Особенности клинического течения и диагностики урогенитальных инфекций, обусловленнных атипичными бактериями, у женщин репродуктивного возраста (стр. 2 )

Лабораторную диагностику УГИ проводили, используя «прямые» и «непрямые» методы. Индикацию микробных антигенов в исследуемом материале (отделяемое влагалища и цервикального канала) осуществляли с помощью прямой имумунофлуоресценции (ПИФ). Мазки окрашивали специфическими моноклональными антителами, конъюгированными с флуоресцентным красителем (тест-системы фирмы Галарт «Хлами Слайд», «Уреа слайд», «Мико Слайд», Москва и др.) Результаты оценивали при люминесцентной микроскопии (микроскоп «Микрос», Австрия) С помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяли фрагменты геномов возбудителей УГИ. ПЦР проводили в режиме реального времени. Регистрацию флуоресцентного сигнала осуществляли в процессе амплификации с использованием термрциклера «Rotor-Gene 3000». С помощью программного обеспечения, прилагаемого к амплификатору, вычисляли концентрацию исходной матрицы ДНК. Реакцию амплификации выполняли с помощью тест-систем «Ампли Сенс-100- FRT Chlamydia trachomatis», «Ампли Сенс-100- Mycoplasma hominis - FRT (RG)», «Ампли Сенс-100- Ureaplasma urealiticum - FRT (RG)», «Ампли Сенс-100- Ureaplasma parvum- FRT (RG)» и др.

Серодиагностику УГИ осуществляли с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Реакцию выполняли с использованием тест-систем фирмы «МБС», Новосибирск, результаты учитывали на аппфоте «Stet Fax 2002» В сыворотках крови, содержащих специфические IgG к вирусу простого герпеса 2 типа, определяли индекс авидности IgG в соответствии с рекомендациями фирмы производителя тест-систем.

Для количественной оценки титра молликут (уреаплазм и микоплазм) использовали бактериологический метод, который проводили согласно рекомендациям (2007). Для оценки микробного пейзажа слизистой цервикального канала и влагалища использовали бактериоскопию, которую выполняли традиционным способом. Препараты окрашивали либо по Романовскому-Гимзе в течение 40 минут, либо метиленовым синим с пятиминутной экспозицией.

Ультразвуковое исследование проводили на аппарате Losing 400 (производство фирмы General Electric Co, США) по традиционной методике с использованием трансабдоминального и трансвагинального, датчиков. При этом оценивали размеры матки и яичников, величину М-эхо. Во время беременности так же оценивали фетометрические показатели, индекс амниотической жидкости, наличие взвеси в водах, толщину и зрелость плаценты плаценты и др.

Для обработки полученного материала использовали статистические методы, основанные на сравнительном анализе абсолютных значений и относительных величин. Методы вариационной статистики включали определение средней арифметической (М), среднего квадратичного отклонения, средней ошибки (m). Для определения достоверности результатов исследования использовали параметрические показатели (критерий Стьюдента – t). Достоверной разницей считали уровень значимости p < 0.05 (при вероятности различия более 95%). Обработку проводили на IBM PS с использованием таблиц «Excel», программы «Биостат».

Результаты исследования и их обсуждение

В результате целенаправленного комплексного клинико-лабораторного обследования с использованием ПЦР, ПИФ и ИФА 410 женщин, обратившихся за медицинской помощью в гинекологическое и родильное отделения, поликлиническую службу Пермской краевой клинической больницы, маркеры урогенитальных инфекций, обусловленных атипичными бактериями и вирусом простого герпеса, были выявлены у 140 (34,15%) человек. (Табл.1)

Как свидетельствуют представленные данные маркеры этих УГИ, обнаружили у 34,83% женщин с различными инфекционно – воспалительными заболеваниями гениталий. Обращает на себя внимание и высокий процент инфицированных беременных (37,77%), прежде всего с симптомами угрожающего выкидыша (56,25%), а также практически здоровых лиц (14,19%), причем у последних регистрировали в основном специфические иммуноглобулины к различным возбудителям урогенитальных инфекций.

В этой связи следует отметить, что этот довольно высокий суммарный процент инфицированных женщин (37,78%), выявленный среди обследованного контингента, складывался, прежде всего, за счет результатов ИФА, который был положительным, чаще в низких титрах у значительного количества пациенток

Таблица 1.

Показатели инфицирования обследованного контингента возбудителями различных ИПППП

Группы наблюдения	n	Положительный результат обследования на ИППП (%)
Абсолютное количество	М + m
I группа - беременные	176	70	39,77 + 4,51*
II группа - гинекологические больные	178	62	34,83 + 2,04*
III группа - практически здоровые	56	8	14,29 + 8.24*
Всего	410	140	34,15 + 1,70

Примечание: *- разница достоверна между III и I, II группами (p < 0,05)

Анализ данных литературы в отношении этиологической структуры урогенитальных инфекций свидетельствует о том, что такие микроорганизмы, как Chlamydia trachomatis, представители рода Ureaplasmae и Virus Herpes simplex, являются одними из наиболее часто встречающихся возбудителей, передающихся преимущественно половым путем ( 2001; 2004; 2006; 2007).

Аналогичные закономерности прослеживались и в наших наблюдениях. (Табл. 2) Независимо от контингента во всех группах обследованных чаще выявляли маркеры хламидий, уреаплазм и вируса простого герпеса. При этом положительные результаты на инфекции, ассоциированные с хламидиями, уреаплазмами и вирусом простого герпеса, в большем проценте случаев регистрировали беременных с угрожающим выкидышем, соответственно 21,88%, 18,75% и 8,33%.

Таблица 2.

Группы	n	Количество положительных результатов
C. trachomatis	Ureaplasma spp.	Mycoplasma spp	HSV 1,2
% М + m	% М + m	% М + m	% М + m
I группа	А	96	21,88 +6,01	18,75 +3,34	7,29 +1,31	8,33 +2,45
Б	80	1,25 +5,99	15,00 +0,69	3,75 +0,55	-
II группа	178	11,23 +0,75	14,61 +0,41	5,62 +0,47	3,37 +0.02
III группа	56	3,57 +4,36	7,14 +4,87	1,78 +1,46	1,78 +0,82
Итого	410	10,73+0,70	14,63 +0,42	5,12 +0,22	3,66 +0,12

Частота инфицирования женщин возбудителями различных ИПППП по результатам комплексного исследования (ИФА, ПЦР, ПИФ)

Примечание: IА – беременные с угрожающим выкидышем,

IБ – беременные с физиологическим течением беременности

У некоторых обследованных (22,1%) обнаруживали смешанную инфекцию, чаще ее выявляли в группе женщин с бесплодием и воспалительными заболеваниями органов малого таза, обычно это были маркеры двух инфекций. Преобладали следующие сочетания микроорганизмов: уреаплазмы + хламидии; уреаплазмы + вирус простого герпеса.

Как и можно было ожидать, высокий процент инфицированных женщин (по трем тестам – 34,83%) выявлен среди больных различными инфекционно – воспалительными заболеваниями гениталий. При этом чаще обнаруживали маркеры уреаплазменной инфекции (14,61%), герпетическую и хламидийную инфекции регистрировали у 3,37% и 11,23% соответственно. У 19,35% женщин этой группы регистрировали смешанную инфекцию. Важно подчеркнуть, что у этой группы лиц, в существенном проценте случаев (более 90%), диагноз той или иной урогенитальной инфекции подтверждали ПЦР. Как известно, выявление в исследуемом материале фрагментов генома хламидий и ВПГ безусловно свидетельствует о наличии соответствующего заболевания ( 2003; 2004).

Для подтверждения диагноза заболеваний, ассоциированных с молликутами, которые рассматриваются большинством исследователей как условно-патогенные микроорганизмы ( 2003; 2007; 2007) использовали бактериологический метод с количественной оценкой концентрации этих бактерий в исследуемом материале.

Оценивая результативность использованных диагностических тестов, следует отметить, что наибольшее число положительных результатов было получено в ИФА. (Табл. 3) Эта закономерность была характерна для результатов обследования женщин I и III групп.

Особенно высокий процент серопозитивных лиц при отрицательных результатах прямых тестов был получен в группе практически здоровых женщин, обратившихся к врачам с профилактической целью. В большинстве этих случаев выявлены слабоположительные реакции (в недиагностических титрах). Можно полагать, что, скорее всего, они носили анамнестический характер или были связаны с транзиторным инфицированием. Следует подчеркнуть, что практически во всех случаях выявленный гуморальный иммунный ответ был связан с IgG. Подобные ситуации – наличие специфических IgG к различным возбудителям, преимущественно передающихся половым путем, в том числе и у практически здоровых людей отмечен и другими исследователями ( 2001; 2006).

Таблица 3.

Группы обследованных	Лаборатоные тесты
ПЦР	ПИФ	ИФА
% М + m	% М + m	% М + m
I группа (n=176)	30,68* +1,66	7,95* +1,20	35,7* +3,52
II группа (n=178)	34,83 +3,74*	5,61* +0,02	30,34 +0.84
III группа (n=56)	10,71 +8,32*	1,78 *+1,89	14,29 +7,19
Итого (n=410)	33,18 +2,91	6,91* +0,68	34,33 +2,83

Частота положительных результатов при использовании различных диагностических тестов

Примечание: *- разница во всех группах между результатами ПЦР и ПИФ