Клинико-диагностическое значение исследования антител к каталазе у больных системной красной волчанкой с использованием иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами (стр. 2 )

В первом случае анализ проводился в полистироловых планшетах Immulon 2 (Dynatech Labs, Германия), в качестве субстрата использовали 20 мкл 10% взвеси ИГАП в забуференом физиологическом растворе. Свечение гранул выявляли с помощью люминесцентного микроскопа ЛЮМАМ-Р3, снабженного фотометрической приставкой ФМЭЛ-1А с цифровым вольтметром Щ-4300 и выражали в относительных единицах флюоресценции (мВ). Положительной считали люминесценцию гранул, превышающих средние значения специфической флуоресценции контрольных препаратов на 2 стандартных отклонения.

Иммуноферментный анализ основан на использовании специфических иммуноглобулиновых препаратов, меченных ферментом, позволяющих по интенсивности окраски субстрата судить о количестве антител в сыворотке больных. Анализ проводился в полистироловых планшетах Immulon 2 (Dynatech Labs, Германия). Антитела выявляли с помощью моноклональных диагностических антител против иммуноглобулинов человека, конъюгированных со щелочной фосфатазой производства (Новосибирск, Россия). В качестве хромогена использовался раствор нитрофенилового-пара эфира фосфорной кислоты динатриевой соли (ч. д.а., Германия) в концентрации 1 мг/мл в субстратном буфере (1М диэтаноламин, 0,5 мМ MgCl2, рН=9,8).

Результаты учитывали на многоканальном микропланшетном спектрофотометре при длине волны 405 нм, полученные значения выражали в единицах оптической плотности (е. о.п.). Наличие антител считалось положительным при превышении значений оптической плотности на 2 стандартных отклонения от средних значений контрольной группы.

Определение активности каталазы сыворотки крови основывалось на способности молибдата аммония в присутствии перекиси водорода трансформироваться в окрашенный продукт, определяемый при длине волны 410 нм (, 1988).

Статистический анализ экспериментальных данных выполнялся с помощью программного пакета SPSS (SPSS for Windows, Release 12.0, SPSS Inc., Chicago, IL, США). Представление описательных статистик и выбор статистических критериев производились нами исходя из цели исследования, решаемых при этом задач и рекомендаций руководств по биостатистике.

Под наблюдением находилось 60 больных СКВ (см. табл. 1). Исследование проводилось в соответствии с принципами Хельсинкской декларации Международной медицинской ассоциации и рекомендациями по этике биомедицинских исследований (1997 г.). Диагноз СКВ верифицировался по критериям американской коллегии ревматологов 1997 года. В качестве контрольной группы служили 30 здоровых лиц – доноров станции переливания крови, прошедших обычное обследование.

Таблица 1. Основные демографические показатели больных СКВ и контрольной группы.

Показатель	Больные СКВ	Контрольная группа
n	%	n	%
Пол:
Мужчин	5	8,3	10	33,3
женщин	55	91,7	20	66,7
Возраст:
до 20 лет	13	21,7	8	26,7
21-30 лет	12	20	13	43,3
31-40 лет	11	18,3	9	30
41-50 лет	12	20	-	-
51-60 лет	6	10	-	-
старше 60 лет	6	10	-	-
Наличие инвалидности	41	68,3	0	-

Средний возраст больных СКВ составил 36,32±15,27 лет, средний возраст лиц контрольной группы – 26,0±5,56 лет. Среди больных СКВ преобладали женщины (91,7%), абсолютное большинство составляли лица трудоспособного возраста (90%), вместе с тем 41 пациент (68,3%) имел ту или иную степень стойкой утраты трудоспособности.

Активность СКВ оценивалась с помощью индексов Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index (SLEDAI) и European Consensus Lupus Activity Measure (ECLAM), а также по критериям, предложенных (1985 г.). Повреждение (необратимые изменения в состоянии здоровья) измерялось с помощью индекса Systemic Lupus International Collaborating Clinics / American College of Rheumatology (SLICC/ACR) Damage Index (DI). Для выделения вариантов течения СКВ применялись подходы, предложенные , рассматривались «острое», «подострое» и «хроническое» течение заболевания. Качество жизни, связанное со здоровьем, определялось по опроснику EQ-5D. Дескриптивные статистики исходных клинических показателей больных СКВ представлены в таблице 2.

Таблица 2. Исходные показатели больных СКВ

Показатель	M	SD	95% ДИ для М	Me	IQR
Продолжительность болезни (лет)	7,967	7,354	6,067…9,866	5,5	6,8
Возраст дебюта болезни (лет)	28,6	13,18	25,19…32,01	25,5	19
Активность: SLEDAI	8,93	5,74	7,45…10,42	8,0	10
Активность: ECLAM	5,30	2,79	4,59…6,01	5,0	5
Повреждение: SLICC/ACR DI	1,95	1,71	1,51…2,39	2,0	3
Качество жизни: ВАШ EQ-5D	46,65	17,01	42,26…51,04	45,0	30

Примечания: М – среднее значение, SD – стандартное отклонение, ДИ – доверительные интервалы, Ме – медиана, IQR – межквартильный размах

Большинство больных имели продолжительность заболевания менее 10 лет, максимальная продолжительность болезни составила 27 лет.

Показатели активности СКВ, выраженные в виде индексов SLEDAI и ECLAM, продемонстрировали небольшое число больных с неактивной фазой заболевания. Несмотря на то, что тип распределения оценок по разным шкалам не совпадал, отмечена статистически значимая корреляция при разных способах оценки активности СКВ (r=0,496; p<0,001). Анализ клинических и лабораторных данных больных с разной активностью заболевания (см. табл. 3) показывает, что изолированные лабораторные показатели не могут быть использованы как индикаторы активности СКВ, следовательно, требуется привлечение всего комплекса диагностических тестов для дифференциации активности заболевания.

Таблица 3. Сравнение показателей больных СКВ с различной
активностью болезни, M (SD)

Показатель	Активность	p
Минимальная	Умеренная	Высокая
Возраст	24,88 (9,9)	39,02(14,9)	26,75(17,6)	0,08
Продолжительность болезни	4,5 (2,619)	8,646 (7,868)	6,75 (6,035)	0,323
Возраст начала болезни	20,63 (10,967)	30,65 (12,92)	20,0 (13,76)	0,053
Количество классификацион. критериев (медиана)	4	5	6	0,023
Активность СКВ: SLEDAI	1,75 (1,282)	9,27 (4,551)	19,25 (6,182)	<0,001
Активность СКВ: ECLAM	1,63 (1,302)	5,63 (2,349)	8,75 (1,893)	<0,001
Повреждение	0,63 (0,518)	2,10 (1,77)	2,75 (1,5)	0,046
Продолжительность госпитализации	27,0 (14,223)	33,44 (22,191)	46,0 (36,341)	0,388
Число эритроцитов	3,9175 (0,6189)	3,6679 (0,5269)	2,79 (1,0113)	0,007
Гемоглобин	121,88 (20,73)	112,98(16,1)	85,0 (30,5)	0,005
Число тромбоцитов	233,98 (71,09)	227,24(75,6)	124,9(70,9)	0,043
Число лейкоцитов	7,513 (4,436)	6,219 (2,32)	6,325 (1,9)	0,448
Число лимфоцитов	1918,4 (625,4)	1542 (642,6)	1117(480)	0,112
СОЭ	15,63 (9,79)	25,45 (16,2)	23,25(11,1)	0,251
Протеинурия	0,010 (0,021)	0,150 (0,35)	0,712(0,86)	0,010
Лейкоцитов в моче	6,63 (13,53)	8,31 (9,74)	16,5 (29,0)	0,381
Эритроцитов в моче	0,38 (0,744)	2,0 (7,989)	15,5 (29,7)	0,032
Билирубин	9,13 (2,81)	10,19 (4,78)	10,7 (1,83)	0,814
Мочевина крови	5,342 (1,311)	6,464 (2,87)	11,0 (6,29)	0,025
Общий белок крови	75,97 (7,606)	71,62 (10,4)	53,65(10,3)	0,002
Креатинин крови	87,75 (13,386)	162,96 (20,9)	124,6(26,0)	0,814
Уровень антител к нативной ДНК	0,107 (0,015)	0,103 (0,024)	0,11 (0,100)	0,809
Уровень антител к кардиолипину	0,080 (0,056)	0,106 (0,038)	0,120 (0,108)	0,662
ЦИК	4,528 (1,155)	3,971(2,574)	4,3 (4,26)	0,853
IgG	10,65 (0,212)	11,85 (1,4)	12,7 (2,21)	0,417
IgM	0,800 (0,001)	1,378 (0,29)	1,25 (0,19)	0,105
IgA	2,050 (0,012)	1,850 (0,41)	2,55(0,243)	0,311

При оценке течения СКВ по критериям были получены следующие результаты: у 2 пациентов имело место острое течение СКВ, у 44 – подострое, у 14 – хроническое.