Рабочая программа дисциплины (модуля) «Анатомия и гистология сельскохозяйственных животных» (стр. 3 )

Заливка парафиновых блоков

Резервуар для парафина заполняется гранулами воска (например, Leica HISTOWAX). Уровень расплавленного воска должен быть на 2-3 см ниже верхнего края резервуара.

Когда на экране дисплея появляется сообщение "paraffintankonreserve" ("резерв в резервуаре для парафина"), это означает, что в резервуаре имеется еще примерно 1 литр жидкого парафина. Следует, однако, в этом случае долить резервуар как можно скорее.

Температура резервуара для парафина должна устанавливаться между точкой плавления и максимальной величиной, указанной изготовителем применяемого парафина.

Как только все функциональные блоки достигнут заданной заранее температуры, и парафин в резервуаре для парафина полностью расплавится, можно начинать заливку тканей.

Примечание: Следует избегать перегрева расплавленного парафина, поскольку это может привести к повреждению важных компонентов аппарата, и, как результат, к повреждению образца ткани.

1. Кассеты для заливки, содержащие обезвоженный и отфильтрованный образец ткани, переносятся в ванну для кассет (вмещает примерно 100 кассет), которая заполняется расплавленным парафином для предотвращения затвердевания парафина. В ванне для кассет, заполненной расплавленным парафином, поддерживается оптимальная постоянная температура.

Если ванна не заполнена парафином, не следует вставлять в нее кассеты до верхнего края, поскольку на верхних кассетах может образоваться пленка, снижающая качество заливки ткани.

2. Прессованные лотки для заливки тканей помещаются в нагреватель для прессованных лотков.

Примечание: Необходимо избегать перегрева прессованных лотков, поскольку это может вызвать трудности при вынимании парафинового блока из лотка.

Лотки должны быть чистыми и сухими. Сначала лотки следует обработать диметилбензолом, затем мыльным раствором, и, наконец, промыть дистиллированной водой и высушить.

3. Выньте три-четыре кассеты из ванны для кассет и, в зависимости от принятого метода работы, выполните следующее. Или поместите их на рабочую область, чтобы обеспечить немедленное удаления капель жидкого парафина, или перенесите эти кассеты в прогреваемую скрытую емкость, заполненную расплавленным парафином, для промежуточного хранения, во избежание быстрого затвердевания отфильтрованного образца. Последнее особенно рекомендуется делать при обработке маленьких кусочков ткани. Если же скрытая прогреваемая емкость не заполнена парафином, она обеспечивает дополнительное место на рабочей области.

4. Выберите соответствующий прессованный лоток для заливки ткани, поместите его под выходное сопло дозатора, и, при необходимости, заполните парафином:

4.1 пользуясь ножной педалью

4.2 вручную, нажимая ручку дозатора парафина

4.3при заполнении более крупных прессованных лотков, ручка дозатора может убираться, обеспечивая дополнительный зазор под выходным соплом дозатора; диапазон регулировки расхода парафина включает 10 ступеней.

5. Откройте кассету и перенесите образец ткани в прессованный лоток, пользуясь нагретыми щипцами.

6. Положите прессованный лоток на короткое время на участок охлаждения. Уложите кусок ткани в нужном положении, пользуясь щипцами. Через несколько секунд воск потеряет прозрачность.

Маленькие образцы ткани можно располагать, медленно отодвигая прессованный лоток в направлении от участка, где происходит заливка парафина, к участку охлаждения. Поскольку в переходной области воск затвердевает очень медленно, ткань можно удалить со щипцов, не опасаясь того, что образец прилипнет к кончикам щипцов. (Если воск станет затвердевать очень быстро, щипцы приклеятся к ткани).

Примечание: Следует избегать образования пленки на поверхности парафина. Это может привести к образованию двух фаз в окончательном парафиновом блоке, что вызовет появление трещин внутри и возможное раскалывание блока во время резки.

7. После укладки образца в нужное положение, полунаполненный прессованный лоток вновь перемещается на участок заливки парафина. После установки подставки для кассеты или кольца для заливки, лоток заполняется парафином.

Если кассеты или кольца для заливки парафина не используются, прессованный лоток следует заполнить до верхнего края.

Примечание: Не допускайте переполнения лотка во избежание загрязнения наружных частей подставки для кассеты или кольца. Это может привести к плохой фиксации в держателе образца в микротоме.

8. Положите прессованный лоток на охлаждающую плиту. Через небольшой отрезок времени воск полностью затвердеет. Поле этого парафиновый блок, содержащий образец, можно легко отделить от лотка.

Все рассматриваемые операции должны выполняться без задержек, чтобы парафин затвердевал равномерно в лотке, во избежание образования слоев, что может повлиять на результаты резки.

Имейте, пожалуйста, в виду, что сменный поддон, куда стекает лишний парафин, следует регулярно опорожнять. Это нужно для того, чтобы обеспечить беспрепятственный сток жидкого парафина и не допустить прилипания поддона к направляющим устройствам.

Лишний парафин, собираемый в сменный поддон, не следует использовать вновь, поскольку он может быть загрязнен.

9. По окончании заливки, LEICA EG 1160 следует отключить, нажав кнопку ON/OFF. Пользуясь смоченной бумагой, надо вытереть конденсационную воду на охлаждающей плите и убрать жидкий парафин с рабочей области.

Описание последовательности выполнения операций при иссечении инфильтрированных парафином образцов

·  Закрепите предварительно охлажденный парафиновый блок в универсальный держатель кассет.

!  Соблюдайте осторожность при работе с ножами и одноразовыми лезвиями. Режущая поверхность острая и может нанести серьезные травмы!

·  Отожмите кожух ножа на середину держателя ножа.

·  Вставьте лезвие в держатель и закрепите.

·  Отрегулируйте задний угол ножа (подберите значение угла между 0° и 3°).

·  Переместите образец к нижнему пределу при помощи механизма грубой подачи.

·  Не пытайтесь закрепить, приблизить или ориентировать образец на этапе движения образца назад.

Перед выполнением операции последовательного иссечения образец перемещается назад на расстояние, равное сумме величины продвижения назад и выбранной толщины сечения. Это создает опасность удара образца о нож!

·  Максимально приближайте держатель ножа на основании держателя ножа к образцу.

·  Ориентируйте поверхность образца по направлению к ножу.

·  Извлеките поддон для отсекаемых тканей.

·  Отодвиньте защитный кожух ножа от лезвия.

·  Разблокируйте маховик.

·  Удерживайте рычаг в положении, соответствующем необходимому значению тримминга (выравнивания).

!  Вращайте маховик со скоростью, соответствующей твердости образца! Всегда вращайте его медленно, если иссекаете твердые образцы!

·  Начните операцию тримминга, поворачивая маховик.

·  Закончите тримминг при достижении требуемой плоскости.

·  Освободите рычаг тримминга.

·  Выберите подходящую толщину сечения.

!  Убедитесь, что колесо грубой подачи вращается свободно! Если это не так, значит, невозможно изменить толщину сечения, а значит, - выполнять иссечение.

·  Вращайте маховик равномерно.

·  Производите иссечение.

Замена образца или прерывание иссечения

!  Перед настройкой ножа и образца или перед их заменой, а также в течение перерыва обязательно блокируйте маховик и закрывайте защитный кожух ножа!

·  Заблокируйте маховик.

·  Установите защитный кожух над режущей кромкой.

·  Удалите образец из зажима и смонтируйте новый.

Прекращение иссечения образца

·  Заблокируйте маховик.

·  Снимите лезвие с держателя ножа и уберите его в футляр на дно раздаточного устройства.

·  Извлеките образец из зажима.

·  Перенесите все отходы иссечения в поддон для отсекаемых тканей.

·  Опорожните поддон для отсекаемых тканей.

·  Очистите прибор

Приложение 1

Лаборатория патоморфологии оснащена следующим оборудованием

Ротационный микротом с системой переноса срезов Leica «RM 2245»

Назначение

Полуавтоматический ротационный многоцелевой микротом с моторизованной подачей образцов, ручным приводом и ретракцией. Диапазон толщины срезов: 0,мкм.

Технические характеристики

Наличие регистрационного удостоверения
Наличие сертификата соответствия
Полуавтоматический ротационный многоцелевой микротом с моторизованной подачей образцов, ручным приводом и ретракцией
Диапазон резки: 0,5-100мкм
Установки толщин срезов: от 0.5-5мкм с шагом 0.5мкм
    от 5-20мкм с шагом 1мкм
  от 20-60мкм с шагом 5мкм
    от 60-100мкм с шагом 10мкм
Диапазон толщины тримминга: от 1-600 мкм
Установки толщин тримминга: от 1-10мкм с шагом1мкм
      от 10-20мкм с шагом 2мкм
        от 20-50мкм с шагом 5мкм
   от 50-100мкм с шагом 10мкм
    от 100-600мкм с шагом 50мкм
Подача образца: 28мм ±1мм, с помощью шагового двигателя
Вертикальное перемещение образца: 70мм
Ретракция образца: 5-100мкм с шагом 5мкм
Грубая подача: 300мкм/сек и 900мкм/сек
Максимальный размер образца: 50x60x40 мм
Электромеханический тормоз маховика и ограждение ножа для защиты от травм
Цифровая индикация толщины и количества срезов
Светодиодная индикация режимов работы
Возможность изменения угла наклона ножа
Ориентация образца: горизонтальная: 8град.
 вертикальная: 8град.
Универсальная база для держателей ножа с возможностью бокового перемещения
Микротом  оснащен сменными лезвиями низкого профиля и соответствующим держателем лезвий.
Емкость для переноса срезов
Стандартный ориентируемый держатель образца с адаптором до 55х50мм
Встроенный поддон для остатков резки

Криостат Leica «CM 1510 S»

Назначение

Представляет собой компактный криостат с открытым верхом, предназначенный для быстрого замораживания и проведения ручного иссечения тканей.
Коррозионно-стойкая камера криостата хорошо освещена и имеет легкий доступ через выдвижное окно с подогревом. Температура камеры криостата выбирается в диапазоне от 0°С до -30°С.
Активно охлаждаемая полка быстрого замораживания, рассчитанная на 10 дисков с образцами, обеспечивает быстрое замораживание образцов до температуры -44°С (с погрешностью +3°) в зависимости от типа камеры криостата (от -20°С до -30°С).

Технические характеристики

Максимальная температура замораживания: -45°C
Температурный режим крио-камеры: от -20°C до -30°C
8-минутный испаритель цикла размораживания, который может быть активизирован вручную в любое время и/или запрограммирован на автоматическое включение один раз в день
11 дисков для образцов,  25 мм
Встроенный коррозийно-устойчивый ротационный микротом для криостата снабжен крестообразно расположенными ходовыми направляющими, запором, покрышкой и точной ориентацией образца восях X/Y/Z на 8° 
Микротом так же имеет ручное колесо управления, уравновешенное, с запором в верхнем положении
Толщина среза выбирается от 1 до 60 мкр и регулируется следующим образом:
1 мкр: приращение от 1 до 10 мкр
2 мкр: приращение от 10 до 20 мкр
5 мкр: приращение от 20 до 60 мкр
Горизонтальная подача образца: 25 мм
Вертикальная подача:  60 мм
Моторизованная грубая подача материала: 0.8 мм/сек (один оборот)
Основа для держателей многоразовых ножей
Держатель ножей многоразовых
Нож для микротома 16 см, сталь, профиль,,c,, и чехол для ножа (2 шт.)

Станция для заливки парафином Leica «EG 1160»

Назначение

Станция для заливки в парафин соответствует современному научно-техническому уровню и международному стандарту ИСО 9000.
Станция обеспечивает быстрое изготовление высококачественных парафиновых блоков, что в свою очередь облегчает изготовление качественного информативного среза, свободного от артефактов.
Станция включает два модуля: комбинированный модуль подогрева и дозирования парафина и модуль охлаждения
Также она обеспечивает цепочку безошибочного перенесения проведенных образцов в парафиновый блок, исключая путаницу в нумерации. Станция оснащена функцией «программируемые рабочие часы», которая позволяет заранее подготовить прибор к началу рабочего дня. Имеет возможность установки Standby режима в выходные дни.

Технические характеристики

Программируемый прибор
Совмещающий в одном корпусе подогреваемый шкаф для ванночек, баню для кассет, охлаждающую плату и диспенсер парафина
Объем диспенсера парафина: 3л
Рабочая температура диспенсера: 45-70град.
Рабочая температура охлаждающей платы: -5град.
Рабочий размер охлаждающей платы для стандартных ванночек: 280х450мм
Подогреваемая ёмкость для ванночек и кассет на 100 кассет
Регулируемый объем подачи парафина: от 10% до 100%
Установка автоматического вкл/выкл аппарата на любой день с пропуском нерабочих дней
Подсветка
Подогреваемый лоток для инструмента
Съемный лоток для допарафинизации образца размером 170х260мм
Съемный лоток для излишков парафина
Размер нагревательной платы 230х280мм
Регулировка температуры с точностью: 1°С
Жидкокристаллический дисплей
Влагозащищенная клавиатура
Возможность установки увеличительной лупы

Аппарат гистологической обработки (проводки) тканей Leica «TP 1020»

Назначение

Автомат для гистологической проводки тканей обеспечивает высокое качество проводки, то есть последовательной пропитки ткани реагентами, что в свою очередь облегчает изготовление качественного информативного среза, свободного от артефактов.
Автомат карусельного типа (привычный лаборантам) обеспечивает перенос корзинки с пробами при помощи манипулятора из одного контейнера с реагентами в другой.

Технические характеристики

Аппарат карусельного типа
Полностью автоматизирован
Должен использоваться для фиксации, дегидратации и инфильтрации гистологических образцов тканей с фиксаторами, этиловым спиртом, растворителями и парафином 
Должен обеспечивать высокое качество проводки
Прост и надежен в эксплуатации.
Иметь автоматический и ручной режим работы
В приборе должны быть предусмотрены не менее 9-ти программ управления
Возможность программировать установки проводки вручную, не менее 5-ти
Предустановленные программы короткая проводка, ускоренная проводка и то же самое для двойной загрузки
С функцией дополнительного перемешивания для улучшения качества проводки
Пропускная способность прибора до 160 кассет
С функцией отложенного старта не менее 7 дней
С функцией временной остановки «Цикл работы прибора может быть приостановлен для замены и выемки образцов»
Работа прибора должна осуществляется при закрытой основной крышке
С функцией вакуумной пропитки образцов
Прибор должен быть оборудован жидко - кристаллическим дисплеем и влагозащищенной клавиатурой
По окончанию работы или при сбое в подачи электроэнергии прибор должен подавать звуковой сигнал
После сбоя подачи электроэнергии автомат должен сам  продолжать выполнение программ
В случае аварийного отключения эл. питания  возможность поднятия крышки аппарата вручную
Аппарат комплектуется:
   Емкостями для реагентов из алюминия объемом не менее 1.8л
    Корзинами для образцов
   Набором инструментов
  Инструкцией на русском языке

Автоматическая система для окраски гистологических препаратов Leica «ST 5010» (Autostainer XL)

Назначение

Система обеспечивает быструю окраску гистологических препаратов либо по простой методике, либо по сложной программе окраски, с одновременной окраской эозином и гематоксилином.
Полностью самостоятельный прибор с 18 реагентными контейнерами; интегрированной сушилкой препаратов; 5 стаканами для промывки с клапаном контроля дозировки; 10 держателями для предметных стекол; контейнером на 30 предметных стекол.

Технические характеристики

18 контейнеров для реагентов
5 промывочных станций с автоматической подачей воды
Станция для сушки с задаваемой температурой от 30 до 65 °С
Наличие перемешивания с числом погружений до 20 и временем до 4 сек на цикл
время поднятия корзины варьируется от 4 до 9 сек
время опускания корзины варьируется от 2 до 4 сек.
время погружения корзины варьируется от 0 до 60 мин. (0 – пропуск шага)
Программное обеспечение с протоколами рутинного окрашивания и возможностью модификаций
Сохранение в памяти 15 протоколов окрашивания по 25 шагов каждый
Выдвижные ящички для загрузки и для выгрузки образцов с системой защиты от выделения испарений
Система контроля испарений: использование угольного фильтра с заменой раз в 3 месяца
Совместим с автоматом для заключения срезов оборудованным системой переноса
Оснащён ж/к дисплеем и сенсорной клавиатурой, а так же системой подачи звуковых сигналов
Комплектуется полным набором  принадлежностей, включая 10 корзин для 30 стекол каждая и 22 реагентные кюветы с крышками, 5 промывочных кювет
Сменный угольный фильтр

Водяная баня для расправления срезов Leica «HI 1210»

Назначение

Водяная баня для расправления парафиновых срезов

Технические характеристики

Наличие специального тефлонового и антистатического покрытия
Установка температуры:  не менее 70°С
Индикация опасного нагрева: при достижении 44°С
Наличие светодиодного дисплея отображающего устанавливаемую или текущую температуру, точность установки 0,1°C
Наличие широких подогреваемых полей для просушки стекол
Черная алюминиевая легко очищающаяся поверхность
Удобный эргономичный дизайн прямоугольная форма

Нагревательная плата Leica «HI 1220»

Назначение

Нагревательный столик для сушки парафиновых срезов

Технические характеристики

Наличие специального тефлонового и антистатического покрытия
Установка температуры:  не менее 70°С
Индикация опасного нагрева: при достижении 44°С
Наличие светодиодного дисплея отображающего устанавливаемую или текущую температуру, точность установки 0,1°C
Черная алюминиевая легко очищающаяся поверхность

Инвертированный микроскоп "Leica DMI 4000B"

Исследовательский микроскоп "Leica DM5000C" с цифровой видеокамерой и программой анализа графического изображения

Все комплексы оснащены встроенными видеокамерами, которые могут получать сотни высококачественных изображений с микроскопа, с фиксацией их и возможностью передачи этих изображений на компьютер или прямой печатью на принтере. Эти приборы позволяют в режиме реального времени изучать патогистологические препараты, оценивать подвижность спермы, подсчитывать клетки крови.

Выход в Интернет дает возможность коллегам использовать возможности телемедицины, то есть консультироваться в режиме реального времени по вопросам патоморфологической диагностики, а также проводить дистанционное обучение и консультации.

Приложение 2

		Программа 1. Окрашивание гематоксилином и эолином
Реагент	Станция	Шаг	Время	Точное
	Печь	1	10:00	Да
Ксилол	1	2	2:00	Нет
Ксилол	2	3	2:00	Нет
Чистый спирт	3	4	2:00	Нет
Чистый спирт	4	5	2:00	Нет
70% спирт	5	6	1:00	Нет
Промывка	Промывка 1	7	2:00	Нет
Гематоксилин	6	8	5:00	Да
Промывка	Промывка 2	9	2:00	Нет
Кислый спирт	7	10	0:02	Да
Промывка	Промывка 3	11	3:00	Нет
По Скотту	8	12	3:00	Да
Промывка	Промывка 4	13	3:00	Нет
95% спирт	9		:
OG 6	10		:
95% спирта	11		:
95% спирта	12		:
ЕА 50	13		:
Эозин	14	14	2:00	Да
95% спирт	15	15	0:30	Да
Чистый спирт	16	16	2:00	Нет
Чистый спирт	17	17	2:00	Нет
Чистый спирт	18	18	2:00	Нет
Ксилол	Разгрузочный выдвижной ящик	19	:

кандидат ветеринарных наук, доцент