В день начала исследования, врач, руководящий исследованием проводил обследование добровольца и делал запись в индивидуальной регистрационной карте. Затем устанавливал кубитальный катетер, через который проводился отбор крови.
Прием препаратов осуществлялся per os в 8 часов утра. Отбор крови осуществлялся из кубитальной вены в стеклянные пробирки до приема препарата и спустя определенные промежутки времени после приема препарата.
Пробы хранили при -350С до анализа. Концентрацию индапамида и триметазидина в крови добровольцев определяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Фармакокинетические параметры рассчитывали с помощью программы KineticaТМ2000 модельно-независимым методом. Рассчитывались следующие параметры:
максимальная концентрация Cmax – максимальное значение из измеренных;
время ее достижения Tmax – время при котором измерялась максимальная концентрация;
площадь под фармакокинетической кривой – в пределах длительности наблюдений (AUC0-t) рассчитывали методом трапеций;
отношение Cmax/AUC0-t по индивидуальным значениям для испытуемого препарата и препарата сравнения (как характеристику скорости васывания).
Также рассчитывали:
f'=AUC0-t (Тест)/AUC0-t(Референс)
f''=Cmax (Тест)/Cmax (Референс)
Полученные экспериментальные данные были подвержены статистической обработке. Достоверность различий параметров биоэквивалентности оценивали с помощью дисперсионного анализа (ANOVA). Для оценки параметров биоэквивалентности были рассчитаны также доверительные интервалы.
Результаты исследования
На рисунках 2 и 3 представлена динамика концентрации индапамида и триметазидина анализируемых препаратов.
Рисунок 2. Усредненная динамика концентрации индапамида после приема препаратов Т1, Т2 и R.
Из анализируемых данных было получено, что среднее значение относительной биодоступности (f) препаратов Т1 и Т2 по отношению к препарату Арифон составило 0,96 + 0,17 и 0.97+0,16 соответственно. Среднее значение отношений максимальных концентраций составило 1,05 + 0,23 для Т1 и 1,04+0,21 для Т2. При этом среднее значение относительной биодоступности препарата Т1 по отношению к препарату Т2 составило 1,01 + 0,21, а среднее значение отношений максимальных концентраций составило 1,05 + 0,31.
Рисунок 3. Усредненная динамика концентрации триметазидина после приема препаратов Т1, Т2, R1 и R2.
Из анализируемых данных получено, что среднее значение относительной биодоступности препаратов Т1 и Т2 по отношению к препаратам R1 и R2 составило 1,00 + 0,12 и 1,01+0,18 соответственно. Среднее значение отношений максимальных концентраций составило 1,06 + 0,23 для Т1 и 1,05+0,18 для Т2. При этом среднее значение относительной биодоступности препарата Т1 по отношению к препарату Т2 составило 0,81 + 0,23, а среднее значение отношений максимальных концентраций составило 1,03 + 0,20.
Полученные результаты показывают важность выбора референтного препарата.
In vivo – in vitro корреляция (IVIVC): современный инструмент для оценки поведения лекарственных форм в условиях in vivo
В настоящее время установление in vivo-in vitro корреляции (IVIVC) для твердых дозированных лекарственных форм стало одним из ключевых направлений современной фармакологии, фармации и биофармации и важным предметов рассмотрения производителями лекарственных средств и регуляторными органами. Выявления достоверной in vivo-in vitro корреляции может позволить проводить оценку поведения лекарственного средства in vivo путем изучения его кинетики растворения и, таким образом, оценивать его взаимозаменяемость с препаратом сравнения без проведения исследований биоэквивалентности.
Исследования IVIVC преимущественно применяются для лекарственных форм с замедленным высвобождением, поскольку при этом обеспечивается точность исследований и получение более предсказуемых и достоверных результатов. Это связано с тем, что высокая вероятность установления IVIVC существует в том случае, если процессы высвобождения лекарственного вещества из лекарственной формы и его растворения определяют скорость его всасывания в ЖКТ. Руководство FDA по корреляции in vivo-in vitro распространяется только на лекарственные формы с замедленным высвобождением. В то же время, именно данный документ послужил основой для возможности выявления IVIVC для других лекарственных форм и, особенно, для лекарственных форм с немедленным высвобождением.
Нами были проведены ряд исследований по выявлению IVIVC пролонгированных лекарственных средств, содержащих действующие вещества из 1, 2 и 3 класса Биофармацевтической Классификационной Системы.
Препараты триметазидина: «Предуктал МВ» (оригинальное ЛС), таблетки с модифицированным высвобождением, покрытые оболочкой, 35 мг («Лаборатория Сервье», АО, Франция).
Препараты индапамида: «Арифон ретард» (оригинальное ЛС), таблетки с контролируемым высвобождением, покрытые оболочкой, 1,5 мг («Лаборатория Сервье», АО, Франция).
Препараты ципрофлоксацина: «Цифран ОД», таблетки пролонгированного действия, покрытые оболочкой, 500 мг (Ранбакси, Индия). Данный препарат является наиболее распространенным воспроизведенным лекарственным средством ципрофлоксацина на фармацевтическом рынке РФ.
Препараты ибупрофена: ибупрофен, таблетки 200 мг (РУП «Борисовский завод медицинских препаратов», Белоруссия). Один из зарегистрированных генериков.
Кинетику растворения препарата изучали согласно Методическим Рекомендациям «Оценка биоэквивалентности лекарственных средств» МЗСР РФ (2008 г.). Среды растворения – 0,1 М или 0,01 М раствор хлороводородной кислоты, ацетатный буферный раствор рН 4,3 или 4,5, фосфатный буферный раствор рН 6,8, объем среды растворения – 500 мл или 900 мл, температура – 37 оС. Для получения статистически достоверных результатов испытание проводили 12 раз для каждого препарата. Достоверность результатов испытания определяли путем расчета относительных стандартных отклонений (RSD) для каждой временной точки (критерий приемлемости – не более 10 %). По данным кинетики растворения для каждого референтного препарата была проведена линеаризация профиля высвобождения с помощью уравнения кинетики 1-го порядка, на основании которого был рассчитан параметр MDTin vitro.
Фармакокинетические параметры изучали в рамках исследований по биоэквивалентности, одобренных в соответствии с действующим законодательством. Биоэквивалентность изучали на 18 здоровых добровольцах. Дизайн испытания - рандомизированное, открытое, перекрестное исследование. Все добровольцы в период за 1-14 дней до исследования проходили углубленное врачебное обследование (сбор анамнеза, врачебный осмотр, биохимическое исследование крови, общий анализ крови и мочи).
Добровольцы были проинформированы о том, что во время всего исследования они должны соблюдать стандартный режим: не подвергаться физической и психической нагрузке, не употреблять спиртные напитки, кофе и чай, а также не принимать никакие другие лекарственные препараты. В обязанности добровольцев также входило сообщение о любых изменениях режима и самочувствия во время, и после проведения фармакокинетического исследования.
В день начала исследования врач, руководящий исследованием, проводил клиническое исследование добровольца и делал запись в индивидуальной карточке. Затем устанавливал разовый кубитальный катетер, через который проводился забор крови.
Отбор проб крови у добровольцев производили из кубитальной вены в количестве 5 мл в стеклянные пробирки до приема препарата и спустя 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 4, 6, 8, 12 и 24 для препаратов триметазидина, 2, 3, 5, 8, 10, 11 и 12 ч для препаратов индапамида, 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 4, 5, 6, и 8 ч для препаратов ципрофлоксацина, и 0,25, 0,5, 0.75, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6, 8, 10 и 12 ч для препаратов ибупрофена. Пробы крови центрифугировали в течение 10 минут при 3000 об/мин, отбирали 1,5 мл плазмы и хранили при температуре -35 0С до анализа.
В ходе исследования были рассчитаны следующие фармакокинетические параметры: AUC0-t, Cmax, Tmax, MRTin vivo, а также соотношение Cmax/AUC0-t. Достоверность результатов испытания определяли путем расчета коэффициентов вариации (CV, %) для каждого среднего значения соответствующего параметра.
Установление in vivo – in vitro корреляции для пролонгированного препарата триметазидина
Действующее вещество препарата «Предуктал МВ» относится к 1 классу БКС («высокая» растворимость, «высокая» проницаемость). IVIVC для препаратов, содержащих ЛВ из 1 класса БКС характерна в том случае, если скорость опорожнения желудка превышает скорость растворения в испытаниях in vitro. Поскольку разработка IVIVC проводится для пролонгированного препарата, вероятность того, что лимитирующей стадией его попадания в системный кровоток будут этапы высвобождения и растворения ЛВ (и, соответственно, вероятность выявления корреляции) будет высока.
Профили высвобождения препарата «Предуктал МВ» в различных средах растворения приведены на Рисунке 4. Фармакокинетическая кривая препарата приведена на Рисунке 5.
Рис.4. Профили высвобождения ЛС «Предуктал МВ» в буферных средах.
Рис.5. Фармакокинетическая кривая препарата «Предуктал МВ».
Для установления IVIVC оценивали взаимосвязь между суммарным фармакокинетическим параметром MRTin vivo и соответствующим параметром высвобождения MDTin vitro, то есть в ходе исследования проводили выявление корреляции уровня В. Фармакокинетические параметры и среднее время высвобождения препарата «Предуктал МВ» приведены в Таблице 1. Корреляционная зависимость между изучаемыми параметрами приведена на Рисунке 6.
Таблица 1
Фармакокинетические параметры и среднее время высвобождения препарата «Предуктал МВ»
Cmax, нг/мл | Tmax, ч | AUC0-t, нг*ч/мл | Cmax/AUC0-t, ч-1 | MRTin vivo, ч | MDTin vitro, мин |
64,2 | 2,9 | 743,7 | 0,087 | 10,198 | 6,721 |
Рис. 6. Корреляционная зависимость между параметрами MRTin vivo и MDTin vitro для препарата «Предуктал МВ».
Основные параметры уравнения корреляционной зависимости приведены в Таблице 2.
Таблица 2
Параметры уравнения корреляционной зависимости
Коррелируемые параметры | Параметры уравнения | |||||
a | b | r | n | p | ||
In vivo | MRTin vivo, ч | 1,089 | 0,766 | 0,967 | 18 | 0,0001 |
In vitro | MDTin vitro, мин |
Рассчитанный коэффициент корреляции r составил 0,97, при этом критерий приемлемости для установления IVIVC составляет 0,85. Таким образом, в результате проделанной работы установлены математические зависимости между параметрами экспериментальной фармакокинетики исследуемого препарата и скоростью его высвобождения in vitro.
Установление in vivo – in vitro корреляции для пролонгированного препарата индапамида
Действующее вещество препарата «Арифон ретард» относится ко 2 классу БКС, то есть имеет «низкую» растворимость и «высокую» проницаемость. Как было указано выше, IVIVC для препаратов, содержащих ЛВ из 2 класса БКС наиболее вероятно, поскольку абсорбция такого ЛВ будет лимитирована стадией растворения. Высокая вероятность корреляции также связана с тем, что препарат имеет пролонгированную лекарственную форму.
Профили высвобождения препарата «Арифон ретард» в различных средах растворения приведены на Рисунке 7. Фармакокинетическая кривая препарата приведена на Рисунке 8.
Для установления IVIVC оценивали взаимосвязь между фармакокинетическим параметром MRTin vivo и параметром высвобождения MDTin vitro, то есть в ходе исследования проводили выявление корреляции уровня В.
Рис.7. Профили высвобождения ЛС «Арифон ретард» в буферных средах.
Рис.8. Фармакокинетическая кривая препарата «Арифон Ретард».
Фармакокинетические параметры и среднее время высвобождения препарата «Арифон ретард» приведены в Таблице 3. Корреляционная зависимость между параметрами in vivo и in vitro приведена на Рисунке 9.
Таблица 3
Фармакокинетические параметры и среднее время высвобождения препарата «Арифон ретард»
Cmax, нг/мл | Tmax, ч | AUC0-t, нг*ч/мл | Cmax/AUC0-t, ч-1 | MRTin vivo, ч | MDTin vitro, мин |
25,5 | 8,6 | 531,1 | 0,047 | 6,856 | 43,391 |
Рис.9. Корреляционная зависимость между параметрами in vivo и in vitro для препарата «Арифон ретард».
Полученная зависимость описывается уравнением Больцмана (основные параметры приведены в Таблице 4), коэффициент корреляции r составил 0,94. Таким образом, в результате проведенного исследования была выявлена корреляция уровня В для изучаемого препарата индапамида, что согласуется с положением действующего вещества в биофармацевтической классификационной системе (2 класс БКС) и лекарственной формой (таблетки с контролируемым высвобождением).
Таблица 4
Параметры уравнения линейной регрессии
Коррелируемые параметры | Параметры уравнения | |||||
a | b | r | n | p | ||
In vivo | MRTin vivo, ч | 40,97 | 7,17 | 0,941 | 18 | 0,0001 |
In vitro | MDTin vitro, мин |
Установление in vivo – in vitro корреляции для пролонгированного препарата ципрофлоксацина
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 |
