Генетические особенности helicobacter pylori и полиморфизм генов IL1B и IL10 в прогнозе хронической гастродуоденальной патологии у детей (стр. 3 )

Сравнительный анализ выявил, что ИП результат при диагностике с помощью комбинации методов обнаружен у 116 пациентов. Это выше, чем при верификации инфекции с помощью Хелик-теста (ИП=110) и ПЦР (ИП=103). При исследовании двумя методами было выявлено меньше ЛО (2) и ЛП (4) данных в отличие от диагностики с помощью дыхательного теста (ЛО=6, ЛП=21) и ПЦР (ЛО=7, ЛП=10).

Анализ диагностической ценности комбинации Хелик-теста и ПЦР при верификации инфекции H.pylori показал более высокую Se (98,3%), Sp (93,5%), общую точность (96%), а также вероятность хеликобактериоза при положительном результате (96,6%) и низкую вероятность при отрицательном результате (6,4%) методов исследования (таблица 1). Поэтому для первичной диагностики инфекции H.pylori лучше использовать комбинацию тестов (Хелик-тест и ПЦР биоптатов слизистой оболочки желудка), что уменьшит долю ЛП и ЛО результатов.

Микроскопия мазков-отпечатков является высокоинформативным тестом, так как по его результатам можно судить не только о наличии или отсутствии H.pylori в биоптате, но и о степени обсемененности, выраженности воспалительных и дистрофических изменении, а также нарушении процессов клеточного обновления (метаплазии и атрофии).

Корреляционный анализ выявил достоверную взаимосвязь между степенью обсемененности и вариантом поражения слизистой оболочки гастродуоденальной области (r=0,31, р˂0,05), а также степенью обсемененности и выраженностью лимфоцитарной и нейтрофильной инфильтрации слизистой оболочки антрального отдела желудка (r=0,44, p<0,01). Поэтому мы склонны утверждать, что одним из факторов, определяющих интенсивность воспалительных изменений и вариант течения гастродуоденальной патологии, является степень обсемененности H.pylori слизистой оболочки желудка, что согласуется с мнением ряда авторов [, 2005, , 2007, , 2011, Azevedo M. et al., 2008].

Дальнейший диагностический поиск был связан с выявлением взаимосвязи генетических особенностей H.pylori (ген cagA) и полиморфизмов генов про - и противовоспалительного цитокинов (полиморфизм –511T/C гена IL1B и -1082G/A гена IL10) с развитием и течением хронической гастродуоденальной патологии у детей.

Анализ cagA-статуса пациентов показал, что около половины детей, вошедших в исследование, инфицированы cagA-позитивными штаммами H.pylori. При этом у больных ЯБ ДПК H.pylori сagA+ встречался значимо чаще, чем у пациентов с ХГД (73,9%±9,2 и 40,2%±5,2 соответственно). При поверхностных и гипертрофических изменениях слизистой оболочки желудка и ДПК цитотоксические штаммы H.pylori были выявлены примерно с одинаковой частотой (38,1%±6,1 и 36,8%±11,1 соответственно), при эрозивных процессах H.pylori cagA+ обнаружен в 80%±17,8 (р<0,05).

Следовательно, H.pylori сagA+ в большей степени ассоциирован с эрозивно-язвенными поражениями желудка и ДПК, а при поверхностных и гипертрофических гастродуоденитах выявляется чаще H.pylori сagA-. При инфицировании высокопатогенными штаммами H.pylori риск развития эрозивно-язвенных поражений гастродуоденальной области выше (OR=4,21, ДИ=1,51-11,73), чем при заражении H.pylori сagA-.

В литературе остается дискутабельным вопрос о тяжести и характере течения хронической гастродуоденальной патологии в зависимости от штаммов H.pylori. Одни авторы считают, что в развитии хронических заболеваний желудка и ДПК основополагающую роль имеют генетические особенности микроорганизма [ и соавт., 2007, , 2007, и соавт., 2012]. Другие, напротив, отвергают эту точку зрения, считая, что ген cagA не является определяющим в проявлении микроорганизмами своих вирулентных и патогенных свойств [ и соавт., 2001, и соавт., 2005].

В результате исследования установлено, что наличие гена cagA у H.pylori не влияло на особенности клинического течения гастродуоденальной патологии. Одинаково часто у пациентов с высокопатогенными штаммами и с H.pylori cagA- встречались болевой абдоминальный (96,2% и 96,6% соответственно) и диспепсический синдромы (94,2% и 94,8% соответственно); не было найдено отличий в характере и интенсивности жалоб у пациентов. При инфицировании высокопатогенными штаммами H.pylori риск развития более частых рецидивов ЯБ ДПК и ХГД увеличивался в 2 раза (OR=2,3, ДИ=1,4-3,9).

У всех детей, независимо от сagA-статуса, была выявлена сопутствующая патология в стадии ремиссии, но различий в частоте встречаемости заболеваний также выявлено не было.

Сопоставление результатов, полученных во время микроскопии мазков-отпечатков, обнаружило, что у пациентов с H.pylori cagA– значимо чаще встречалась слабая степень обсемененности. У детей, инфицированных высоко патогенными штаммами чаще, чем у больных с H.pylori cagA–, преобладала сильная обсемененность, что свидетельствовало о наибольшей устойчивости цитотоксических штаммов H.pylori в агрессивной кислой среде желудка.

Кроме того, у больных с H.pylori cagA+, в отличие от детей с H.pylori cagA-, чаще были диагностированы признаки кишечной метаплазии слизистой оболочки антрального отдела желудка и при инфицировании детей высокопатогенными штаммами H.pylori риск развития кишечной метаплазии возрастал в 5 раз (OR=5,2, ДИ=2–13,5).

Не было определено значимых различий в частоте выявления лимфоцитарной инфильтрации у больных сравниваемых групп. Однако обнаружена тенденция, что инфильтрация слизистой оболочки желудка лимфоцитами чаще отмечалась у пациентов инфицированных высокопатогенными штаммами H.pylori. Это свидетельствовало о том, что при инфицировании H.pylori сagA+ воспалительная реакция слизистой оболочки антрального отдела желудка более выражена, чем при H.pylori сagA- (таблица 2).

Таблица 2 - Показатели микроскопии мазков-отпечатков в зависимости от cagA-статуса Н. pylori у детей с хронической патологией гастродуоденальной области (M±σ)

Показатели	H.pylori сagA+ n=52	H.pylori сagA- n=58	р
Обсемененность слизистой оболочки Н. pylori: «+» «++» «+++»	50%±6,9 7,7%±3,7* 42,3%±6,9*	60,4%±6,4 24,1%±5,6 15,5%±4,8	р>0,05 р<0,05 р<0,05
Лимфоцитарная инфильтрация	61,5%±6,7	48,3%±6,6	p>0,05
Кишечная метаплазия	86,5%±4,7*	55,2%±6,5	р<0,05

* - достоверность разницы результатов с группой детей, инфицированных H.pylori cagA- (р˂0,05) (критерий Фишера)

При проведении корреляционного анализа были выявлены положительные взаимосвязи между cagA-статусом H.pylori и степенью обсемененности (r=0,37, р˂0,01), наличием лимфоцитарной инфильтрации (r=0,36, р˂0,01) и кишечной метаплазии слизистой оболочки антрального отдела желудка (r=0,55, р˂0,01). Таким образом, можно утверждать, что cagA-позитивные штаммы вызывают более выраженные воспалительные и дистрофические изменения с нарушением процессов клеточного обновления и развитием кишечной метаплазии гастродуоденальной области, обладая при этом значительной устойчивостью против факторов защиты слизистой оболочки желудка.

Анализ количества спонтанных про - (ИЛ-8, ИЛ-1β и ФНО-α) и противовоспалительного (ИЛ-10) интерлейкинов сыворотки крови у детей с хронической H.pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией показал, что повышение содержания в крови провоспалительных цитокинов – ИЛ-8, ИЛ-1β и ФНО-α было более значительным, чем уровня противовоспалительного интерлейкина – ИЛ-10, который остался в пределах нормального диапазона у всех пациентов. Подобные изменения иммунного статуса описаны и другими исследователями, и характеризуют ответ организма на инфекцию H. pylori [ и соавт., 2002, , 2011].

Сравнение уровня интерлейкинов у пациентов с ЯБ ДПК и ХГД достоверной разницы не выявило, что не соответствует данным литературы [ и соавт., 2013]. Это можно объяснить тем, что среди детей с ЯБ ДПК, обследованных нами, не было больных с обострением заболевания. Все дети поступили в стационар в стадии рубцевания язвенного дефекта при сохраняющемся дуодените.

При проведении корреляционного анализа были обнаружены прямые ассоциации между длительностью, интенсивностью болевого абдоминального синдрома на момент поступления и уровнями интерлейкинов сыворотки крови. Определены ассоциации между количеством цитокинов и наличием симптомов диспепсии у обследованных пациентов. Обнаружены достоверные связи между уровнями ФНО-α, ИЛ-10 и отрыжкой, изжогой, тошнотой и рвотой. То есть чем больше количество интерлейкинов вырабатывается в ответ на инфицирование H.pylori, тем более выражена клиническая картина хронической гастродуоденальной патологии, в том числе и моторных нарушений (таблица 3).

Таблица 3 - Взаимосвязь основных клинических синдромов и уровней интерлейкинов сыворотки крови у обследованных пациентов

Характеристика жалоб	Цитокины
Интенсивность болевого синдрома	ИЛ-8 (r=0,47, p˂0,01); ФНО-α (r=0,51, p˂0,01)
Длительность болевого синдрома	ИЛ-8 (r=0,35, p˂0,05); ИЛ-1β (r=0,34, p˂0,05) ФНО-α (r=0,34, p˂0,05)
Изжога	ФНО-α (r=0,4, p˂0,01); ИЛ-10 (r=0,4, p˂0,01)
Отрыжка	ФНО-α (r=0,42, p˂0,01); ИЛ-10 (r=0,43, p˂0,01)
Тошнота	ФНО-α (r=0,4, p˂0,01); ИЛ-10 (r=0,4, p˂0,01)
Рвота	ФНО-α (r=0,5, p˂0,01); ИЛ-10 (r=0,4, p˂0,01)

В настоящее время доказано, что уровень продукции интерлейкинов напрямую зависит от наличия или отсутствия структурных особенностей в ДНК человека. Проведенный анализ спонтанных уровней ИЛ-1β и ИЛ-10 сыворотки крови в зависимости от полиморфизмов -511Т/С гена IL1B и -1082G/А гена IL10 статистически значимых различий не выявил, но обнаружил тенденцию, что при наличии в генотипе мутантного аллеля количество интерлейкинов в сыворотке крови выше, чем у пациентов с нормальным генотипом, что согласуется с данными литературы [ и соавт., 2005, и соавт., 2008].