоциант. |
Продолжение таблицы 1 | |||
5. | Оценка иммунобиологического статуса | 1. Определение уровня клеточного иммунитета – содержание лейкоцитов, лимфоцитов и их субпопуляций: CD3, CD4, CD8, CD16, CD19, методом лазерной проточной цитометрии; оценка ИРИ, ЦИК 2. Количественное определение IgA, IgM, IgG сыворотки крови м. радиальной иммунодиффузии в агаровом геле по G. Manchini et al. 1963, с исп. наборов моноспецифических антисывороток к Ig 3. Определение уровня иммуноглобулинов IgA, sIgA, IgM, IgG в слюне методом ИФА (микропланшетный фотометр Multiskan пр-ва Thermo Scientific) 4. Определение фагоцитарной активности (ФАН) с инертными частицами латекса размером 1,1м ( и соавт. 1977), спонтанный/индуциров. зимозаном тест 5. Определения уровня лизоцима слюны нефелометрическим методом по Дорофейчук 1968 в модификации с соавт., 1980 | 78 человек / опыт 67 человек /контроль 99 проб 99 проб 99 проб 78 человек / опыт 67 человек /контроль |
8. | Исследование чувствительности к антибиотикам | Диско - диффузионный метод, метод серийных разведений (определение МПК) по МУК 4.2.1890-04 Минздрава России, 2004 г. Автоматическое определение - тест-системы ANA32 на АТВ | 28 проб |
9. | Определение резистентности Leptotrichia к антисептическим растворам | Определение бактерицидной активности антисептических растворов: 1. Хлоргесксидина биглюконата 0,05 % 2. Мирамистина 0,01 % 3. Коллоидного раствора серебра «Сильверия» 0,05 г/л 4. Стоматофит /Польша/, in vitro и in vivo по методике НИИЭМ им. Пастера, 2007 | 28 проб/ 90 пациентов |
10. | Статистическая обработка полученных данных | Методы описательной и параметрической статистики на персональном компьютере с использованием программы Statistica 6.0 (средняя арифметическая М, ошибка m, доверительный коэффициент t, коэффициент Пирсона r, критерий ч2). | Все данные |
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 |
