Биологическая индикация радиационного воздействия на организм человека с использованием цитогенетических методов (стр. 2 )

,

где q=N0/N1, N0 и N1 – число просмотренных клеток в контроле и опыте соответственно, N=N0+N1, n0 и n1 – число обнаруженных хромосомных перестроек, n=n0+n1, – число сочетаний из N элементов по n. В формуле для вычисления Р член с номером k=n0 превосходит остальные приблизительно на порядок. Его можно использовать для первичных оценок значимости различий на калькуляторе:

Если эта вероятность Р выше 0,05, то различия между контролем и опытом нельзя считать достоверными.

В состав некоторых стандартных статистических пакетов входят программы для вычисления точного критерия Фишера, однако, при их применении следует иметь в виду, что большинство таких программ (например, Statistiсa, SPSS и многие другие, кроме S-Plus и Mathematica) не позволяют сравнивать случаи с большим количеством просмотренных клеток.

В таблице 2 и 3 приведены значения вероятности Р, вычисленные согласно точному критерию Фишера для некоторых конкретных количеств просмотренных клеток и выявленных нестабильных и стабильных обменных аберраций соответственно. В качестве контрольной группы была использована группа жителей Московского региона, обследованных авторами, частота дицентриков и колец у которых составила 0,02 ± 0,01% (просмотрено 48124 метафазы), частота транслокаций – 0,15 ± 0,03% (просмотрено 21953 метафазы).

Таблица 2. Значимость отличия P (согласно точному критерию Фишера) частоты дицентриков от контрольного уровня (0,02 ± 0,01% для жителей Московского региона)

Количество выявленных дицентриков	Посчитано клеток
200	300	500	1000	1500
1	0,045	н. д.	н. д.	н. д.	н. д.
2	1*10-3	0,002	0,007	0,024	0,049
3	<<0,001	<<0,001	<<0,001	0,002	0,006
4	<<0,001	<<0,001	<<0,001	1*10-4	6*10-4
5	<<0,001	<<0,001	<<0,001	<<0,001	<<0,001

н. д. – значение Р больше 0,05, т. е. различия с контролем не достоверны

<<0,001 – значение Р как минимум на порядок меньше 0,001

Для корректных заключений о наличии в анамнезе факта радиационного воздействия и о дозовой нагрузке необходимо, прежде всего, проанализировать достаточное количество метафаз. Для детекции облучения по частоте дицентриков и колец, то есть для обнаружения статистически значимых различий с контролем, необходимо выявить не менее, чем 2 нестабильных маркера радиационного воздействия (см. таблицу 2). Единичные наблюдения дицентриков и колец или транслокаций в сколь угодно малых количествах просмотренных клеток не могут служить основой ни для каких-либо заключений о наличии - отсутствии облучения, ни, тем более, для оценок доз.

Таблица 3. Значимость отличия P (согласно точному критерию Фишера) частоты транслокаций, выявленных при помощи ДНК-зондов к 1, 4 и 12 хромосомам, от контрольного уровня (0,15 ± 0,03% для жителей Московского региона)

Количество выявленных транслокаций	Посчитано клеток
100	250	500	1000	1500	2000
1	н. д.	н. д.	н. д.	н. д.	н. д.	н. д.
2	0,01	н. д.	н. д.	н. д.	н. д.	н. д.
3	6*10-4	8*10-3	0,045	н. д.	н. д.	н. д.
4	<<0,001	8*10-4	0,009	н. д.	н. д.	н. д.
5	<< 0,001	<< 0,001	0,001	0,024	н. д.	н. д.
6	<< 0,001	<< 0,001	2*10-4	0,006	0,036	н. д.
7	<< 0,001	<< 0,001	<< 0,001	0,002	0,013	0,046
8	<< 0,001	<< 0,001	<< 0,001	3*10-4	0,004	0,019
9	<< 0,001	<< 0,001	<< 0,001	<< 0,001	0,001	0,007
10	<< 0,001	<< 0,001	<< 0,001	<< 0,001	3*10-4	0,002

н. д. – значение Р больше 0,05, т. е. различия с контролем не достоверны

<<0,001 – значение Р как минимум на порядок меньше 0,001

Оценка дозовых нагрузок по частоте хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови

Оценка доз облучения по частоте хромосомных аберраций проводится с помощью калибровочных кривых «доза-эффект», которые можно получить в лабораторных условиях при облучении цельной крови in vitro. Необходимо использовать калибровочные кривые, полученные в той же лаборатории, где проводится анализ цитогенетических препаратов. Это обусловлено тем, что на количественную оценку частоты хромосомных нарушений могут оказывать влияние некоторые факторы: условия облучения крови, особенности приготовления препаратов метафазных хромосом, особенности интерпретации цитогенетических данных, выбор определенной комбинации ДНК-проб для FISH метода.

В настоящей работе представлены калибровочные кривые дозовой зависимости для частоты дицентриков и транслокаций, полученные авторами.

Для построения калибровочной кривой «доза-эффект» кровь от 5 здоровых доноров облучали (g-излучение 60Co с мощностью дозы 0,1 Гр/мин) в диапазоне доз от 0 до 4 Гр. Дозиметрический контроль режима облучения осуществляли с помощью термолюминесцентных дозиметров. В процессе проведения эксперимента строго соблюдали температурный режим (облучение проб крови проводили при t= 30 ± 5оС).

·  Оценка уровня облучения пациентов по частоте дицентриков в лимфоцитах периферической крови

В таблице 4 представлены данные по частоте дицентриков, полученные при разных дозах облучения крови in vitro.

Таблица 4. Частота дицентриков после g-облучения цельной крови in vitro

Доза. Гр	Количество посчитанных клеток	Количество дицентриков	Частота дицентриков на 100 клеток (М ± m)
0	5020	4	0,08 ± 0,04
0,05	4738	9	0,19 ± 0,06
0,07	4280	13	0,30 ± 0,08
0,10	3970	10	0,25 ± 0,08
0,15	4414	21	0,48 ± 0,10
0,25	3779	44	1,16 ± 0,18
0,30	4500	50	1,11 ± 0,16
0,50	4250	98	2,31 ± 0,23
0,75	2838	141	4,97 ± 0,42
0,85	2310	145	6,28 ± 0,52
1,00	3422	242	7,07 ± 0,45
1,35	1500	231	15,40 ± 1,01
1,50	1877	281	14,97 ± 0,89
2,00	1517	442	29,14 ± 1,39
3,00	1500	941	62,73 ± 2,04
4,00	250	135	54,00 ± 4,65

Рисунок 1. Калибровочная кривая для частоты дицентриков