Кинетика и термодинамика ферментативных реакций (стр. 7 )

Таблица 2.18

[S], mM	v, ( моль/с) без ингибитора	v, (моль/с) ингибитор A	v, (моль/с) ингибитор B
1	2.5	1.17	0.77
2	4.0	2.1	1.25
5	6.3	4.0	2.0
10	7.6	5.7	2.5
20	9.0	7.2	2.86

Задача 2.19. Измеряли начальную скорость ферментативной реакции как функцию концентрации субстрата в отсутствии и присутствии ингибитора и получили следующие данные (рис. 2.19).

Таблица 2.19

[S], М	v, моль мин-1	v, моль мин-1
без ингибитора	в присутствии ингибитора
0,0001	33	17
0,0002	50	29
0,0005	71	50
0,001	83	67
0,002	91	80
0,005	96	91
0,01	98	95
0,02	99	98
0,05	100	99
0,1	100	100

1)  Чему равна Vmax в отсутствие ингибитора?

2)  Чему равна Км в отсутствие ингибитора?

3)  При [S]=0,0004 М какова будет скорость в отсутствие ингибитора?

4)  При [S]=0,0004 М какова будет скорость в присутствии ингибитора?

5)  В отсутствие ингибитора, какая часть фермента будет связана с субстратом, если [S]=0,0004 М?

Задача 2.20. Исследовали скорость ферментативной реакции в отсутствии и присутствии ингибитора при различных концентрациях субстрата. Полученные данные представлены в табл.2.20.

Таблица 2.20

[S], мМ	v, моль/мин
контроль	ингибитор
1,25	1,72	0,98
1,67	2,04	1,17
2,50	2,63	1,47
5,00	3,33	1,96
10,00	4,12	2,38

Определить Vmax и Km в присутствии и отсутствии ингибитора, тип ингибирования.

Задача 2.21. 3,4-Дихлорфенилэтаноламин является одновременно субстратом и ингибитором реакции трансметилирования, катализируемой фенилэтаноламин-N-метилтрансферазой. На основании данных, приведенных в табл. 2.21, определите кинетические параметры реакции (Км, Кs′, Vmax, [S]opt.

Таблица 2.21

[S] 10-6, М	v0 10-10, М мин-1	[S] 10-6, М	v0 10-10, М мин-1
1,00	4,00	10,0	5,16
1,14	4,25	25,0	3,85
1,33	4,55	50,0	2,82
1,60	4,76	75,0	2,33
2,00	5,00	100,0	1,79
2,67	5,26	125,0	1,47
5,00	5,45	150,0	1,28

Задача 2.22. Реакция гидролиза йодида N-метил-7-ацетоксихинолина, катализируемого ацетилхолинэстеразой, ингибируется субстратом. Исходя из данных табл. 2.22, определите кинетические параметры ферментативной реакции: Км, Vmax, Ks′, [S]opt. (Условия опыта: рН 6,85; 250С; 0,05 М фосфатный буфер; 1,6% метанола).

Таблица 2.22

[S] 10-5, М	v0, условн. ед.	[S] 10-5, М	v0, условн. ед.
0,125	0,174	2,0	0,735
0,143	0,195	5,0	0,833
0,167	0,220	10,0	0,800
0,200	0,254	20,0	0,715
0,250	0,300	30,0	0,645
0,333	0,364	40,0	0,572
0,500	0,465	50,0	0,514
1,000	0,625	60,0	0,476
		70,0	0,431

Задача 2.23. Изофермент ЛДГ1, выделенный и очищенный из cтарых эритроцитов кролика, ингибируется высокими концентрациями пирувата. На основании данных, приведенных в табл. 2.23, определите кинетические характеристики реакции, катализируемой этим изоферментом: Км, Vmax, Ks′, [S]opt. Концентрация NADH – 80 мкМ.

Таблица 2.23

[пируват], мкМ	v, мкмоль/мин/мг белка
20	15
40	33
80	49
160	68
320	74
640	66
1280	45

Задача 2.24. Реакция восстановления пирувата, катализируемая лактатдегидрогеназой, ингибируется высокими концентрациями субстрата. На основании данных табл. 2.24 определите Км, Vmax, Кs′ и [S]opt данной ферментативной реакции. (Условия опыта: рН 6,80; 27,5 0С; 0,05 М фосфатный буфер; [NADH] = 1,29 10-5 М; [E]0 = 2 10-5 мг/мл).

Таблица 2.24

[S] 10-3, М	v0 10-6, М мин-1	[S] 10-3, М	v0 10-6, М мин-1
0,020	3,15	0,70	4,30
0,029	3,70	1,10	3,90
0,040	4,10	3,00	2,40
0,050	4,39	5,00	1,80
0,100	4,92	7,00	1,50
0,500	4,90	10,00	1,10

Задача 2.25. n-Нитроанилид N-бензоил-Lаргинина является одновременно субстратом и ингибитором гидролиза, катализируемого трипсиноподобным ферментом микробного происхождения. Исходя из данных табл. 2.25, найти кинетические параметры ферментативной реакции. Условия опыта: рН 9,0, 250 С.