Клинико-диагностическое значение исследования антител к каталазе у больных системной красной волчанкой с использованием иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами (стр. 1 )

На правах рукописи

САЛМАН Расем

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ АНТИТЕЛ К КАТАЛАЗЕ
У БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКОЙ
С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИММОБИЛИЗИРОВАННЫХ ГРАНУЛИРОВАННЫХ ПРЕПАРАТОВ
С МАГНИТНЫМИ СВОЙСТВАМИ

14.00.39 – ревматология

А в т о р е ф е р а т

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Волгоград – 2008  

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Волгоградский государственный
медицинский университет» и ГУ НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

ЗБОРОВСКАЯ Ирина Александровна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор

доктор медицинских наук,

профессор

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет Росздрава»

Защита состоится «__» __________ 2008 г. в ___ часов на заседании
Диссертационного совета Д 208.008.02 при ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава».

Автореферат разослан «___» ___________ 2008 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.008.02

доктор медицинских наук, профессор
 

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Системная красная волчанка (СКВ) является аутоиммунным воспалительным заболеванием, имеющим различные клинические проявления и может протекать как относительно благоприятно, поражая преимущественно кожные покровы и суставы, так и фатально с быстрым развитием терминальной почечной недостаточности и тяжелых нарушений со стороны нервной системы.

СКВ является относительно редким заболеванием с распространенностью около 1 случая на 1000 населения (Lawrence RC, 2008), но эта патология имеет большое социальное и медицинское значение (Uramoto K. M., 2005). Высокая социально-экономическая значимость СКВ обусловлена преимущественным поражением лиц трудоспособного периода жизни, преобладанием женщин детородного возраста, что ведет к большим прямым и косвенным затратам на лечение (, 2001). Среди популяции всех лиц, страдающих ревматическими болезнями взрослых, пациенты с СКВ заболевают в более раннем возрасте и имеют меньшую длительность болезни до выхода на инвалидность. Больные СКВ в 4 раза чаще госпитализируются, и, по меньшей мере, в два раза чаще обращаются за амбулаторной помощью, чем проживающие на той же территории лица (Clarke A. E., 2003). Особенно тревожной тенденцией является трехкратный рост заболеваемости СКВ за последние сорок лет.

Несмотря на успехи, достигнутые в диагностике и лечении СКВ, задача своевременной постановки диагноза, назначения адекватной терапии и контроля за ее эффективностью часто бывает осложнена вариабельностью клинической картины и полиморфизмом проявлений, недостаточностью знаний об этиологии и патогенезе заболевания.

Изучение патогенеза СКВ привело к раскрытию важной роли активных форм кислорода и антиоксидантной системы в повреждении тканей при этом заболевании (,2001; , 1995, 2006). Известно, что свободнорадикальные реакции приводят к повреждению белков, липидов, нуклеиновых кислот, придавая им свойства аутоантигенов. Образование аутоантител к таким аутоантигенам структурам является ключевым звеном патогенеза СКВ и происходит задолго до развития клинических проявлений заболевания. При СКВ обнаружено накопление вторичных токсичных продуктов свободнорадикальных реакций, что указывает на недостаточной антиоксидантной системы (Ames P., 1999). Аутоантитела к ферментам, в том числе и к одному из основных внутриклеточных антиоксидантов – каталазе (Кат), могут являться причиной их функциональной недостаточности.

Представляется актуальным у больных СКВ исследовать иммунный ответ к каталазе – одному из ключевых антиоксидантных ферментов, что позволит выявить некоторые детали патогенеза данного заболевания, будет способствовать выработке усовершенствованных способов диагностики СКВ. Результаты исследования могут дать дополнительные критерии оценки активности СКВ и эффективности проводимой терапии, что, в конечном итоге, поможет своевременно установить диагноз и назначить адекватное лечение СКВ, а, значит, облегчить состояние больных и уменьшить затраты, связанные с этим страданием.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью исследования является усовершенствование диагностики, оценки активности СКВ и контроля эффективности проводимой терапии с помощью иммобилизированных гранулированных препаратов каталазы с магнитными свойствами.

Основные задачи исследования:

·  Получить иммобилизированную форму каталазы, изучить ее физико-химические свойства.

·  Адаптировать иммуноферментный метод выявления аутоантител к ферменту с использованием иммобилизированной каталазы, оценить диагностическую ценность данного метода при СКВ.

·  Изучить содержание антител к каталазе, а также активность фермента у больных СКВ в зависимости от активности, повреждения, характера течения, клинических особенностей заболевания и показателей качества жизни, связанного со здоровьем.

·  Оценить значение исследования аутоантител к каталазе и ферментативной активности каталазы для контроля эффективности терапии у больных СКВ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Впервые для иммунодиагностики СКВ были созданы и применены в иммуноферментном методе анализа иммобилизированные гранулированные антигенные препараты (ИГАП) каталазы с магнитными свойствами. Были подобраны оптимальные условия иммобилизации фермента, позволяющие сохранять его энзимные функции и антигенные свойства. Полученная иммобилизированная форма Кат отличается высокой устойчивостью и может быть использована как модель для изучения взаимодействия антиген-антитело. Установлено, что при СКВ вырабатываются аутоантитела к каталазе. Показано, что уровень аутоантител к Кат коррелируют с активностью патологического процесса и повреждением при СКВ. Выявлено, что аутоантитела к каталазе чаще выявляются у больных СКВ с высокой активностью болезни, при наличии поражения кожи, нервной системы и желудочно-кишечного тракта. Показана возможность оценки активности СКВ с использованием показателей уровня антител к Кат и ферментативной активности каталазы. Установлена способность исследованных показателей к изменению под влиянием лечения, что обеспечивает возможность оценки эффективности проводимой терапии.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ

Использование иммобилизированных гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами на основе каталазы позволит повысить качество иммунологической диагностики СКВ и улучшить выделение степени активности патологического процесса. Определение антител к каталазе и ферментативной активности каталазы может быть использовано для характеристики активности СКВ, клинических вариантов заболевания, а также как критерий эффективности лечения СКВ.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

Возможность использования выявления аутоантител к каталазе с помощью метода иммуноферментного анализа на основе иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами в качестве дополнительного теста для выделения степени активности, клинических вариантов СКВ, оценки эффективности проводимой терапии, а также для изучения биологических свойств ферментов, аутоантигенов и механизмов взаимодействия антиген-антитело.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

Методы определения антител к каталазе с помощью иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами внедрены в МУЗ «Городская клиническая больница №25» г. Волгограда и МУЗ «Городская больница №1 имени » г. Волжского.

ПУБЛИКАЦИИ И АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ

По теме диссертации опубликована 21 печатная работа, из которых 10 – в центральной и 11 – в местной печати.

Основные положения диссертации были представлены на итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых Волгоградской медицинской академии (2003 – 2007 гг.), научных конференциях ГУ НИИ КиЭР РАМН (2002, 2004, 2005, 2006, 2007, 2008 гг.), II Всероссийской Школе молодых ревматологов (Москва, 2004), ежегодных Европейских ревматологических конгрессах EULAR (Берлин, Германия, 2004; Вена, Австрия, 2005; Амстердам, Голландия, 2006), XI и XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004, 2005), V национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2007).

Результаты диссертации были апробированы на совместном заседании ученого совета ГУ НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН и кафедры госпитальной терапии ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» 17 июня 2008 года (Протокол № 4).

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 166 страницах машинописного текста и состоит из введения, части I – обзора литературы, части II – собственных исследований, состоящей из 6 глав, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и приложений. Работа иллюстрирована 22 рисунками, содержит 24 таблицы и 3 выписки из историй болезни. Библиографический указатель включает 449 источников, в том числе 38 на русском языке и 411 на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В качестве антигена использовался препарат каталазы производства НПО "РЕАХИМ" серия 186-68 с активностью 380 Ед/мг и концентрацией белка в 94,5 мг/мл. Для получения иммобилизированной формы фермента использовали раствор с концентрацией 1,4 мг/мл по белку. Иммобилизацию проводили методом эмульсионной полимеризации по с соавт. (, 2001) в потоке газообразного азота с включением магнитного материала. Полученные ИГАП на основе каталазы имели правильную сферическую форму с размером частиц от 10 до 100 мкм (контроль осуществлялся с помощью микроскопа).

Антитела к каталазе определяли иммунофлюоресцентным и иммуноферментным методами.