Микробиологические исследования окружающей среды (стр. 3 )

— 2,0±0,1 г (см3) при выявлении аэробных, факультативно-анаэробных и анаэробных микроорганизмов для высева в 2 пробирки с жидкой питательной средой;

— 10,0±0,1 г (см3) при выявлении анаэробных микроорганизмов в консервах детского и диетического питания для высева в 2 пробирки с питательной средой;

— 1,0±0,1 г (см3) — для высева глубинным методом в чашку Петри;

— не менее 10±0,1 г (см3) — для приготовления разведения;

— в количестве, необходимом для погружения электродов в анализируемый продукт при определении его рН.

После отбора навесок продукта консервы сохраняют до окончания анализа и оформления результатов при температуре 4±2°С в условиях, исключающих повторное заражение микроорганизмами.

Если в посевах будут выявлены жизнеспособные микроорганизмы, то в случае необходимости, из соответствующей банки, хранящейся при температуре 4±2°С, в соответствии с требованиями нормативного документа отбирают дополнительные навески продукта для высева в питательную среду с целью количественного подсчета обнаруженных микроорганизмов.

Для определения промышленной стерильности консервов в каждой единице упаковки консервов устанавливают отсутствие (присутствие) тех групп микроорганизмов, показатели и нормы к которым приведены в нормативном документе на анализируемый вид консервов. При отсутствии требований к микробиологическим показателям в зависимости от принадлежности консервов к определенной группе в них выявляют следующие микроорганизмы:

А) в низкокислотных консервах (группа А), предназначенных к реализации при температуре ниже 40 °С, выявляют: жизнеспособные мезофильные аэробные, факультативно-анаэробные и анаэробные микроорганизмы;

Б) в низкокислотных консервах (группа А), которые могут при реализации подвергаться воздействию температуры 40°С, дополнительно выявляют: термофильные аэробные, факультативно-анаэробные и анаэробные микроорганизмы, выделяя среди них кислотообразующие бациллы;

В) в консервах группы Б и В выявляют: мезофильные анаэробные микроорганизмы, дрожжи, плесневые грибы и молочно-кислые микроорганизмы;

Г) в консервах группы Г выявляют: дрожжи, плесневые грибы и молочно-кислые микроорганизмы;

Д) в концентрированных плодовоягодных консервах группы Г выявляют дрожжи и плесневые грибы;

Е) в пастеризованнных газированных фруктовых соках и напитках группы Е определяют: культуру мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, БГКП, дрожжи, плесневые грибы, молочно-кислые микроорганизмы.

Кулинарная продукция

Общие технические требования к кулинарной продукции

Кулинарная продукция, сырье и полуфабрикаты, используемые для ее изготовления, должны соответствовать требованиям госстандартов предприятий, сборников рецептов блюд и кулинарных изделий.

Для изготовления кулинарной продукции не допускается использование продуктов животноводства без ветеринарных свидетельств, продукции и компонентов с истекшими сроками годности и не отвечающих требованиям нормативных документов, а также запрещенных к использованию СанIIиН 42–123–5777.

В сырье и пищевых компонентах, используемых при производстве кулинарной продукции, содержание антибиотиков, гормональных препаратов, микотоксинов, пестицидов, санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов не должно превышать нормы.

При производстве кулинарной продукции не допускается использование пищевых добавок, инвентаря, упаковочных материалов. оборудования, не разрешенных к применению органами госсанэпиднадзора.

Микробиологические показатели кулинарной продукции характеризуют соблюдение технологических и экологических требований при ее производстве и оцениваются следующими группами микроорганизмов:

1. КМАФАнМ (КОЕ/г).

2. БГКП (колиформные бактерии).

3. S. aureus.

4. Бактерии рода Proteus.

5. Патогенные бактерии, в том числе сальмонеллы.

Санитарно-показательные и патогенные микроорганизмы определяют во всех блюдах:

— наличие коагулазоположительных стафилококков определяют в большинстве блюд, за исключением некоторых видов горячих супов (борщи, щи, рассольники, суп-харчо, солянки, картофельные супы, бульоны);

— количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов не определяют в блюдах, содержащих по рецептуре специфическую микрофлору (салатах из маринованных овощей, квашеной капусты, соленых огурцов, окрошках, квасе, кефире, твороге, сметане);

— содержание кишечной палочки определяется в блюдах или кулинарных изделиях, при изготовлении которых в технологическом процессе предусмотрены ручные операции после проведения термической обработки (салаты из сырых, маринованных овощей и фруктов, квашеной капусты, соленых огурцов с добавлением яблок, хрена, салаты с мясом, в том числе птицы, рыбы, колбасных изделий, копчености, заливные блюда, паштеты, пюре, макароны, рис, картофель, кисели, компоты, желе, муссы).

7 микробиологическИЕ исследованиЯ продуктов детского питания

Продукты детского питания по консистенции делятся на сухие и жидкие, а по составу — на пресные и кисломолочные смеси. В качестве заквасок для кисломолочных смесей используются бифидобактерии и лактобактерии, ацидофильная палочка.

По назначению продукты детского питания могут быть классифицированы как предназначенные для:

— смешанного и искусственного вскармливания детей;

— питания детей первого года жизни в качестве прикорма;

— детей дошкольного и школьного возраста;

— лечебного питания детей.

К продуктам первой группы относятся «заменители материнского молока» — высококачественные продукты, изготовленные преимущественно на основе коровьего молока, а также на основе белков, сои и прочих, максимально приближенных по составу к материнскому молоку и, тем самым, адаптированные к особенностям метаболизма, функционального состояния и иммунореактивности ребенка первого года жизни.

К этой же группе продуктов относятся и частично адаптированные формулы, включающие отечественные и зарубежные смеси прежних поколений, а также смеси для детей второго полугодия жизни (так называемые «последующие формулы»), которые также могут использоваться в питании новорожденных детей.

Для детского питания в течение первого года жизни как прикорм также используют группу продуктов детского питания: на молочной основе, на зерновой основе, на плодоовощной основе, на мясной основе, на рыбной основе.

Среди них наиболее широко распространены жидкие и пастообразные молочные продукты, изготовленные из цельного коровьего молока: молоко, кисломолочные продукты, творог, поскольку эти продукты используются в качестве прикорма детей от 1-го до 3-х месяцев.

При организации контроля над продукцией детских молочных кухонь следует руководствоваться СанПиН № 42–123–4940–88 «Микробиологические нормативы и методы анализа продуктов детского, лечебного и диетического питания и его компонентов», методических рекомендаций «Проведение санитарно-бактериологического исследования продукции детских молочных кухонь».

При этом необходимо особо обращать внимание на следующие положения:

— молоко, доставленное из хозяйства или с молочных заводов должно быть натуральным или нормализованным;

— помещение для приготовления молочной закваски должно быть изолировано и оборудовано холодильным шкафом или камерой для хранения кефирных грибов и молочных заквасок. Молочные закваски, также как и кефирные, должны регулярно подвергаться лабораторным химико-бактериологическим анализам;

— на каждой порции продукции должна быть этикетка с указанием вида, количества продукции, даты и часа приготовления;

— срок хранения готовой продукции не более 1-х суток после окончания технологического процесса;

— продукцию молочных кухонь необходимо доставлять на раздаточные пункты на специально оборудованном транспорте.

Для оценки продукции детских молочных кухонь необходимо:

1. Определять КМАФАнМ в 1,0 см3 продукта.

2. Определять БГКП.

3. Определять содержание золотистого стафилококка (S. aureus).

4. Проводить бактериоскопию кисломолочной продукции и руководствоваться следующими показателями:

— в пастеризованных и вареных смесях общее микробное обсеменение в 1,0 г/см3 продукта не должно превышать 500, а титр бактерий группы кишечных палочек более 11,1;

— в кисломолочных продуктах титр бактерий группы кишечных палочек не более 11,1; бактерии S. aureus должны отсутствовать в 1,0 г/см3 исследуемого продукта.

На таблицах 4–6 Приложения отражены экологические показатели безопасности питания детей изделиями из молока.

Подготовка проб пищевых продуктов к исследованию

Перед посевом жидкие и полужидкие продукты тщательно перемешивают, определяют рН, и в случае рН ниже 7,0–7,2 подщелачивают стерильным 10 %-ным раствором соды до нейтральной среды.

Сухие продукты «Детолакт», «Новолакт», «Алеся» и другие, предназначенные для детей с первого дня жизни, перед посевом должны подвергаться предварительной инкубации в неселективной жидкой среде для восстановления физиологических свойств бактерий, поврежденных в процессе технологической обработки продукта. В качестве неселективной среды используют фосфатный буферный раствор. Без предварительной инкубации исследуют сухие продукты, подвергающиеся различным способам термической обработки перед употреблением: биологически активные добавки, стерилизованные кисломолочные (сухие и жидкие) и пастообразньие продукты детского питания и составляющие его компоненты.

При контроле микробиологического качества и безопасности продуктов детского питания определяют следующие группы организмов:

1. КМАФАнМ.

2. БгкП.

3. Е. соli.

4. S. aureus.

5. В. cereus.

6. Бактерии рода Salmonella.

7. Дрожжи.

8. Плесневые грибы.

В кисломолочных продуктах, кроме того, проводится контроль за количеством технологически значимой флоры — молочнокислыми бактериями и бифидобактериями.

8 Правила сбора и хранения отходов лечебно-профилактических учреждений

Санитарные правила СанПиН 2.1.7.728–99 предназначены для всех лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ), организаций, занимающихся сбором, хранением, транспортировкой отходов органов здравоохранения, а также проектированием и эксплуатацией установок переработки, обезвреживания и полигонов захоронения твердых отходов.

Под отходами ЛПУ понимают все виды отходов, образующихся в больницах, поликлиниках, диспансерах, станциях скорой медицинской помощи, станциях переливания крови, научно-исследовательских институтах и учебных заведениях медицинского профиля, ветеринарных лечебницах, аптеках, фармацевтических производствах, оздоровительных учреждениях, санитарно-профилактических учреждениях, медицинских лабораториях.

Экологическая классификация медицинских отходов

Все отходы здравоохранения разделяются по степени их эпидемиологической, токсикологической и радиационной опасности:

1) класс А — неопасные отходы ЛПУ;

2) класс Б — опасные (рискованные) отходы ЛПУ;

3) класс В — чрезвычайно опасные отходы ЛПУ;

4) класс Г — отходы ЛПУ, близкие по своему составу к промышленным;

5) класс Д — радиоактивные отходы ЛПУ.

Морфологический состав соответствующего класса отходов может быть охарактеризован следующим образом.

В отходы класса А включаются неопасные отходы, не имеющие контакта с биологическими жидкостями пациентов, инфекционными больными; нетоксичные отходы; пищевые отходы всех подразделений ЛПУ, кроме инфекционных; мебель, инвентарь, неисправное диагностическое оборудование, не содержащее токсичных элементов; неинфицированная бумага, строительный мусор.

В отходы класса Б включаются потенциально инфицированные отходы; материал и инструменты, загрязненные выделениями, в т. ч. кровью; выделения пациентов; патолого-анатомические отходы (органы, ткани); все отходы из операционных отделений; отходы из микробиологических лабораторий, работающих с микроорганизмами 3–4 группы патогенности (согласно СанПиН 1.2.036–95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортировки микроорганизмов 1–4 группы патогенности»); биологические отходы вивариев.

В отходы класса В включаются материалы, контактирующие с больными особо опасными инфекциями; отходы из лабораторий, работающих с микроорганизмами 1–4 группы патогенности; отходы фтизиатрических, микологических больниц; отходы от пациентов с анаэробной инфекцией.

В отходы класса Г включаются просроченные лекарственные средства, отходы от лекарственных и диагностических препаратов, лекарства, не подлежащие использованию; цитостатики и другие химиопрепараты; ртутьсодержащие предметы, приборы и оборудование.

В отходы класса Д включаются все виды отходов, содержащие радиоактивные компоненты.

Порядок проведения дезинфекции, хранения и удаления отходов

1. Отходы класса Б и В обязательно дезинфицируют погружением в дезраствор, а затем помещают в одноразовую упаковку непосредственно на местах первичного сбора.

2. Дезинфекция отходов класса А производится ежедневно силами ЛПУ.

3. Дезинфекцию контейнеров для сбора отходов класса Б и В производят один раз в неделю.

4. Хранение и транспортировка отходов классов А, Б и В по территории ЛПУ допускается только в герметичных многоразовых контейнерах. Отходы классов А, Б и В допускается хранить не более 1 суток в естественных условиях. Пищевые отходы всех классов необходимо хранить в холодильниках при температуре не выше + 50 °С. Вывоз отходов этих классов должен производиться ежедневно.

5. Транспортировка отходов классов А, Б, В вне территории ЛПУ допускается только в закрытых кузовах специально применяемых автомашин.

6. Хранение отходов класса Г производится в специально отведенных для этой цели вспомогательных помещениях.

7. Отходы класса А могут быть захоронены на обычных полигонах по захоронению твердых бытовых отходов. Отходы классов Б и В необходимо уничтожать на специальных установках но обезвреживанию отходов ЛПУ термическими методами.

9 СОВременные методики эколого-микробиологических исследований окружающей среды

Исследования окружающей среды и продуктов питания должны осуществляться в строгой последовательности, что подробно представлено на таблицах 7–11 приложения.

Санитарно-экологические нормативы исследования воды централизованного водоснабжения (по СанПиН 2.1.4.1074–01).

Определение ОМЧ аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов

Метод основан на определении общего микробного числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре при температуре 37 °С в течение 24 часов.

Методика проведения анализа

Из каждой исследуемой пробы делают высев не менее двух объемов по 1,0 мл в стерильные чашки Петри. После внесения пробы в каждую чашку вливают по 8,0–10,0 мл расплавленного и остуженного до 45–49 °С питательного агара и перемешивают содержимое чашек, равномерно распределяя по всему дну, избегая при этом образования пузырьков. После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют при 37±1 °С в течение 24 часов.

При учете посевов предыдущего дня подсчитывают все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые в объектив с увеличением в два раза; количество колоний на обеих чашках суммируют и делят на два. Результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1,0 мл исследуемой пробы.

Эколого-бактериологический анализ питьевой воды (по МУК 4.2.1018–01).

Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранных фильтров.

Метод основан на фильтровании установленного объема воды через мембранные фильтры, выращивании посевов на дифференциально-диагностической питательной среде с лактозой и последующей идентификацией культур из выросших колоний по культуральным и биохимическим свойствам.

Пробу исследуемой воды разбивают на три объема по 100,0 мл и фильтруют.

Затем фильтры помещают на среду Эндо в чашки Петри, которые ставят в термостат дном вверх и инкубируют при 37°С и при 44,5 °С в течение 24 часов.

Анализ заканчивается через 24 часа.

Если на фильтрах нет роста или выросли колонии пленчатые, губчатые, плесневые, то дают отрицательный ответ: отсутствие общих колиформных бактерий (ОКБ) и тсрмотолерантных колиформных бактерий (ТКБ) в 100,0 мл исследуемой воды.

Если на фильтрах обнаружен рост изолированных типичных лактозопозитивных колоний темно-красных или красных с металлическим блеском или без него, или других подобного рода колоний, то подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и приступают к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ.

С этой целью каждую колонию исследуют на:

— морфологию клеток и их отношение к окраске по Граму;

— наличие оксидазной активности;

— способность к ферментации глюкозы, лактозы до кислоты и газа при 37 °С.

Как ОКБ учитываются грамотрицательные бактерии при отрицательном оксидазном тесте, ферментации глюкозы, лактозы с образованием кислоты и газа.

Как ТКБ учитываются грамотрицательные палочки при отрицательном оксидазном тесте и ферментации глюкозы и лактозы при 44,5 °С с образованием кислоты и газа.

При отсутствии общих колиформных бактерий и термотолерантных колиформных бактерий на всех фильтрах результат записывают как «не обнаружено КОЕ ОКБ в 100,0 мл» и «не обнаружено КОЕ ТКБ в 100,0 мл».

В случаях идентификации всех выросших подозрительных колоний число колониеобразующих единиц ОКБ и ТКБ подсчитывают на всех фильтрах и выражают результат анализа в 100,0мл воды, вычисляя его по формуле:

Х = (а × 100) / V, где Х — число колоний в 100,0 мл; а — число подсчитанных колоний; V — объем воды профильтрованный через фильтр.

Например, при посеве 3 фильтров по 100,0 мл выросло две колонии в 100,0 мл, на остальных двух фильтрах нет роста. Число общих или термотолерантных колиформных бактерий будет определяться таким образом: (2 × 100) / 300 = 0,7 КОЕ ОКБ (ТКБ) в 100,0 мл воды.

Определение общих термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом

Титрационный метод может быть использован в следующих случаях:

— при отсутствии материалов и оборудования, необходимых для выполнения анализа методом мембранных фильтров;

— при анализе воды с большим содержанием взвешенных веществ;

— при наличии в воде посторонней микрофлоры, препятствующей получению на фильтрах изолированных колоний общих колиформных бактерий.

Титрационный метод основан на накоплении бактерий при посеве установленного (определенного) объема воды в жидкую питательную среду с последующим пересевом на среду Эндо.

Учет результатов анализа (рост колоний) проводится после инкубации посевов на среде Эндо при 38 ± 1 °С в течение 18–20 часов.

Если нет роста, то посевы оставляют в термостате и повторно просматривают через 48 часов.

При образовании помутнения и газа в среде накопления и росте на среде Эндо колоний, типичных для лактозоположительных бактерий (темно-красных, красных с металлическим блеском, вьпуклых с красным центром), дают положительный ответ на присутствие общих колиформных бактерий в данном объеме среды.

Для определения наличия термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ) делают посев 2–3 изолированных типичных лактозоположительных колоний (темно-красных, красных с металлическим блеском) в пробирки, содержащих среду с лактозой, предварительно прогретую до 44 °С.

После засева пробирки инкубируют при 44 ± 0,5 °С в течение 24 часов,

хотя уже через 4–6 часов допускается первичный учет результатов роста бактерий образования кислоты и газа.

При выявлении кислотообразования и газообразования у выделенных культур бактерий выдают положительный ответ о наличии в исследуемом объеме воды термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ).

При отсутствии кислоты и газа при учете (просмотре) посевов инкубацию проводят в течение еще 24 часов при 44 °С и выдают окончательный ответ.

Определение спор сульфитредуцирующих клостридий (Clostridium)

Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие облигатно анаэробные палочковидные микроорганизмы из рода Clostridium, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре при 44 ± 1 °С в течение 16–18 часов.

Метод определения содержания сульфитредуцирующих клостридий основан на выращивании посевов из анализируемых проб воды на железосульфитном агаре в условиях, приближенных к анаэробным, и подсчете числа выросших колоний.

Методика определения сульфитредуцирующих клостридий методом фильтрования в чашках Петри

Исследуемую пробу воды (20,0 мл) для исключения возможности развития вегетативных форм бактерий прогревают при 75 °С в течение 15 минут в пробирке на водяной бане.

Прогретую пробу фильтруют через мембранный фильтр, который затем помещают на железосульфитный агар (чашки Петри залиты питательной средой тонким слоем) фильтрующей поверхностью вниз, так, чтобы под фильтром не было пузырьков воздуха. Затем всю поверхность среды с фильтром заливают расплавленным железосульфитным агаром до верхнего края чашки, чтобы крышка плотно прилегала к среде для создания анаэробных условий.

Посевы культивируют при 44 ± 1 °С в течение 16–18 часов, хотя окончательный результат получают через 24 часа и выражают его числом колониеобразующих единиц (КОЕ) спор сульфитредуцирующих бактерий в 20,0 мл воды.

Если не отмечен рост черных колоний на всех фильтрах, то в протоколе анализа дают ответ «не обнаружено в 20,0 мл воды».

При наличии черных колоний на всех фильтрах их подсчитывают, и результат анализа вычисляют по формуле:

Х = (а × 20) / V, где Х — число клостридий в 20,0 мл; а — число подсчитанных колоний; V — профильтрованный объем воды.

Определение колифагов

Колифаги — бактериофаги (вирусы), способные лизировать Е. соli и формировать на питательном агаре при 37 °С через 18–24 часа зоны лизиса бактериального газона (бляшки).

Титрационный метод определения колифагов

Метод основан на определении колифагов в пробах питьевой воды путем предварительного накопления их в среде обогащения на культуре Е. соli. последующем выявлении зон лизиса газона на питательном агаре.

Титрационный метод определения колифагов предназначен для проведения текущего анализа питьевой воды.

Методика проведения количественного анализа

В исследуемую пробу воды объемом 100,0 мл вносят 10,0 мл 10-кратного разведения питательного бульона и 1,0 мл смыва тест-культуры с плотной питательной среды или 2–4-х часовой бульонной культуры.

Для контроля культуры 0,1 мл смыва Е. соli помещают в чашку Петри и заливают питательным агаром.

Исследуемую пробу воды (100,0 мл) и чашку Петри с контролем помещают в термостат и инкубируют при 37 ± 1 °С в течение 18 ± 2 часа, после чего из исследуемой пробы воды отливают в пробирку 10,0 мл и добавляют 1,0 мл хлороформа. Пробирку закрывают стерильной резиновой пробкой, встряхивают для равномерного распространения хлороформа по объему пробы оставляют при комнатной температуре до полного осаждения хлороформа (не менее 15 минут).

В предварительно расплавленный и остуженный до 45–49 °С питательный агар добавляют смыв бактерий Е. соli (из расчета 1,о мл на 100,0 мл агара) и перемешивают.

В стерильную чашку Петри пипеткой из пробирки переносят 1,0 мл обработанной хлороформом пробы воды и заливают смесью расплавленного до 45–49 °С питательного агара объемом 12,0–15,0 мл и осторожно перемешивают.

Аналогичным образом готовят также одну дополнительную чашку Петри для контроля культуры Е. соli.

Обе чашки помещают в термостат при 37 °С на 18–24 часа, после чего в проходящем свете осуществляют просмотр посевов.

Проба считается положительной, если «колифаги обнаружены в 100,0 мл воды» при наличии лизиса на чашке с пробой воды и при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке.

При наличии зон лизиса в контроле культуры результат анализа считается недействительным и выдается отрицательный ответ («колифаги не обнаружены в 100,0 мл воды»).

Прямой метод определения колифагов

Данный метод основан на определении колифагов в нормируемом объеме питьевой воды (100,0 мл) путем прямого посева пробы воды и последующего учета зон лизиса (бляшек, негативных колоний) на культуре Е. coli, посеянной методом газона, на чашки Петри с питательным агаром.

Прямой метод проводят при исследовании по эпидемическим показаниям.

Методика проведения количественного анализа

В предварительно расплавленный и остуженный до 45–49 °С питательный агар двойной концентрации добавляют смыв бактерий Е. соli (из расчета 2,0 мл на каждые 100,0 мл агара) и перемешивают.

Исследуемую пробу воды 100,0 мл разливают по 20,0 мл в пробирки, нагревают до 35–44 °С и немедленно разливают в 5 чашек Петри. Затем в каждую чашку вносят по 20,0 мл смеси агара с культурой E. соli.

Для контроля культуры Е. соli в одну чашку Петри вносят 20,0 мл стерильной водопроводной воды, нагретой до 35–44 °С, заливают 20,0 мл приготовленного агара с Е. соli, перемешивают и оставляют при комнатной температуре до застывания. Чашки с застывшим агаром помещают дном вверх в термостат и инкубируют при 37 ± 1 °С в течение 18–24 часов, после чего н проходящем свете осуществляют просмотр посевов.

Учет результатов проводят путем подсчета и суммирования бляшек (зоны лизиса), появившихся на 5-ти чашках.

В контрольной чашке бляшки (зоны лизиса) должны отсутствовать.

При высоких концентрациях фагов наблюдается разная картина лизиса. Слияние негативных колоний (зон лизиса) дает «ажурный газон» Е. coli: рост единичных колоний Е. coli на фоне сплошного лизиса либо полное отсутствие роста на чашке.

Предварительный учет результатов можно проводить через 5–6 часов инкубации. На этом этапе при наличии четких зон лизиса может быть выдан предварительный ответ о присутствии колифагов в воде.

Окончательный количественный учет прямого посева проводят через 18–24 часа. Результаты выражают количеством бляшкообразующих единиц (БОЕ) на 10,0 мл пробы воды.

Если отмечен сливной рост бляшек и счет затруднителен, то по данным

прямого посева может быть выдан окончательный ответ «колифаги обнаружены в 100,0 мл воды».

При получении отрицательного результата при работе прямым методом окончательный ответ выдается по результатам титрационного метода.

При наличии зон лизиса в контрольной чашке результат исследования считается недействительным.

Эколого-микробиологическое исследование почвы

Микробиологическое исследование почвенных образцов осуществляют согласно общепринятой методике по ГОСТ 17.4402–84.

Определение перфрингенс-титра почвы

Определение перфрингенс-титра как показателя содержания в почве облигатных анаэробов рода Clostridium (C. perfringens) является важным критерием для экологической оценки почвы и оценки процессов ее самоочищения.

Методика проведения анализа

Основную почвенную суспензию титруют путем 10-кратньих разведений.

Затем из каждого разведения берут по 1,о мл и заливают в пробирки с молоком, разлитым по 5,0 мл.

Посевы прогревают на водяной бане при 80 °С в течение 15 минут.

Наличие бактерий C. perfringens регистрируется по наступившему характерному свертыванию молока с полным отделением сыворотки и образованию губчатого сгустка на поверхности благодаря газообразованию.

Титром C. perfringens (верфрингенс-титр) считают предельное разведение почненной суспензии, которое дает на молочной среде развитие колоний C. perfringens.

Определение титра нитрифицирующих бактерий

Появление и увеличение содержания нитрифицирующих бактерий в почве указывает на развитие процессов ее самоочищения.

Методика проведения анализа

Готовят 10-кратные разведения почвенной суспензии (от 1:100 до 1:104) и затем производят посев во флаконы с жидкой синтетической средой Виноградского. В качестве контроля используют два флакона с незасеянной средой Виноградского. Посевы и контрольные флаконы инкубируют при температуре 28 °С в течение 14–15-ти суток.

Уже на 5–7-е сутки культивирования с помощью качественной пробы с дифениламином проверяют образование азотистой или азотной кислоты.

Для этого к капле среды, помещенной на стеклянную пластинку, добавляют несколько капель раствора дифениламина в концентрированной серной кислоте — появление синего окрашивания указывает на присутствие нитратов. В контрольной среде изменения окраски не происходит.

Для более полной оценки процесса самоочищения почвы можно также определять группы микроорганизмов, быстро разлагающих органический субстрат: бациллы, актиномицеты, грибы.

На свежее фекальное загрязнение почвы указывают:

1) обнаружение энтерококков;

2) большое количество БГКП при отсутствии нитрифицирующих бактерий и термофилов;

3) относительно высокое содержание вегетативных форм клостридий.

Загрязнение почвы навозом, компостом или сточными водами и стадию разложения их органического субстрата помогает оценить определение термофильных бактерий.

Эколого-микробиологическое исследование пищевых продуктов (по ГОСТ 50474–93)

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, в том числе на продукты детского лечебного питания, мясо, включая мясо птицы, субпродукты и мясные продукты, рыбу, молоко и молочные продукты, маргарин, майонез, свежие и свежезамороженные овощи, картофель и т. д.

Определение бактерий группы кишечных палочек (БГкп)

К бактериям группы кишечных палочек (БГКП) относятся грамотрицательные, не образующие спор палочки, сбраживающие глюкозу с образованием кислоты и газа при температуре 37–44 °С в течение 24–48 часов, в основном являющиеся представителями следующих родов: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia.

Методика проведения анализа

Посев пробы продукта проводят в среду Кесслера с лактозой и поплавками с соблюдением соотношения продукта и среды 1:10 и инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 часов.

При отсутствии признаков роста (газообразование или помутнение среды Кесслера) дают заключение об отсутствии БГКП в данной пробе продукта.

При наличии признаков роста из подозрительных колб или пробирок производят высев на чашки со средой Эндо или Левина. При этом посев выполняют петлей из каждой колбы или пробирки так, чтобы получить рост изолированных колоний — на отдельный сектор, а лучше — на отдельную чашку.

Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 18–24 часов.

Учет результатов анализа

При отсутствии на среде Эндо и Левина колоний, типичных для бактерий группы кишечных палочек, дающих на среде Эндо крупные с металлическим блеском или без него, розовые или бледно-розовые колонии, на среде Левина – черные с металлическим блеском, темные с черным центром, сиреневые с черным центром, засеянная навеска продукта считается незагрязненной ими, т. е. исследуемый продукт соответствует нормативу на БГКП (колиформные бактерии).

При наличии на среде Эндо и Левина типичных или подозрительных для кишечной палочки (колиформных бактерий) колоний продолжают их изучение.

Для этого из изолированных колоний, характерных или подозрительных на БГКП, делают мазки, окрашивают их по Граму и на наличие спор и микроскопируют.

Обнаружение в мазке грамотрицательных палочек, не содержащих спор, указывает на наличие БГКП в анализируемой массе продукта и его несоответствие микробиологическому нормативу.

Исследуемый продукт считается соответствующим нормативу на БГКП при подтверждении принадлежности подозрительных колоний к роду Erwinia и отсутствии других микроорганизмов, типичных для БГКГI.

Для определения принадлежности к роду Erwinia типичные для БГКП колония, выросшие на среде Эндо или Левина пересевают на питательный агар с 5 %-ной сахарозой, на котором бактерии рода Erwinia дают выраженный мукоидный рост, не свойственный колиформным бактериям.

Определение энтерококков

Определение энтерококков проводят в случае обнаружения в партии продуктов значительного превышения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

Методика проведения анализа

По 0,1 см3 жидкого продукта засевают на поверхность молочной среды с полимиксином в 2 чашки Петри и инкубируют при 37 °С в течение 48 часов.

При учете результатов на обеих чашках подсчитывают количество только типичных колоний энтерококков — красного цвета с зоной протеолиза на светло-голубом фоне среды. При этом среднеарифметическое число колоний умножают на 10 или 100, получая количество энтерококков в 1,0 г или 1,0 м3 продукта.

Одновременно 3–5 типичных колоний отсевают на скошенный мясопептонный агар для накопления чистой культуры с целью дальнейшей идентификации. После инкубации при 37 °С в течение 24 часов из исследуемой культуры готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.

Кроме этого, определяют каталазную активность исследуемой культуры, поскольку энтерококки перекись водорода не разлагают. Для этого культуру помещают на чистое обезжиренное предметное стекло, добавляют 1 %-ный раствор перекиси водорода, смешивают. Если при смешивании пузырьки газа не выделяются, реакция отрицательна.

Известно, что энтерококки способны к росту на средах с высоким содержанием желчи, поэтому исследуемую культуру также засевают в бульон, содержащий 40 % желчь, и инкубируют при 37 °С в течение 18–24 часов.

Возможный рост изучаемых культур в посевах на жидкой среде обязательно подтверждают микроскопией мазка и постановкой теста на каталазу.

Обнаружение значительного роста энтерококка при посеве исследуемого материала свидетельствует о необходимости контроля за данным продуктом.

Определение количества дрожжей и плесневых грибов

Метод основан на количественном подсчете колоний дрожжей плесневых грибов, вырастающих на специальных плотных питательных средах с антибиотиками при температуре 24 °С в течение 5 суток после посева исследуемого материала.

Методика проведения анализа

Из каждой пробы делают высев по 1,0 см3 продукта или по 1,0 см3 разведений продукта 1:10 и 1:100 на две чашки Петри со средой Сабуро.

Через 15–20 минут в каждую чашку добавляют по 14,0 см3 одной из агаризованных сред, охлажденных до 45–49 °С и антибиотики. После тщательного перемешивания среды, избегая при этом образования пузырьков и застывания агара, чашки с посевами помешают в термостат вверх дном и инкубируют при 24 °С в течение 5 суток (120 часов) с предварительным учетом роста через 3 дня.

При учете посевов проводят подсчет соответствующих колоний на каждой чашке отдельно.

При этом колонии дрожжей и плесневых грибов разделяют визуально, при необходимости проводят микроскопическое исследование.

Типичные колонии плесневых грибов имеют поверхность, покрытую пушистым мицелием, похожим на вату.

Рост дрожжей сопровождается образованием крупных выпуклых блестящих серовато-белых или беловато-желтых колоний с гладкой поверхностью, ровным краем, сметанообразной консистенцией. Кроме того, по мере роста и увеличения размеров колонии дрожжей могут приобретать перламутровый оттенок и куполообразное возвышение.