Разработка методов анализа индикаторных компонентов в фиточаях и биологически активных добавках на их основе (стр. 6 )

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДРУГИХ ИНДИКАТОРНЫХ КОМПОНЕНТОВ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, ШИРОКО ПРИМЕНЯЕМОГО ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ ФИТОЧАЕВ И БАД

Табл 15. Условия хроматографического определения ИК.

Индиаторн Компонент	Колонка	Состав ПФ	Детектирование	Условия пробоподготовки
сырья	экстрактов
Розмариновая кислота	250 × 4,6 мм Phenomenex Luna 5u C18(2)	ГРАДИЕНТ А-0,1% фосфорная кислота; В-ACN; 0мин-12%В, 25мин-50%В	СФМ λ=330нм	60% метанол, однократная экстракция, на водяной бане 30 мин	60% метанол,
Глицирризиновая кислота	250 × 4,6 мм Nucleosil Luna 5u C18(2)	Ацетонитрил: р-р ТХУ с рН=2,5 (44:56)	СФМ λ=254нм	дистил. вода, на водяной бане 30 мин	дистил. вода,
Элеутерозиды В и Е	250 × 4,6 мм Phenomenex Luna 5u C18(2)	ГРАДИЕНТ А-ТХУ с рН=2,5; В-АCN; 0мин-10%В, 20мин-30%В, 27мин–10%В	СФМ λ=220нм	50% этанол, на водяной бане 45 мин	50% этанол,
Схизандрин и гамма-схизандрин	250 × 4,6 мм SGE Wakosil II C18 RS	ГРАДИЕНТ А-ТХУ с рН=2,5; В-ACN; 0мин-50%В, 20мин-95%В, 30мин – 95%В	СФМ λ=254нм	80% этанол, на водяной бане 60 мин	80% этанол,
Валереновая кислота	250 × 4,6 мм Phenomenex Luna 5u C18(2)	Р-р Фосфорной кислоты рН=2,4:ацетонитрил (35:65)	СФМ λ=210нм	Экстрагент – метанол, двухкратная экстракция, на водяной бане 30 мин	– метанол. на водяной бане 30 мин
Салидрозид	250 × 4,6 мм Phenomenex Luna 5u C18(2)	метанол-вода (23:77)	ФД λex=280нм λem=320нм	25% этанол, на водяной бане 30 мин	25% этанол,
Сеннозиды А и В	250 × 4,6 мм Phenomenex Luna 5u C18(2)	ГРАДИЕНТ А-ТХУ с рН=2,5; В-МеOH; 0мин-29%В, 20мин-65%В, 40мин – 65%В	СФМ λ=330нм	10% этанол, на водяной бане 30 мин	10% этанол, ультразвук,

Табл 16. Параметры хроматографического разделения индикаторных компонентов.

Индикаторный компонент	tR, мин.	K	N	As	α	R
Валереновая кислота	10,16	3,839	14300	1,0
Розмариновая килота	13,11	5,243	49400	1,0
Глицирризиновая кислота	5,68	2,790	7700	1,0
Элеутерозид В Элеутерозид Е	11,07	4,799	49900	1,1	1,356	30,86
15,77	6,511	134000	1,2
Схизандрин γ-схизандрин	6,61	5,090	17600	1,1	2,42	16,2
14,71	12,36	24100	1,1
Салидрозид	8,21	2,911	25800	1,0
Сеннозид А Сеннозид В	14,98	6,142	63400	1,1	1,24	6,225
12,49	4,949	30500	1,1

Табл 17. Параметры количественного определения индикаторных компонентов

Соединение	Предел обнаружения, мг/л	Предел колич. определения мг/л	Диапазон линейных концентраций мг/л	Параметры линейной регрессии
Уравнение сглаживающей прямой	Коэфф ициент корреляции
Валереновая кислота	1,5	9,0	1-1000	y=27958x+4332	0,9954
Розмариновая килота	1,0	6,0	1-1000	y=20727x-579	0,9875
Глицирризиновая кислота	1,5	9,0	1-1000	y=5289x+2341	0,9992
Элеутерозид В Элеутерозид Е	2,1 1,8	12,0 12,0	2-2000 2-2000	y=32706x+784 y=16748x+4512	0,9932 0,9851
Схизандрин γ-схизандрин	2,3 2,0	12,0 12,0	2-1000 2-1000	y=16607x+1312 y=36600x-1200	0,9947 0,9925
Салидрозид	0,005	0,01	0,01-50	y=118015x+10230	0,9991
Сеннозид А Сеннозид В	1,0 1,0	6,0 6,0	1-1500 1-1500	y=6342x+2341 y=7862x+1346	0,9966 0,9932

Табл 18.Метрологические характеристики методик.

Вещество	Х ср	s2	s	∆x ср	ε%
Валереновая кислота	10,3	0,0233	0,1526	0,189	1,84
Розмариновая килота	31,2	0,4037	0,6353	0,789	2,53
Глицирризиновая кислота	102,4	1,8916	1,3753	1,709	1,67
Элеутерозид В Элеутерозид Е	45,6 52,1	1,6977 2,9626	1,3029 1,7212	1,619 2,139	3,55 4,11
Схизандрин γ-схизандрин	97,3 99,4	3,3335 2,1428	1,8257 1,4638	2,270 1,819	2,33 1,83
Салидрозид	9,9	0,0093	0,0964	0,1199	1,21
Сеннозид А Сеннозид В	51,3 52,3	1,2679 1,7399	1,1260 1,3190	1,3999 1,6399	2,73 3,14

Рис 5. Примеры разделения индикаторных компонентов

Выводы

1.  Изучены физико-химические свойства (хроматографическая подвижность, уф - и видимые спектры, масс-спектры) выбранных индикаторных компонентов. Для фенолопроизводных и их гликозидов (гидрохинон, арбутин, салидрозид) изучены флуоресцентные свойства и предложен новый метод ВЭЖХ анализа с флуорометрическим определение (λex=280нм и λem=320нм), отличающийся высокой чувствительностью и селективностью.

2.  Изучено влияние растворителя и условий экстракции на степень извлечения индикаторных компонентов из фиточаев и БАД. Использование разработанных методик с высокой селективностью и чувствительностью, позволило использовать метод жидкостной экстракции без применения дополнительных методов концентрирования и очистки. Подобраны оптимальные и доступные экстрагенты для изученных соединений. Определено оптимальное время экстрагирования.

3.  Подобраны хроматографические системы для определения катехинов, флаволигнанов, арбутина, гиперозида, гиперицина, рутина, глицирризиновой кислоты, розмариновой кислоты, салидрозида, схизандринов, элеутерозидов, валереновой кислоты. Предложено использовать для разделения веществ полифенольной природы подвижные фазы с рН=2,5, для антраценпроизводных (гиперицин и псевдогиперицин) с рН=5,5. Разработаны условия ВЭЖХ с градиентным элюированием для совместного определения большого числа индикаторных компонентов. В случае определения одного или двух компонентов в образце предложены, более простые методики с изократической подачей подвижной фазы.

4.  При оценке пригодности хроматографических систем, все разработанные методики показали хорошую эффективность (0 теоретических тарелок), высокую степень разделения и селективность (R= 1,0-30,0; α≠1,0)

5.  Разработаны методики количественного определения катехинов, флаволигнанов, арбутина, гиперозида, гиперицина, рутина, глицирризиновой кислоты, розмариновой кислоты, салидрозида, схизандринов, элеутерозидов, валереновой кислоты в многокомпонентных фиточаях и БАД на их основе.

6.  Предел обнаружения методик со СФМ детектированием составил 1мг/л, для методик с флуорометрическим детектирование от 0,005мг/. Предел количественного определения составил около 6мг/л и 0,03мг/л соответственно. Относительная погрешность составила от 1,1% и не более 5,5%.

7.  С помощью разработанных методик было проанализировано около 180 образцов растительного сырья, экстрактов, препаратов, а так же фиточаев и БАД к пище, проходящих экспертизу в ГУ НИИ питания РАМН. Обнаруженное содержание позволило стандартизовать продукт, оценить его качества и уровень потребления биологически активных веществ. Использование разработанных методик позволили установить, что около 10% проанализированных образцов либо не содержали предполагаемых индикаторных компонентов, либо содержали следовые количества, что указывает на фальсификацию или низкое качество продукта.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1., , Власов методов анализа индикаторных компонентов фиточаев и биологически активных добавок. // Материалы III межрегиональной научно-практической конференции «Питание здорового и больного человека». - СПб., 2005. – С. 201-202.

2. Власов арбутина и гидрохинона в фиточаях и БАД. // Материалы III межрегиональной научно-практической конференции «Питание здорового и больного человека». - СПб., 2005.- С.201-202.

3. Власов салидрозида в фиточаях и БАД на основе родиолы. // Материалы III межрегиональной научно-практической конференции «Питание здорового и больного человека». - СПб., 2005. – С.44.

4. Власов основных компонентов экстрактов чая (Camelia sinensis) и БАД на их основе. // Материалы всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье». - Суздаль, 2005. - С. 272-274.

5. , , Родионова флаволигнанов расторопши и фитопрепаратов на их основе с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. // Материалы 9-го Международного конгресса Phytopharm. - СПб., 2005. – С. 203-204.

6. , , Комарова подлинности растительных экстрактов как сырья для БАД Schizandra chinensis – Лимонник китайский. // «Рынок БАД».- 2005. - №5(25) октябрь. – С 33-35.

7. , , Хромченкова анализ биологически активных полифенольных компонентов чая и напитков на основе экстрактов чая. // Материалы VIII всероссийского конгресса «Оптимальное питание – здоровье нации». - Москва, 2005.- С. 298.

8. , Власов подлинности растительных экстрактов как сырья для БАД Scutellaria baicalensis – Шлемник байкальский. // «Рынок БАД»№1(27) февраль. – С 38-39.

9. , , Оценка подлинности растительных экстрактов, как сырья для БАД. Silybum marianum (L.) - Расторопша пятнистая. // «Рынок БАД».- 2006. - №2(28) апрель. – С 27-29.

10. М, , Раменская аналитических подходов к стандартизации растительных экстрактов лимонника китайского - schisandra chinensis. // Материалы XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». – Москва, 2006. – С. 505.

11. , , Применение ВЭЖХ для анализа биологически активных компонентов чая. // Сборник трудов 10-го Международного конгресса Phytopharm.- СПб, 2006 – С.38-43.

12. , , Раменская индикаторных компонентов в фитопрепаратах на основе зверобоя продырявленного. // Сборник трудов 10-го Международного конгресса Phytopharm.- СПб, 2006 – С.370-374.

13. , , Беседина компоненты водных извлечений травы зверобоя. // Фармация.- М., 2006. - №4 - С. 15-18