Иммунометаболический статус и структурно-функциональные свойства эритроцитов при хроническом простатите и доброкачественной гиперплазии предстательной железы; коррекция нарушений (стр. 2 )

2 и 4 группы дополнительно получали лечение физиотерапевтическим аппаратно-программным комплексом (АПК) КАП-ЭЛМ-01 «Андро-Гин» производства (г. Москва) (, 2005).

В 5 и 9 группе больные ХПА и ХП с ДГПЖ дополнительно получали «Ферровир» (1,5% - 5,0 мл в/м через 12 часов №10), «Мексидол» (100 мг в/м через 12 часов №10) и «Фосфоглив» (по 2 капс. внутрь через 6 часов №14) (табл. 2). В 6 и 10 группах мужчинам дополнительно назначались «Галавит» (100 мг в/м через 24 часа №5, затем 100 мг в/м через 72 часа №20), «Олифен» (7% - 2,0 мл в/в в 500 мл 5% раствора глюкозы через 24 часа, №7) и «Эссенциале Н» (5,0 мл в/в через 24 часа №10) (табл. 2). В 7 и 11 группах пациенты получали дополнительно к традиционной терапии «Гепон» (10 мг внутрь через 24 часа №10), «Гипоксен» (2 мл в 200 мл 5% раствора глюкозы в/в капельно через 24 часа №6) и «Гептрал» (400 мг в/в медленно через 24 часа №10) (табл. 2).

Все препараты вводили согласно рекомендациям, изложенным в справочнике «Лекарственные средства» (, 2002) и прилагаемых к препаратам аннотациях.

Иммунологические и биохимические методы исследования. В работе фенотип лимфоцитов определялся методом иммунофлюоресцентного анализа с помощью моноклональных антител (, г. Москва) к структурам CD3 (общие Т-лимфоциты), CD4 (Т-хелперы), CD8 (цитотоксические клетки), CD16 (NK-клетки), CD25 (рецептор к ИЛ-2), CD95 (индукторный фактор апоптоза), HLA-DR (поздний маркер активации), CD19 (В-лимфоциты) (Лесков В. П. и др., 1997). Содержание С3-, С3а-, С4-, С5-, С5а-компонентов комплемента, фактора Н, С1-инг., ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18, ИЛ-2, интерферона гамма (ИФγ), ИЛ-4, ИЛ-10, РАИЛ в плазме крови и первой порции мочи, полученной после пальцевого ректального исследования предстательной железы, определяли с помощью набора реагентов ProCon ( контур», г. Санкт-Петербург) методом твердофазного иммуноферментного анализа.

Активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов периферической крови оценивали по проценту фагоцитоза, фагоцитарному числу и индексу активности фагоцитоза (, , 1991; 1987). Активность кислородзависимых систем нейтрофилов оценивали по реакции восстановления нитросинего тетразолия, спонтанного и стимулированного зимозаном, с расчетом функционального резерва (Виксман М. Е., , 1979; Щербаков В. И., 1989).

Выраженность перекисного окисления липидов в крови и первой порции мочи, полученной после пальцевого ректального исследования предстательной железы, оценивали по содержанию малонового диальдегида и ацилгидроперекисей (, , 1973; Гаврилов В. Б., , 1983). Кроме этого, определяли активность каталазы ( и др., 1988), супероксиддисмутазы (, 1988) и общую антиокислительную активность сыворотки крови ( и др., 1988).

Исследование структурно-функциональных свойств эритроцитов. Эритроциты получали из 5 мл гепаринизированной крови по методу E. Beutler (1985) с незначительной модификацией.

Цельную кровь отстаивали дважды в 10 мМ Na-фосфатном буфере (рН=7,4), содержащем 0,9% хлорида натрия и 3% декстрана Т-500, в течение 30 минут при температуре 37ºС. После этого кровь центрифугировали, удаляли надосадочную жидкость аспирацией. Эритроцитарную массу подвергали дополнительной очистке на хроматографической колонке через НВS-целлюлозу.

Определялась общая сорбционная способность эритроцитов, обусловленная наружной архитектоникой клеточной мембраны ( и др., 1988), сорбционная емкость гликокаликса эритроцитов для альцианового синего (, 1998) и уровень малонового диальдегида в эритроцитах ( и др., 1987).

Мембраны эритроцитов получали методом G. T. Dodge (1963), разрушая эритроциты осмотическим и механическим гемолизом в 10 мМ Na-фосфатном буфере, после чего проводили отмывку теней от гемоглобина в 10 мМ и 5 мМ Na-фосфатном буфере. Электрофорез проводили в присутствии додецилсульфата натрия в вертикальных пластинах полиакриламидного геля по методу
U. K. Laemmli (1970). Белки окрашивали кумаси голубым R-250 по модифици-

__________________________

Примечание. Определение иммунологических показателей проведено в лаборатории иммуноферментного анализа НИИ экологической медицины Курского государственного медицинского университета, за что выражаем сотрудникам соответствующего подразделения глубокую признательность.

рованной методике G. Fairbanks (1971). Количественное содержание белковых фракций рассчитывали через площадь и известную концентрацию яичного альбумина, выступающего как маркерный белок. Полученные значения пересчитывали на 1 мг общего белка в исследуемом образце сухих мембран эритроци-

тов. Липиды выделяли методом тонкослойной хроматографии ( и др., 1984).

Статистическая обработка полученных результатов. Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя непараметрические методы, факторный анализ, кластерный анализ, критерий χ2, а также коэффициент ранговой корреляции Спирмена (, , 1973; Ла-
кин Г. Ф., 1980). Статистически значимыми считали различия с p<0,05.

Для иммунологических показателей рассчитывали коэффициент диагностической ценности, формулу расстройств иммунной системы путем выбора из всех изученных параметров трех ведущих, наиболее отличающихся от уровня нормы, степень иммунных расстройств, рейтинговый алгоритм и степень изменения иммунологических показателей под влиянием фармакологических средств (, Земсков В. М., и др., 2003).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Иммунные и оксидантные нарушения у больных хроническим бактериальным и абактериальным простатитом. У больных ХПА на системном уровне установлено повышение концентрации провоспалительных (ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18) цитокинов, ИЛ-2, ИФγ (рис. 1).

При ХПБ до лечения, также как и при ХПА, в плазме крови наблюдалось повышение концентрации ИЛ-6, ИЛ-2, но в отличие от пациентов с ХПА еще в большей степени отмечалось повышение уровня ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-8, ИЛ-18, ИФγ и снижение содержания ИЛ-4, ИЛ-10, РАИЛ (рис. 1).

В ходе исследования системы комплемента у больных ХПА обнаружено повышение содержания всех изученных компонентов системы комплемента, фактора Н, но снижение уровня С1-ингибитора. При ХПБ отмечалось менее выраженное повышение концентрации С3-, С4-компонентов комплемента, более существенно повышалось содержание С5-, С5а-компонентов комплемента, аналогичный повышенный уровень зарегистрирован для С3а-компонента комплемента и сниженный – для С1-ингибитора (рис. 1).

Функциональная активность нейтрофилов периферической крови больных ХПА не отличалась от показателей здоровых доноров, в то время как при ХПБ наблюдалось снижение показателей фагоцитарной и кислородзависимой активности этих клеток (рис. 1).

До лечения у больных ХПА на системном уровне установлено повышение в 4 раза концентрации промежуточных (МДА) и конечных (АГП) продуктов ПОЛ, снижение активности СОД и ОАА, при этом активность каталазы не отличалась от показателей здоровых доноров. В отличие от пациентов с ХПА при ХПБ на системном уровне наблюдалось менее значительное повышение

уровня продуктов ПОЛ, но более высокая активность каталазы, СОД и ОАА, хотя значения последних двух показателей остались ниже нормы (рис. 1).

Рис. 1. Иммунометаболические нарушения в крови у больных ХПА и ХПБ до лечения.

Примечание: 1 – радиус окружности – показатели контрольной группы (1 группа); 2 – – показатели больных ХПА (2 группа); 3 – – показатели больных ХПБ (3 группа); 4 – – p<0,05 показателей 3 и 2 групп по отношению к 1 группе; 5 – – p<0,05 между показателями 3 и 2 группы.

На местном уровне при ХПА повышалась концентрация ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИФγ, ИЛ-18, при этом снижалось содержание ИЛ-10, РАИЛ, а уровень ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-4 не отличался от нормы. Локально при ХПБ, как и при ХПА, отмечалось повышение концентрации ИЛ-2, ИФγ и снижение содержания РАИЛ. В отличие от ХПА, обнаружено более существенное повышение уровня ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18 и снижение концентрации ИЛ-4 и ИЛ-10 (табл. 3).

В отношении показателей системы комплемента на местном уровне при ХПА повышалась концентрация большинства показателей системы комплемента, С1-ингибитора, фактора Н, а содержание С5-компонента комплемента не отличалось от показателей здоровых доноров. При ХПБ отмечалось более существенное повышение уровня С3-, С4-, С5- и С5а-компонентов системы комплемента и фактора Н, на фоне нормальной концентрации С1-ингибитора (табл. 3).

Таблица 3

Иммунометаболические нарушения на местном уровне
у больных ХПА и ХПБ до лечения (M±m)

Показатели	Единицы измерения	1	2	3
Здоровые	ХПА	ХПБ
ФНОα	пкг/мл	12,8±1,7	17,3±0,9*1	49,4±2,9*1,2
ИЛ-1β	пкг/мл	6,8±1,8	8,3±0,9*1	21,6±2,2*1,2
ИЛ-6	пкг/мл	39,6±4,3	43,4±5,1	56,1±5,2*1
ИЛ-8	пкг/мл	20,0±3,6	25,8±2,7	61,7±7,0*1,2
ИЛ-18	пкг/мл	50,2±2,1	140,2±3,1*1	231,4±4,4*1,2
ИЛ-2	пкг/мл	154,0±3,3	208,3±17,5*1	226,3±5,6*1
ИФγ	пкг/мл	82,0±7,4	124,6±13,2*1	131,6±10,5*1
ИЛ-4	пкг/мл	8,4±0,71	9,1±1,2	6,0±1,3*1,2
ИЛ-10	пкг/мл	30,2±4,2	21,7±3,0*1	14,2±2,9*1,2
РАИЛ	пкг/мл	450,2±11,7	125,3±14,7*1	122,9±5,5*1
С3	мг/дл	48,8±4,4	59,1±5,2*1	79,3±8,2*1,2
С3а	нг/мл	31,3±3,7	50,1±4,9*1	51,2±6,0*1
С4	мг/дл	2,3±0,21	2,91±0,09*1	4,9±0,2*1,2
С5	мг/мл	5,1±0,27	5,42±0,2	29,3±1,2*1,2
С5а	нг/мл	0,92±0,02	2,2±0,21*1	2,71±0,1*1,2
С1-инг.	мкг/мл	24,5±2,1	49,8±4,7*1	27,1±2,8*2
Фактор Н	мкг/мл	18,1±2,0	31,3±3,3*1	31,2±3,6*1
МДА	мкмоль/л	0,24±0,02	6,71±1,3*1	2,31±0,12*1,2
АГП	усл. ед.	0,13±0,02	1,03±0,04*1	0,41±0,03*1,2
Каталаза	мккат/л	4,3±0,03	5,2±0,04*1	8,1±0,2*1,2
СОД	усл. ед.	2,21±0,01	3,21±0,03*1	4,3±0,12*1,2
ОАА	%	31,6±3,7	39,6±2,9*1	29,6±4,1*2

Примечание. * – p < 0,05; цифры рядом со звездочкой – по отношению к показателям какой группы эти различия указаны.

До начала лечения у больных ХПА на местном уровне концентрация продуктов ПОЛ повышалась в 20 раз, кроме того, возрастала активность обоих ферментов антиоксидантной защиты и уровень ОАА. При ХПБ локально в сравнительном аспекте для МДА, АГП, каталазы и СОД выявлены те же закономерности, при нормальном уровне ОАА (табл. 3).

Иммунометаболические нарушения у больных с сочетанием доброкачественной гиперплазией предстательной железы и хронического простатита на фоне традиционной фармакотерапии. При исследовании концентрации цитокинов в плазме крови до операции выявлено повышение уровня провоспалительных (ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18 и ИФγ) и, по-видимому, компенсаторное, противовоспалительных цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-10). При этом содержание РАИЛ снижалось практически вдвое, что косвенно может свидетельствовать о наличии хронического персистирующего воспаления в ткани предстательной железы (табл. 4).

Оперативное вмешательство (ТУР) вызывало еще большее повышение концентрации провоспалительных цитокинов (ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18) и противовоспалительного ИЛ-10, не оказывая влияния на дооперационный уровень ИЛ-2, ИЛ-4, ИФγ и РАИЛ (табл. 4).

Традиционная фармакотерапия корригировала, но не до уровня здоровых доноров, концентрацию ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-18, ИФγ, РАИЛ, еще значительнее повышала содержание противовоспалительных цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10, не влияя на уровень ИЛ-8 (табл. 4).

До операции обнаружена активация системы комплемента по классическому и альтернативному путям, о чем свидетельствовало повышение концентрации С4-, С3-, С3а-, С5-, С5а-компонентов системы комплемента, при снижении уровня ее регуляторов (С1-ингибитора и фактора Н). После ТУР обнаружено дальнейшее повышение содержания С3-, С4-, С5-, С5а-компонентов комплемента и снижение С1-ингибитора (табл. 4).

В плазме крови пациентов, получавших фармакотерапию по традиционной схеме, наблюдалась нормализация концентрации С3а-компонента комплемента и фактора Н. Содержание С3-, С4-, С5-, С5а-компонентов комплемента снижалось, а С1-ингибитора – повышалось, но не до уровня здоровых доноров (табл. 4).

До лечения установлено снижение всех показателей фагоцитарной и частично (НСТ-ст., ФРН и ИСН) кислородзависимой активности гранулоцитов периферической крови.

Аналогичные, но более выраженные в отношении механизмов кислородзависимого метаболизма клеток изменения регистрировались в крови пациентов после операции и по окончании курса лечения, причем традиционная фармакотерапия не корригировала сниженные после ТУР НСТ-ст. и ФРН (табл. 4)

При поступлении в стационар в плазме крови больных ДГПЖ в сочетании с ХП наблюдалось повышение концентрации промежуточных и конечных продуктов ПОЛ (МДА и АГП), возрастала активность основного фермента антиоксидантной системы каталазы, но снижалась СОД и ОАА (табл. 4).

После ТУР отмечалась нормализация активности каталазы, активность СОД и ОАА, по-прежнему, оставалась сниженными, а уровень МДА и АГП – повышенным. Традиционная фармакотерапия ДГПЖ и ХП корригировала концентрацию АГП, но не изменяла содержание МДА, активность каталазы, СОД и ОАА (табл. 4).

На местном уровне у больных ДГПЖ в сочетании с ХП до лечения была повышенной концентрация провоспалительных (ФНОα, ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-8) и противовоспалительного (ИЛ-4) цитокинов, но снижен уровень ИЛ-10. При этом уровень ИЛ-6, ИФγ, ИЛ-18 и РАИЛ не отличался от показателей здоровых доноров (рис. 2).