«Исследование бактерицидных и кислотно-основных свойств жевательной смолки» (стр. 6 )

Методика окраски бактерий по методу Грама

1. Нанести каплю воды на прямое предметное стекло.

2. В каплю воды поместить бактериальную культуру.

3. Мазок высушить и зафиксировать над пламенем спиртовки.

4. На фиксированный мазок поместить полоску фильтровальной бумаги.

5. На полоску фильтровальной бумаги нанести генцианвиолет на 1–2мин.

6. Фильтровальную бумагу удалить, краску слить и нанести раствор Люголя дважды: 1 раз – для того, чтобы смыть остатки красителя с мазка (при этом раствор не задерживают на мазке, а сразу же при легком покачивании сливают), 2 раз – на 2 минуты (до почернения мазка).

7. Раствор Люголя слить и на мазок нанести 96% спирт на 15–20 секунд
в зависимости от толщины мазка, пока мазок не станет серо-стального цвета.

8. Мазок промыть дистиллированной водой.

9.Мазок дополнительно окрасить фуксином Циля на 2–3мин (воспользовавшись полоской фильтровальной бумаги).

10. Краситель смыть водой, препарат высушить, микроскопировать.

Грамположительные (Гр+) бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Грамотрицательные (Гр-) бактерии окрашиваются в красный (розовый) цвет.

Приложение 11

Водородный показатель рН

pH – водородный показатель. Это понятие, ввёл датский химик Сёренсен для точной числовой характеристики среды раствора и предложил математическое выражение для его определения:

рН = - lg [H+].  (1) 

  Характер среды имеет большое значение в химических
и биологических процессах, в зависимости от типа среды эти процессы могут протекать с различными скоростями и в разных направлениях. Поэтому
во многих случаях важно как можно более точно определять среду раствора. Существует нейтральная среда – рН = 7, рН < 7 – кислотная, при рН > 7 – щелочная [5]. Среду исследуемого раствора можно приблизительно определить по окраске индикаторов.

Наиболее информативным показателем кислотно-основного равновесия является водородный показатель (рН). Этот показатель варьирует
в зависимости от участка полости: кислое значение рН в межзубных промежутках и нейтральное или слабощелочное – на кончике языка. Интегральным показателем кислотного гомеостаза в полости рта является рН слюны. В норме рН слюны находится в пределах 6,4–7,5.

Изменения кислотно-щелочного равновесия в полости рта могут быть двух видов: ацидоз или алкалоз. При любом направлении сдвигов гомеостаза следует различать изменения физиологические и патологические. Физиологические изменения кратковременны, не приводят к нарушению нормальных физиологических процессов и не оказывают влияния на структуру и функции тканей полости рта. Патологические изменения значительно выходят за границы нормы и приводят к нарушениям структуры и функций тех или иных тканей полости рта: кариесу, десквамации эпителия слизистой, отложению зубного камня, пародонтиту.

Кислотно-щелочное равновесие в полости рта зависит от наличия налёта, пищи, слюны.

Микробный налёт образуется, в основном, на поверхностях зубов, искусственных протезов и на спинке языка. Зубной налёт (зубная бляшка) – скопление микроорганизмов, обитающих в полости рта, на поверхности зубов с включением бесструктурного вещества органической природы: белков, липидов, углеводов. Среди углеводов важное значение имеет декстран – гомоолигосахарид, состоящий из остатков глюкозы. Декстран обладает способностью адгезировать (сорбировать) бактерии в зубную бляшку. Зрелый зубной налёт в 1г содержит около 2,5 • 1011 бактерий.[11]

Пища является дестабилизатором кислотно-основного равновесия. Влияние пищи следует рассматривать в нескольких аспектах.

Во-первых, пища содержит кислоты и основания. Так, фрукты, соки содержат значительное количество органических кислот, которые вызывают резкое снижение рН ротовой жидкости (до 4–3 единиц). Если такой пищевой продукт недолго задерживается в полости рта, это изменение кратковременно. Более длительный контакт может вызвать, например, эрозию твёрдых тканей зубов: эмали и дентина. Некоторые пищевые продукты содержат ионы аммония, мочевину (сыр, орехи, ментол) и являются алкогенными. Обычно изменения реакции смешанной слюны в щелочную сторону незначительны и не превышают рН=8.

Во-вторых, содержащиеся в пище углеводы метаболизируются микрофлорой зубного  налёта, с образованием большого количества органических кислот, преимущественно лактата. Наиболее ацидогенными являются моно - и дисахариды.

В порядке убывания ацидогенности их можно расположить следующим образом: сахароза, инвертный сахар, глюкоза, фруктоза, мальтоза, галактоза, лактоза. Особая ацидогенность сахарозы обусловлена приспособляемостью микроорганизмов к избытку сахарозы и объясняется её очень быстрой ферментацией в зубном налёте, выраженным стимулирующим действием на рост зубного налёта, высокой способностью  стимулировать выработку
в зубном налете полисахаридов, в частности, полисахаридов с адгезивными свойствами.

В-третьих, приём пищи и её пережевывание стимулируют слюноотделение и, тем самым, способствуют нивелированию возникающих сдвигов рН.

Кислотно-щелочное равновесие в полости рта зависит от слюны. Слюна является главным фактором нивелирования сдвигов рН в ротовой полости
в физиологических условиях. Её влияние на этот показатель обусловлено:

механическим очищением от остатков пищи;  противомикробным действием лизоцима, цианидных анионов, фагоцитов, иммуноглобулинов и других компонентов; работой буферных систем: бикарбонатной (обеспечивает около 80% буферной ёмкости слюны), белковой и фосфатной.

Реализация стабилизирующих рН свойств слюны существенно зависит
от скорости её секреции, реологических свойств (вязкости). В целом, чем выше скорость слюноотделения и меньше вязкость, тем сильнее способность слюны противостоять изменениям рН в полости рта. Мышечные сокращения, связанные с жеванием, глотанием и речью способствуют опорожнению слюнных желез и перемещениям слюны в полости рта, и поэтому могут рассматриваться как фактор стабилизации кислотно-щелочного равновесия.

Механизмы саморегуляции кислотно-щелочного равновесия не всегда работают достаточно эффективно. Поэтому используются различные пути воздействия на основные элементы регуляции.

Наиболее действенным путём является воздействие на ротовую микрофлору и её метаболическую активность. Это воздействие может осуществляться несколькими способами:

механическое удаление с помощью средств гигиены (флоссинг и чистка языка, чистка зубов); применение антисептиков, фторидов; ограничение поступления  в ротовую полость легкометаболизируемых углеводов.

Другим путём воздействия на кислотно-основное равновесие в полости рта является влияние на ротовую жидкость, например, увеличение скорости слюноотделения. Повышенной саливации способствуют более жёсткие пищевые продукты (за счёт мышечной активности), жевательные резинки, добавление в пищу небольшого количества кислот, например, лимонной кислоты.

Повышение скорости слюноотделения ведёт к ускорению механического очищения зубов, полости рта от остатков углеводов пищи, спущенного эпителия; происходит усиление поступления в полость рта новых молекул буферных систем, противомикробных компонентов слюны.

Буферная ёмкость слюны. Это способность нейтрализовать кислоты
и щёлочи. Установлено, что приём в течение длительного времени углеводистой пищи снижает, а приём высокобелковой – повышает буферную ёмкость слюны. Высокая буферная ёмкость слюны – фактор, повышающий устойчивость зубов к кариесу.

Приложение 12

Диаграмма 1. Результаты социологического опроса

«Средства для освежения дыхания»

Приложение 13

Таблица 2. Изменение рН слюны при употреблении исследуемых
средств для освежения дыхания

№ индивидуума	рН слюны до исследования	рН слюны после употребления дольки лимона	рН слюны после употребления средства для освежения дыхания
1	6,71	5,91	6,89
2	6,80	6,50	6,59
3	6,83	5,26	6,77
4	6,59	4,73	6,86
5	6,97	6,0	6,40

       Приложение 14

Таблица 3. Микроорганизмы, полученные от исследуемых индивидуумов

№ индивидуума	Фото посева	Наличие и  обильность роста	Количество культур	Наличие гемолитических организмов
1		Обильный	2 – желтые и белые колонии	б – гемолиз
2		Обильный	2 – желтые и белые колонии	б – гемолиз
3		Обильный	3- желтые, белые и зеленоватые колонии	б – гемолиз,  в - гемолиз
4		Обильный	3- желтые, белые и зеленоватые колонии	б – гемолиз,  в - гемолиз
5		Обильный	2 – желтые и белые колонии	б – гемолиз

Приложение 15

Таблица 3. Бактерицидная активность исследуемых препаратов

№ объекта	Название	Высокая	Средняя	Низкая	Примечание
1	«Orbit»	-	-	+
2	«Halls»	-	-	+	Частично сдерживает в-гемолиз (индивидуумы 3,4)
3	смолка	-	-	+
4	«Минторол»	-	-	+
5	«Rondo»	-	-	+

Приложение 16

  1  2  3  4  5

Рис. 13 Фотографии микроорганизмов под микроскопом:
1 – объект № 1; 2 – объект № 2; 3 – объект  № 3; 4 – объект  № 4;
5 – объект № 5

Приложение 17

Таблица 4. Бактерицидная активность исследуемых препаратов
по отношению к золотистому стафилококку и кишечной палочке

№ объекта	Наличие и обильность роста
золотистый стафилококк	кишечная палочка
1	чужеродные бактерии	чужеродные бактерии
2	обильный рост	обильный рост
3	обильный рост	обильный рост
4	задержка роста	задержка роста
5	обильный рост	обильный рост