Методическая разработка по теме: «Питательные среды» (стр. 4 )

Контроль качества: 1. Через 24 часа на чашках должно вырасти

а) из 100 микробных клеток патогенных культур не меньше 20 колоний

б) из 100 тыс. клеток E. coli не больше 10 тыс.

из 10 тыс. клеток E. coli не больше 1000 колоний.

в) из смеси 100 клеток патогенных культур и 100 тыс. E. coli - при наличии обильного роста колоний E. coli патогенные микробы должны легко выделятся и дифференцироваться.

г) из смеси 100 клеток патогенных культур с 10 тыс. клеток E. coli - должны легко выделятся и дифференцироваться колонии патогенных микроорганизмов.

2.Патогенные микроорганизмы должны расти в виде бесцветных сочных колоний в S-форме. Колонии E. coli должны быть брусничного цвета.

Среды Гисса - среды с углеводами и индикатором, используемые для определения сахаролитических свойств микробов в процессе их идентификации. Сухие коммерческие среды содержат углевод (глюкозу, лактозу, сахарозу, маннит, мальтозу и др.), индикатор ВР (смесь водного голубого и розоловой кислоты), питательный агар и соли минеральные. Для приготовления сред Гисса полужидких 20 г сухого порошка растворяют в 1 л дистил. воды при подогревании, доводят раствор до кипения, разливают в пробирки по 3 - 4 мл и автоклавируют 30 мин при 112°С. Правильно приготовленная среда должна иметь зелено-голубой цвет и не прорастать в течение суточной инкубации в термостате при 37°С. Иссл. культуру засевают уколом петли в столбик среды, инкубируют в термостате при 37°С сутки или более в зависимости от идентифицируемого вида. Перекрашивание среды в желтый цвет указывает на ферментацию сахара с образованием кислоты; такое же перекрашивание среды и появление в ее толще пузырьков - на ферментацию сахара с выделением кислоты и газа. При отсутствии ферментативной активности у микроба среда мутнеет, но цвета не меняет. Жидкие среды Гисса готовят на 1% пептонной воде, рН 7,4, с 0,5-1% концентрацией углевода и индикатором Андраде или бромтимоловым синим. В пробирки со средой опускают поплавки. Среду стерилизуют в автоклаве при 112°С в течение 30 мин. Образование кислоты регистрируют по изменению цвета среды (соответственно в розовый и желтый), образование газа по накоплению его в поплавках Начальный и при отсутствии ферментации цвет среды - соломенно-желтый с индикатором Андраде и желто-зеленый с индикатором бромтимоловым синим.

Трехсахарный агар

(среда Олькеницкого)

предназначена для дифференциации энтеробактерий по способности сбраживать углеводы в присутствии индикатора.

Рост на трехсахарном железосодержащем агаре:

1. Контроль (незасеянная среда)

2. Salmonella серовара Typhimurium

3. Escherichia coli

4. Shigella flexneri

5. Salmonella серовара Typhi

Пептический перевар животной ткани, гидролизат казеина, дрожжевой и мясной экстракты являются источником азотистых веществ, серы, микроэлементов, витаминов группы В и др. Лактоза, сахароза и глюкоза – ферментируемые субстраты. Тиосульфат натрия в сочетании с ионами железа являются индикатором на сероводород, феноловый красный – индикатор рН.

Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, способствуют образованию многих кислот, изменяющих цвет среды с красного на желтый. Большее количество кислот освобождается в столбике (при ферментации), по сравнению со скошенной частью (окисление). Бактерии образуют также щелочные продукты (в ходе окислительного декарбоксилирования пептона). Принципиальное значение имеет соотношение глюкоза/лактоза (сахароза) = 1:10. Индикатор феноловый красный становится желтым при значениях рН менее 6,8. При исходном значении рН=7,4 требуется относительно небольшое количество кислот для развития желтого окрашивания среды. Щелочные продукты могут нейтрализовать небольшое количество кислоты, образуемое в скошенной части при ферментации глюкозы. Таким образом, щелочной (красный) скос и кислый (желтый) столбик указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не ферментирует лактозу и/или сахарозу. Бактерии, ферментирующие помимо глюкозы лактозу и/или сахарозу, образуют большое количество кислот, которое не может быть нейтрализовано аминами, поэтому скос и столбик будут кислыми (желтыми). Если в ходе ферментации образуется газ, его можно определить по пузырькам и характерным разрывам среды. Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода, который, взаимодействуя с ионами железа, образует нерастворимый черный преципитат сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде и почернение обычно бывает в зоне столбика.

Среда Пешкова - дифференциально-диагностическая полужидкая питательная среда для определения у микроорганизмов подвижности и способности сбраживать глюкозу; содержит агар, глюкозу и индикатор бромтимоловый синий.

Среда Симмонса - питательная среда, применяемая для определения способности бактерий использовать в качестве единственного источника углерода цитраты. Готовят добавлением к среде Козера 0,02% магния сульфата, 0,3% нейтрального цитрата натрия, 2% агара. После растворения агара устанавливают рН 7,2 и прибавляют 10 мл на 1 л 15% спиртового раствора бромтимолового синего. Среду фильтруют, разливают по пробиркам, стерилизуют 15 мин при 120°С, скашивают. Иссл. Культуру засевают штрихом по поверхности. Ассимилирующие цитраты дают рост и изменяют цвет среды на синий, не ассимилирующие цитрат - не дают роста и не меняют цвета среды.

Среда Клиглера – эту среду в качестве дифференциальной рекомендуют для изучения у грамотрицательных бактерий кишечного происхождения способности ферментировать глюкозу и лактозу, а также продуцировать сероводород.

Размешать 57,5 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Тщательно перемешать и разлить в пробирки. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 А (121°С) в течение 15 мин. Остудить пробирки в таком положении, чтобы получить скошенную часть и столбик высотой 2,5 см.

Наилучшие результаты получают на свежеприготовленной среде.

Не рекомендуется применять пробирки с завинчивающимися крышками и флаконы.

Принцип и оценка результата:

Клиглер разработал среду для дифференциации бактерий тифо-паратифозной группы. Затем он провел оценку этой среды в сочетании с двойной средой Ресселя. Bailay и Lacey предложили заменить индикатор Андреде на феноловый красный, что позволяет дифференцировать грамотрицательные бактерии по их способности ферментировать глюкозу и лактозу и продуцировать сероводород. На агаре Клиглера можно отличать бактерии, ферментирующие и не ферментирующие лактозу, Salmonella typhi от других сальмонелл, а также Salmonella paratyphi А от Salmonella schottmuelleri и Salmonella enteritidis.

Тиосульфат натрия и сульфат железа усиливают образование сероводорода. Феноловый красный – индикатор рН. О ферментации глюкозы свидетельствует желтый столбик, лактозы – желтый скос, об образовании сероводорода – почернение столбика. На агар Клиглера для предварительной идентификации засевают чистые культуры с чашечных сред, например, Агара МакКонки (М082), Висмут-сульфитного агара (М027) или Дезоксихолат-цитратного агара (М065), Агара Сальмонелла-Шигелла (М108).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-розовый порошок.

Консервирующие (транспортные) питательные среды

Консервирующие среды предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала. В них предотвращается гибель патогенных микроорганизмов и подавляется развитие сапрофитов. В качестве примера можно использовать глицериновую смесь, используемую для сбора испражнений при исследованиях, проводимых с целью обнаружения некоторых видов бактерий.

Магниевая среда - среда содержит хлорид магния; она предназначена для накопления и выделения патогенных энтеробактерий при санитарных исследованиях продуктов питания, сырья и объектов внешней среды.

Селенитовый бульон - среда предназначена для накопления и выделения бактерий рода Salmonella при санитарных исследованиях продуктов питания, сырья и объектов внешней среды.

Тестовый контроль для закрепления материала

Тема: «Питательные среды»

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ. 1 ВАРИАНТ

Выбрать один правильный ответ.

1. Питательные среды, содержащие легко усвояемые вещества:

а) унифицированные

б) питательные

в) изотонические

г) влажные

2. Назовите простые питательные среды:

а) среды Гисса

б) МПБ

в) кровяной агар

г) сывороточный агар

3.Уплотнитель питательных сред:

а) кровь

б) углеводы

в) сыворотка

г) агар-агар

4. Среды, которые употребляют для культивирования определенного вида микроорганизмов:

а) консервированные

б) основные

в) избирательные

г) общеупотребительные

5. Прибор для определения рН-среды

а) автоклав

б) термостат

в) аппарат Михаэлиса

г) печь Пастера

6. Способ фильтрации сред:

а) с помощью индикаторных бумажек

б) отстаиванием

в) с помощью яичного белка

г) центрифугированием

7. Вещества, входящие в среды Гисса:

а) кровь

б) желатин

в) углеводы

г) сыворотка

8. Жидкие элективные среды:

а) общеупотребительные

б) консервирующие

в) специальные

г) накопления

9. Питательные среды, содержащие постоянное количество ингредиентов:

а) питательные

б) изотонические

в) влажные

г) унифицированные

10. Назовите сложную питательную среду:

а) МПА

б) желатин

в) МПБ

г) среды Гисса

11. Среды, позволяющие отличить один вид микроба от другого:

а) общеупотребительные

б) основные

в) дифференциально-диагностические

г) элективные

12. Консервирующая среда:

а) МПБ

б) МПА

в) сывороточный агар

г) глицериновая смесь

13. При осветлении сред используют:

а) агар-агар

б) кровь

в) желатин

г) куриный белок

14. Контроль стерильности сред осуществляется в:

а) автоклаве

б) аппарате Михаэлиса

в) печи Пастера

г) термостате

15. Для микроба, не растущего на простой среде используют среды:

а) консервированные

б) основные