Практикум по нормальной физиологии (стр. 5 )

В этом случае камеру следует промыть дистил. Н2О, насухо вытереть марлей и заполнить снова.

Разведенную кровь следует еще раз перемешать. Заполненную камеру помещают под микроскоп и приступают к подсчету.

Считать эритроциты удобней при большом увеличении. Подсчеты эритроцитов ведут в 5-ти больших квадратах, расположенных в разных местах сетки. Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратиками, руководствуются правилом Егорова: относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе, в данном квадратике не обсчитываются. Количество эритроцитов вычисляют по формуле

где Х – искомое число,

А – число эритроцитов в 5-ти больших квадратах или в 80 маленьких.

- объем малого квадратика;

1:200 – разведение крови;

Х = число эритроцитов в 1 мкл крови.

2. Определение количества эритроцитов фотоэлект­рическим эритрогемометром.

Цель опыта: ознакомиться с автоматизированным ме­тодом подсчета эритроцитов.

Ход работы. Определение чис­ла эритроцитов в крови основано на фотоэлектрическом измерении степени поглощения света взвесью эритроцитов. При определении числа эритроцитов измерения ведутся в инфра­красной части спектра. Производится начальная установка прибора. Для этого оправу с рабочими фильтрами поставить в нижнее положение до упора. В гнездо для кювет вставить установочный фильтр «У». Переключатель «Э – Г» перевести в положение «Э». Отсчетный диск с помощью ручки поставить в такое положение, чтобы риска совпала с делением градусной шкалы на «0», значение которой в градусах выгравировано на верхней торцовой поверхности установочного фильтра против буквы «Э». Ручкой «Уст. нуля» установить стрелку микроамперметра на «0» шкалы. Затем приготовить пробу: пипеткой на 15 см3 налить 14 см3 3,5% р-ра NaCl в чистую пробирку и сюда же ввести 20 мм3 исследуемой крови. Содержимое в пробирке перемешать, не встряхивая. После этого заменить фильтр «У» кюветой «Э» с приготовленной смесью. Опреде­ление начинать через 50–60 сек после заполнения кюветы. При этом стрелка микроамперметра отклонится от «0» шкалы. Вращая ручку отсчетного диска, надо добиться возвращения стрелки микроамперметра на «0». На шкале прочесть ответ в млн эритроцитов в мм3.

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ ПОДГОТОВКИ:

1. История развития представления об эритропоэзе.

2. Особенности эритрона при старении.

3. Метаболизм эритроцитов.

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ИТОГОВОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ:

1. Количество эритроцитов в общем анализе крови у обследуе­мого составило 5,9. 106 в 1 мкл. Исследование проводилось сразу после возвращения из отпуска. С чем это может быть связано?

2. Анализ крови показал, что диаметр эритроцитов – 5 микрон. Что это означает? Чем может быть вызвано это явление?

3. Оперируемому больному назначили вливание цельной крови. Какая цель преследуется? Какие функции выполнит кровь?

4. Когда целесообразнее ввести эритроцитарную массу: кровопотеря, заболевание крови, селезенки, недостаточность функ­ции красного костного мозга.

5. Известно, что диаметр капилляра меньше диаметра эритроцита. Почему нормальный эритроцит свободно проходит че­рез него?

6. Как изменится гематокрит при переливании кровезаменителей?

7. После аварии у пострадавшего в общем анализе крови – 6,5.106 эритроцитов в 1 мкл. Что целесообразнее вливать: эритроцитарную массу, нативную кровь или плазму крови? 8. В мазке определили эритроциты нормального диаметра, бледно окрашенные. О чем это говорит?

Сборник «Контрольные вопросы по курсу нормальной физиологии».

Раздел «Физиология крови». Задачи № 1-33.

Занятие № 27

ТЕМА: ГЕМОГЛОБИН. ЕГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

УЧЕБНЫЕ ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:

Студент должен знать: структуру и свойства гемоглобина;

количественное содержание гемоглобина в крови;

принцип и методы определения цветного показателя;

виды гемоглобина и их физиологическая роль;

соединения гемоглобина с различными газами, их свойства;

значение кривой диссоциации оксигемоглобина и влияющие на нее факторы.

Студент должен уметь: определять содержание гемоглобина;

вычислять цветной показатель и объяснять причины его изменения;

трактовать сдвиг кривой диссоциации оксигемоглобина.

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ИСХОДНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ:

1. Что обеспечивает дыхательную функцию крови?

2. Из чего состоит гемоглобин?

3. Fe2+ или Fe3+ имеет в своем составе гемоглобин?

4. Идеальное количество гемоглобина.

5. Чему равен в норме цветной показатель?

6. Как называются соединения гемоглобина с О2; СО2; СО?

7. Какие из вышеперечисленных соединений гемоглобина относятся к физиологическим?

8. Назовите разновидности гемоглобина.

9. Основные функции гемоглобина.

ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ ТЕМЫ

7. Гемоглобин, его химическая структура и свойства.

8. Количественное содержание гемоглобина в крови.

9. Синтез гемоглобина.

10. Цветной показатель, его вычисление, клиническое значение.

11. Разновидности гемоглобина, их физиологическая роль, клиническое значение.

12. Соединения гемоглобина с различными газами. Спектральный анализ крови.

13. Миоглобин, его значения и свойства.

14. Кривая диссоциации оксигемоглобина, ее значение.

15. Эффект Вериго-Бора.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

I. Определение гемоглобина методом Сали. Цель опыта: Научиться определять содержание гемо­глобина колориметрическим способом.

Гематиновый метод Сали основан на образовании устойчи­вого раствора коричневого цвета при взаимодействии гемогло­бина с НС1.

Гемометр Сали представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штатив вставлены 3 пробирки одинакового диаметра. Две крайние пробирки за­паяны и содержат стандартный раствор солянокислого гематина; средняя – градуирована. Она предназначена для прове­дения исследования. Стандартный раствор солянокислого гематина по цвету соответствует 167 г/л гемоглобина.

Этот метод чрезвычайно прост и быстро выполним, но не­достаточно точен. При суммировании различных погрешностей этого метода ошибка при определении гемоглобина ±30%. Поэтому в настоящее время в клинике этот метод должен быть заменен более точным.

Ход работы: в среднюю пробирку наливают 0,1 Н р-р НСl до нижней метки. Пипеткой берут 20 мм3 крови из пальца до метки, обтирают ее кончик ватой и выдувают кровь на дно пробирки так, чтобы верхний слой кислоты оставался не­окрашенным. Не вынимая пипетку, споласкивают ее кисло­той. После этого содержимое пробирки перемешивают и ставят в штатив на 5–10 мин. Это время необходимо для полного превращения Нb в солянокислый гематин. Затем к содер­жимому пробирки добавляют по каплям дистил. воду до тех пор, пока цвет полученного р-ра не будет совершенно одина­ков с цветом стандарта (добавляя воду, раствор перемешива­ют стеклянной палочкой).

Цифра на уровне верхней границы полученного р-ра, пока­зывает абсолютное содержание Hb в испытуемой крови, вы­раженное в г %. Значение следует перевести в г/л, т. е. ум­ножить на 10.

2. Измерение количества Hb эритрогемометром. Цель опыта: Ознакомиться с определением гемоглобина эритрогемометром.

Определение количества Hb основано на фотоэлектрическом измерении степени поглощения света р-ром Hb. Определение ведется в зеленой части спектра.

Ход работы: пипеткой налить 5 мм3 0,1% р-ра уксус­ной кислоты в чистую сухую пробирку и сюда же ввести 40, мкл исследуемой крови, взятой пипеткой для Hb. Содержимое пробирки перемешать без встряхивания. Затем содержимое пробирки налить в кювету с отметкой «Г». Вращая ручку диска эритрогемометра, добиться возвращения стрелки миллиампер­метра на «0» и на шкале «Hb» посмотреть содержание Hb в г%.

3. Вычисление цветного показателя. Цель опыта: научиться способам расчета цветного по­казателя.

Цветной показатель позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином. В 1 мкл крови – г Hb, следовательно Hb в одном эритроците равно г или 33 пг. Величину 33 пг, составляющую норму содержания Hb в 1 эрит­роците, принимают за единицу и обозначают как цв. пок. Практически цв. пок. вычисляют по следующей формуле:

где Hbх – найденный Hb в г%.

Существует и другая формула расчета цв. пок,

, где

Hbх – найденный Hb в г%,

Hb норм. – условно нормальное содержание Hb (16,67) в г%,

эр. х – найденное количество эритроцитов,

норм. эр. – условно нормальное кол-во эритроцитов (5 млн.)

При патологических состояниях цв. п. может быть больше 1 (гиперхромия) или ниже 0,8 (гипохромия).

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ ПОДГОТОВКИ:

4. Фракции гемоглобина Р, гемоглобина А.

5. Буферные свойства гемоглобина.

6. Наследственные аномалии гемоглобина.

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ИТОГОВОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ:

1. Вследствие большой физической нагрузки некоторые груп­пы мышц у спортсменов сильно сокращены, что ведет к суживанию капилляров и прекращению тока крови по ним. Как осуществляется в таком случае снабжение мышечных волокон кислородом?

2. На ночь печь в доме жарко затопили, рано закрыли заслонку дымохода. Утром всю семью нашли мертвой. С чем это связано?

3. В исследуемой крови 6-месячного ребенка содержится 120 г/л Нв. Является ли это нормой?

4. В крови 0,1% СО. Какое соединение дает гемоглобин с этим газом? Сколько гемоглобина переходит в это соединение? Воз­можны ли при таком состоянии обратимые явления.

5. Подчеркните, какой из видов гемоглобина обладает наиболь­шим сродством к кислороду: НвР; НвР; НвА?

6. Определено, что количество эритроцитов – 4 , Нв 143 г/л; эритроцитов – 6 , Нв – 151 г/л. Вычислите цветной показатель.

7. Цветной показатель равен 1,3. Когда это физиологично?

8. Почему определение гемоглобина методом Сали недостаточ­но точно?

9. Что будет, если соляной кислоты в пробирку гемометра Сали Вы нальете больше, чем положено? Меньше, чем положено?

10. Что будет, если носик пипетки, перед внесением крови в раствор соляной кислоты в пробирку гемометра, Вы забуде­те обтереть ватой?

Сборник «Контрольные вопросы по курсу нормальной физиологии».

Раздел «Физиология крови». Задачи № 34-56.

Занятие № 28

ТЕМА: ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ СИСТЕМА ЛЕЙКОЦИТОВ

УЧЕБНЫЕ ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:

Студент должен знать: количество лейкоцитов в крови в норме;

виды лейкоцитозов, отличительные признаки, причины возникновения;

регуляцию лейкопоэза, роль нервных и гуморальных факторов.

Студент должен уметь: вести подсчет лейкоцитов в счетной камере Горяева;

интерпретировать результаты общего подсчета лейкоцитов;

объяснить отдельные манипуляции и этапы подсчета количества лейкоцитов.

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ИСХОДНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ:

1. Нормальное содержание лейкоцитов в крови?

2. Что такое лейкоцитоз?

3. Что такое лейкопения?

4. Почему лейкоциты называют «белыми клетками» крови?

5. Что такое лейкопоэз?

6. Как осуществляется регуляция лейкопоэза нервными и гуморальными механизмами: непосредственно, опосредованно.

7. Виды лейкоцитозов.

8. Что такое лейкопоэтины?

ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ ТЕМЫ:

1. Количественное содержание лейкоцитов в крови.

2. Лейкоцитоз: виды, отличительные признаки, причины возникновения.

3. Лейкопения: причины возникновения. Агранулоцитоз.

4. Лейкопоэз, его этапы Нервная и гуморальная регуляция лейкопоэза. Лейкопоэтины.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1. Подсчет количества лейкоцитов (входит в состав общего клинического анализа крови, а также «укороченного» анализа – содержание гемоглобина, число лейкоцитов, СОЭ).

Цель опыта: Освоить методику подсчета общего количе­ства лейкоцитов в крови.

Принцип: подсчет лейкоцитов под микроскопом в опре­деленном количестве квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мкл крови (или 1 л), исходя из объема единицы счетного поля и разведения крови.

Ход работы: разводят исследуемую кровь в 20 раз 3% уксусной кислотой, подкрашенной геницианвиолетом. Для это­го в меланжер до метки 0,5 набирают кровь из пальца, а затем до метки 11 – раствор уксусной кислоты. Кислота разрушает оболочки эритроцитов, а краска окрашивает ядра белых клеток. При этом эритроциты становятся невидимыми и не мешают подсчету лейкоцитов. Размешивают и оставляют на 10 минут. (Допускается счет лейкоцитов не более чем через 2–4 часа после взятия крови).

Подготавливают счетную камеру с сеткой и покровное стек­ло, затем притирают стекло к камере, слегка надавливая его таким образом, чтобы по краям стекла появились радужные кольца или полосы. Это свидетельствует о высоте счетного по­ля камеры – 0,1 мм.

Размешивают, удаляют первую каплю, заполняют камеру и оставляют в горизонтальном положении на I мин. для оседания лейкоцитов. Подсчет лейкоцитов ведется в 25 больших квадра­тах, что составляет 400 маленьких.

Лейкоциты удобнее считать при малом увеличении.

Формула для вычисления количества лейкоцитов в 1 мкл крови.

,

где Х – искомое число лейкоцитов в 1 мкл крови;

В – число лейкоцитов в 25 больших квадратах

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ ПОДГОТОВКИ:

1. Роль лейкоцитов в поддержании целостности и проницаемости клеточных мембран.

2. Роль лейкоцитов в гемостазе.

3. Миграция лейкоцитов.

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ИТОГОВОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ

1. Провели анализ крови на содержание лейкоцитов: 1) на­тощак, 2) после приема пищи. Какие изменения могут быть?

2. Количество лейкоцитов в исследуемой крови 13.109/л. При каких физиологических состояниях это возможно?

3. Количество лейкоцитов в исследуемой крови 1,5.109/л. Как называется это явление? Чем оно может быть вызвано?

4. У больного с ярко выраженным воспалением количество лей­коцитов равно 3,5-109/л. Хорошо это или плохо? Почему?

5. Каким образом можно судить о наличии лейкопоэтинов?

6. Почему перед заполнением камеры Горяева первую каплю сбрасывают?

7. Каковы отличительные признаки физиологического и патоло­гического лейкоцитоза?

8. У новорожденного количество лейкоцитов 16,2. 109/л. Гово­рит ли это о какой-нибудь патологии?

9. Изобразите графически изменение содержания лейкоцитов в крови у детей от момента рождения до 15 лет.

10. Каковы основные причины лейкопении?

Сборник «Контрольные вопросы по курсу нормальной физиологии».

Раздел «Физиология крови». Задачи № 57-104.

Занятие № 29

ТЕМА: ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ СИСТЕМА ЛЕЙКОЦИТОВ.

ИММУНИТЕТ

УЧЕБНЫЕ ЦЕЛИ ЗАНЯТИЯ:

Студент должен знать: виды лейкоцитов, их морфологические особенности, функции, количественное содержание, лейкоцитарную формулу;

роль В и Т-лимфоцитов в гуморальном и клеточном иммунитете.

Студент должен уметь: производить подсчет лейкоцитарной формулы;

анализировать особенности лейкоцитарной формулы и содержания лейкоцитов в крови.

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ИСХОДНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ:

1. На какие группы делятся лейкоциты?

2. Назовите виды гранулоцитов.

3. Назовите виды агранулоцитов.

4. Содержание нейтрофилов, базофилов, эозинофилов в крови.

5. Функции нейтрофилов.

6. Функции базофилов.

7. Функции эозинофилов.

8. Основные группы нейтрофилов.

9. Классификация агранулоцитов.

10. Содержание моноцитов и лимфоцитов в крови в норме?

11. Функции моноцитов.

12. Функции лимфоцитов.

13. Классификация лимфоцитов.

14. Что такое лейкоцитарная формула?

15. Что такое « сдвиг вправо» и «сдвиг влево» в лейкоцитарной формуле?

16. Клиническое значение лейкоцитарной формулы.

17. Что такое гуморальный и клеточный иммунитет?

18. За обеспечение гуморального иммунитета отвечают: нулевые лимфоциты,

В-лимфоциты, Т-лимфоциты.

ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ ТЕМЫ:

1. Виды лейкоцитов. Морфологические особенности отдельных видов.

2. Физиологическая роль отдельных видов лейкоцитов.

3. Понятие о лейкоцитарной формуле, ее практическое значение.

4. Моноциты, макрофаги, их роль в организме.

5. Система В - и Т-лимфоцитов, их роль в клеточном и гуморальном иммунитете.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1. Подсчет и анализ лейкоцитарной формулы (л. ф.). в окрашенных мазках крови.

Цель работы. Научиться считать лейкоцитарную формулу путем дифференцирования различных форм лейкоцитов при микроскопии сухих фиксированных и окра­шенных мазков крови.

Ход работы. С помощью объектива малого увеличения находят край мазка крови. Наносят каплю иммерсионного масла и, не меняя положения стекла, переводят иммерсионный объектив т. о., чтобы он погрузился в каплю масла. Подбира­ют с помощью микровинта соответствующее фокусное расстоя­ние. Необходимо просчитать не менее 100 лейкоцитов. Под­счет лейкоцитов осуществляют след. образом: отступив 2–3 поля зрения от края мазка, 3–5 полей зрения вдоль края маз­ка, затем 3–5 полей зрения по направлению к середине мазка под прямым углом, снова 3–5 полей зрения параллельно краю, затем под прямым углом по направлению к краю и т. д., двигая стекло по зигзагу.

Подсчитав около половины клеток на одном крае мазка меняют положение стекла и другую половину клеток считают на противоположном крае. При исследовании лейкограммы необходимо дифференцировать неразрушенные лейкоциты. В табл. №1 представлены основные морфологические особенности различных лейкоцитов.

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ ПОДГОТОВКИ:

1. Ферментативная активность разных видов лейкоцитов и ее значение для организма.

2. Роль базофилов в аллергических реакциях.

Таблица 1

Характеристика различных видов лейкоцитов здоровых людей

Вид	Нейтрофилы	Эозинофилы	Базофилы	Лимфоциты	Моноциты
юные	палочко-ядерные	сегменто-ядерные
Кол-во в %	0-1	1-5	50-70	2-4	0-1	20-35	5-10
в 1 мкл	0-85	40-400		40-400	0-85		30-800
размер клетки(мкм		10-15	10-15	12-15	8-12	8-10	15-20
ядро форма	узкое подковообразное	узкое, вытянутое, без сегментации	узкое состоит из 3-5 сегментов	несколько шире, чем у нейтрофилов из 2-3 сегментов	неопред. иногда в виде листа или сегментир.	округлое полиморное	округлое бобовидное, с вдавле-ниями
неравномерная, крупноглыбчатая	неравномерная, крупноглыбчатая	неравномерная, крупноглыбчатая	неравномерная, крупноглыбчатая	неравномерная, крупноглыбчатая	неравномерная, крупноглыбчатая	равномерная сетчатая
окраска	темно-фиолет.	темно-фиолет.	темно-фиолет.	фиолет.	фиолет.	темно-фиолет.	светло-фиолет.
Цито-плазма	розовая	розовая	розовая	бледно-розовая	бледно-розовая, нередко с размытыми участками	в виде узко-го ободка, реже широ-кая, зона - голубая	обильная бледно-голубая, сероватая
Зернистость, ее окраска, характер	обильная, мельчайшая, бледно-фиолет.	обильная, мельч., бледно-фиол.	обильная, мелкая, бледно-фиол.	обильная, занимает всю цитопл., крупная, розовая	необильная, неравномерная фиолетов.	практич. отсутств. изредка единичные азурофильные гранулы	практич. отсутствует. Не постоян-на, иногда мелкая азу-рофильная –фиолет. зернистая

ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ИТОГОВОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ