Применение клеточных культур фибробластов в лечении атрофических рубцов кожи (экспериментально-клиническое исследование) (стр. 4 )

На микропрепаратах динамика морфологических изменений во многом сходна с рубцом после трансплантации культуры аутофибробластов. Результаты лечения путем введения аллофибробластов менее выражены, чем при введении аутофибробластов, но лучше, чем в контрольной серии без лечения. Микроскопически это проявляется восстановлением толщины эпидермиса до нормы - 37,92±3,05 мкм. Толщина дермы выше, чем в норме и составляет – 985,60±68,27 мкм (р<0,05). Общая плотность волосяных фолликулов превышает норму и равна 16,28 ± 0,78 % (р<0,05), что подтверждает сохранение активного новообразования и регенерации волосяных фолликулов с их дальнейшим созреванием и развитием. Коллагеновые волокна – зрелые, извитые, нормальной толщины, имеют упорядоченное направление и ход. Количество кровеносных сосудов, их размеры и форма идентично здоровой коже. Морфологическая структура подкожно-жировой клетчатки и адипоцитов соответствует норме. Толщина гиподермы снижена и составляет 237,87 ± 10,23 мкм (р<0,05).

Таким образом, полученные нами результаты показали, что после лечения кожных рубцов путем введения фибробластов:

1. Структура зоны рубца приближается к структуре нормальной кожи за счет активных процессов регенерации.

2. К концу эксперимента в обеих сериях опытов с введением фибробластов отмечается полное восстановление толщины эпидермиса (39,37 ± 3,36 мкм при введении аутофибробластов и 37,92 ± 3,05 мкм при введении аллофибробластов; при норме 40, 83 ± 2,35 мкм), в то время как в рубце без лечения этот показатель остается ниже нормы (30,84 ± 1,47 мкм; р<0,05).

3. В обеих опытных сериях с введением фибробластов на всех сроках наблюдается активное формирование кожных дериватов - волосяных фолликулов и сальных желез с полным восстановлением волосяного покрова. Плотность волосяных фолликулов к 102-м суткам наблюдения составляет: 22,85 ± 1,81% при введении аутофибробластов, 16,28 ± 0,78% при введении аллофибробластов, при норме 3,31 ± 0,31%, в то время как в рубце без лечения этот показатель остается ниже нормы - 1,82 ± 0,50 % (р<0,05).

4. При введении аутофибробластов все регенераторные процессы более выражены, чем при введении аллофибробластов. Это подтверждается более ранним восстановлением нормальных величин толщины эпидермиса (на 63-и сутки по сравнению со 102-ми сутками); большей плотностью (на 29%) волосяных фолликулов к концу эксперимента; более полноценным восстановлением дермы в зоне рубца с формированием сосочкового и сетчатого слоев.

Учитывая результаты экспериментального исследования, биоэтические и юридические аспекты, для проведения клинического исследования мы остановились на применении культуры аутологичных фибробластов.

Результаты клинических результатов

В качестве традиционного способа выравнивания рельефа атрофических рубцов кожи мы применили методику срединного пилинга на основе 15% ТСА (трихлоруксусной кислоты), «модифицированной».

С этой целью всем пациентам из группы сравнения (31 человек) было проведено 2 курса срединного пилинга на основе 15% ТСА, «модифицированной» с интервалом в 6 недель. В процессе проведения одного курса пилинга (4 процедуры с интервалом в 14 дней) были получены следующие результаты:

- отличный результат – 0 пациентов (0%),

- хороший результат – 0 пациентов (0%),

- удовлетворительный результат - 8 пациентов (25,8%),

- неудовлетворительный результат – 23 пациента (74,2%).

Затем был проведен еще один курс пилинга. Повторный курс повысил результаты лечения:

- отличный результат – 0 пациентов (0%)

- хороший результат – 0 пациентов (0%),

- удовлетворительный результат - 16 пациентов (51,6%),

- неудовлетворительный результат – 15 пациентов (48,4%).

Таким образом, у 16 пациентов (51,6%) из группы сравнения, после 2-х курсов пилинга был достигнут удовлетворительный результат. Рубцы приняли более сглаженный вид и несколько уплотнились. В таком виде рубцы стали доступными для косметического камуфляжа. У 48,4% пациентов рубцовые изменения остались без клинической динамики (рис.1).

Рис. 1. Сравнительные результаты эффективности различных вариантов лечения.

Пациентам основной группы (30 человек) была введена клеточная культура. В условиях асептики, без предварительной анестезии клеточный препарат вводился интрадермально, инъекционным способом. Использовалась папульная техника введения, по методике мезотерапии. Количество клеток в препарате варьировалось в зависимости от площади рубцовой поверхности, и составляло в среднем от 1 до 10 млн. Объем вводимого препарата составлял от 1 до 5 мл. Курс состоял из 3-х процедур с интервалом введения 1 месяц.

Через 6 месяцев после проведенного лечения, в основной группе были отмечены следующие результаты (рис.1):

- отличный результат – 12 пациентов (40%),

- хороший результат – 8 пациентов (26,7%),

- удовлетворительный результат - 10 пациентов (33,3%),

- неудовлетворительный результат – 0 пациентов (0%).

Таким образом, трансплантация аутофибробластов значительно повысила результаты лечения в основной группе. Количество «отличных» и «хороших» результатов увеличилось с 0% до 40% и 26,7% соответственно, количество неудовлетворительных результатов уменьшилось с 48,4% до 0% (рис. 1).

У 16-и пациентов основной группы имеющих «молодые» рубцы, клиническая эффективность проводимой терапии начинала проявляться через 1 месяц после начатого лечения и постепенно нарастала, достигая стойкого клинического эффекта к концу 3-6 месяца. При «отличном» результате это выражалось в выравнивании дна рубцов практически с уровнем здоровой кожи, при «хорошем» - в выравнивании «минус-ткани» на 50% и более. Цвет кожи, ее эластичность, тургор в области лечения рубцов был сопоставим с окружающей здоровой кожей. Этот клинический эффект наблюдался на 90-95 % пролеченной поверхности рубцов.

При сравнении результатов лечения у пациентов основной группы с «молодыми» рубцами (16 человек) с группой сравнения результаты оказались еще выше. «Отличный» результат был у 12-и пациентов (75%) этой подгруппы, «хороший» результат – у 4-х пациентов (25%), (рис.2).

Рис. 2. Сравнительные результаты эффективности различных вариантов лечения.

У пациентов со «старыми» рубцами (14 человек) положительная динамика развивалась медленно. Первые изменения были заметны лишь через 3 месяца после окончания лечения, достигая клинического эффекта к концу 6 месяца. Это выражалось в уплощении рубцов, в основном за счет эффекта «лифтинга» здоровой кожи. Эффективность проведенного лечения оценивалась через 6 месяцев после окончания лечения, при этом отмечались следующие результаты:

- отличный результат – 0 пациентов (0%).

- хороший результат – 4 пациента (28,6 %),

- удовлетворительный результат - 10 пациентов (71,4%),

- неудовлетворительный результат – 0 пациентов (0%).

Прослеживалась взаимосвязь между степенью улучшения внешнего вида рубца и сроком его существования. Чем меньше, срок существования рубца («молодой рубец», до 1 года), тем лучше достигались результаты.

По результатам ультразвукового дермосканирования после проведения курса трансплантации аутофибробластов толщина дермы и эпидермиса увеличилась по сравнению с исходным состоянием. У пациентов с «молодыми» рубцами отмечено увеличение толщины эпидермиса, усиление плотности дермы и исчезновение гипоэхогенных участков в области рубцов. У пациентов со «старыми» рубцами отмечено усиление плотности дермы в области здоровой кожи, с чем и связан «лифтинговый» эффект и опосредованное разглаживание рубцов.

Таким образом, фибробласты восполняя клеточную популяцию дермы способствовали синтезу коллагена, эластина, гликозаминогликанов, новообразованию сосудов и улучшали трофику рубцовой ткани и прилегающих участков кожи.

У пациентов группы сравнения (31 человек), результаты лечения после проведения курса пилинга в течение всего срока наблюдения не изменились. Срок наблюдения за пациентами составлял от 1 года до 1,5 лет.

В рамках данного исследования мы проводили оценку безопасности использования клеточной культуры и риск возникновения осложнений. Оценку безопасности применения проводили в день первого введения, через 14 суток, 1, 3, 6 и 12 месяцев.

Мы не отметили в процессе исследования фармацевтической (за счет неклеточных компонентов препарата), фармакодинамической (прямое действие клеток), токсической воспалительной реакции кожи, острой и отсроченной аллергических реакций.

У всех 30 пациентов (100%) на всех сроках наблюдения, не было отмечено появления побочного действия от введения клеточной культуры как местного, так и системного характера (0 баллов). Субъективно пациенты ничего не ощущали, жалоб не предъявляли. Зуд и высыпания отсутствовали. Повышение температуры не отмечалось. Следы от инъекций проходили самостоятельно в течение 1,5-2 часов после трансплантации. Данные наблюдения подтверждают безопасность применения клеточного препарата, содержащего дермальные аутофибробласты человека.

Эти сравнительные данные свидетельствуют о том, что предложенный способ лечения атрофических рубцов, позволил значительно (на 66,7%) улучшить результаты терапии по сравнению с традиционным лечением. Максимальный эффект от данного способа лечения мы наблюдали у пациентов с «молодыми» рубцами, при трансплантации культуры аутофибробластов в область «старых» рубцов мы выявили её значительно меньшую эффективность.

Выводы

1.  Разработанный способ моделирования рубца кожи приводил к формированию атрофического рубца к 28-м суткам с момента операции у всех экспериментальных животных, что подтверждалось клинически и при морфологической оценке рубцово-изменённой ткани.

2.  Введение культур ауто - и аллофибробластов в область рубца у экспериментальных животных вызывало активную регенерацию эпидермиса и дермы (на 63-и сутки по сравнению со 102-ми сутками). Регенераторные процессы при введении аутофибробластов более выражены, чем при введении аллофибробластов, что подтверждалось более ранним восстановлением толщины эпидермиса и дермы (на 63-и сутки по сравнению со 102-ми сутками), большей плотностью волосяных фолликулов (на 29%), более полноценным восстановлением дермы с формированием сосочкового и сетчатого слоев.

3.  Интрадермальная трансплантация культуры аутологичных фибробластов у пациентов атрофическими рубцами постакне позволяет значительно (на 66,7%) улучшить результаты лечения по сравнению с традиционной терапией, что было установлено на основании клинических и инструментальных исследований.

Наиболее эффективно (на 71,4%) проведение интрадермальной трансплантации культуры аутологичных фибробластов у больных с «молодыми» атрофическими рубцами со сроком существования до 1-го года.

4.  Методика внутрикожной трансплантации культуры аутофибробластов является простой при выполнении и безопасной для пациентов.

Практические рекомендации

1.  Разработанный способ местного лечения атрофических рубцов с использованияем культуры аутофибробластов может быть использован в дерматокосметологической практике.

2.  Показанием для трансплантации клеточной культуры аутологичных фибробластов является наличие атрофических рубцов постакне.

3.  Противопоказаниями для трансплантации клеточной культуры аутологичных фибробластов являются: тяжелые хронические заболевания, аутоиммунные заболевания, острые и хронические заболевания кожи, наличие злокачественного новообразования, беременность и лактация, курение и нежелание отказа от него на время лечения.

4.  Аутофибробласты вводятся с помощью множественных интрадермальных инъекций, методом мезотерапии, шприцом в сосочковый слой дермы.

5.  Культура фибробластов вводится 3-х кратно с интервалом в 1 месяц, в дозе от 1 до 10 млн. клеток (в физиологическом растворе) в зависимости от состояния рубца и окружающей его кожи, от площади рубцовой поверхности.

6.  Оптимальные результаты достигаются при лечении «молодых» рубцов, со сроком существования до 1-го года.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.  Золотовицкая заживления ран кожного покрова при использовании культуры фибробластов / , // Труды 1-го международного форума «Актуальные проблемы современной науки», Самара, 12-15 сентября 2005г. – Самара, 2005. – С. 205-207.

2.  Золотовицкая -клиническая оценка эффективности применения культуры фибробластов / , , // Клиническая анатомия и экспериментальная хирургия: Ежегодник Российской ассоциации клинических анатомов в составе ВНОАГЭ. Приложение к журналу «Морфологические ведомости». – Вып. 6-й. - 2006. – С. 68-73.

3.  Золотовицкая клеточной культуры фибробластов в терапии рубцовых дефектов кожи / // Материалы 7-го конгресса молодых ученых и специалистов, Томск, 18-19 мая 2006 г. – Томск, 2006. – С.105-107.

4.  Золотовицкая обоснование применения культуры фибробластов при рубцовых деформациях кожи / , , // Труды Поволжского форума по восстановительной медицине, курортологии и физиотерапии, Самара, 12-13 сентября 2006 г. - Самара, 2006. – С.54-56.

5.  Золотовицкая атрофических рубцов кожи с применением культуры фибробластов // Труды 2-го международного форума «Актуальные проблемы современной науки», Самара, 20-23 ноября 2006 г. - Самара, 2006. – С. 23-25.

6.  Золотовицкая применения культуры фибробластов у пациентов с атрофическими рубцами кожи // «Аспирантские чтения 2006». Труды межвузовской конференции молодых ученых. Приложение к межвузовскому журналу «Аспирантский вестник Поволжья» - Самара, 2006. – С.85-87.

7.  Золотовицкая рубцовых дефектов кожи с применением клеточных культур фибробластов / , , // Материалы 39-й итоговой научно-практической конференции научно-педагогического состава Самарского военно-медицинского института «Актуальные вопросы военной медицины» - Самара, 2006. – С. 54-55.

8.  Золотовицкая культуры фибробластов в лечении раневых дефектов и рубцовых деформаций кожи в эксперименте / , , // Клиническая анатомия и экспериментальная хирургия: Ежегодник Российской ассоциации клинических анатомов в составе ВНОАГЭ. Приложение к журналу «Морфологические ведомости». – Вып. 7-й. - 2007. – С. 17-23.

9.  Золотовицкая и клинические аспекты использования дермальных фибробластов при патологических процессах кожи / , , // Материалы 3-го Всероссийского симпозиума с международным участием «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии», Москва, ЦИТО, 25-26 апреля 2007 г. - Москва, 2007. - С.169.

10.  Золотовицкая эффективности применения различных культур фибробластов при рубцовых дефектах / , , // Материалы 40-й итоговой научно-практической конференции научно-педагогического состава Самарского военно-медицинского института «Актуальные вопросы военной медицины» - Самара, 2007. – С. 56-58.