Повышение жизнеспособности Yersinia pestis ЕV в биомассе вакцины (стр. 4 )

Таблица 6

Иммуногенность вакцинных препаратов для белых мышей в феномене «переживания»

Вакцина	Кол-во животных в опыте	LD50 (ж. м.к. / Dcl)
LD50 min	LD50	LD50 max
Экспериментальная (21±1) °С	60	10960/219	27540/551	109600/2192
Контрольная (27±1) °С	60	3900/78	10950/219	38900/778

Анализ полученных данных показал, что препараты на основе штамма Y. pestis EV имеют высокий уровень защиты, при этом экспериментальные образцы (LD50 27540 ж. м.к.) обладают почти двукратным преимуществом по сравнению с контролем (10950 ж. м.к.).

Оценка цитоэнзимохимических показателей полиморфноядерных лейкоцитов в различных типах инфекционно-вакцинального процесса

Для дополнительной оценки эффективности бактерицидной защиты при иммунизации чумной вакциной и последующем заражении проведены исследования по цитоэнзимохимической активности ПМЯЛ крови белых мышей. Исследовались содержание КБ и активность МПО в различных схемах чумной инфекции и вакцинального процесса. Полученные данные сравнивали с контролем (искомые показатели у интактных животных), который составил для КБ – 1,6±0,03 и для МПО – 1,09±0,07.

Показатели бактерицидной активности ПМЯЛ у подопытных животных исследовали соответственно методике определения иммуногенности коммерческого препарата вакцины чумной живой, изложенной в действующей ФСП на препарат. Анализ полученных данных выявил, что иммунизация вызывает снижение показателей бактерицидных систем ПМЯЛ у белых мышей в процессе формирования поствакцинального иммунитета к чуме.

После заражения иммунных животных вирулентной культурой (таблица 7) происходило снижение содержания КБ во всех группах по сравнению с их значением к моменту заражения, особенно на 3-7 сут, что, по-видимому, связано с разгаром инфекционного процесса.

В динамике активности МПО у данных животных также отмечается наименьшее ее значение в период развития чумной инфекции. На 14 и 21 сут четко прослеживается разделение подопытных животных на три группы. В первой группе, где животные проиммунизированы наименьшей дозой (субиммунизирующей – 800 м. к.), регистрируется снижение уровня МПО до 0,98±0,05. Во второй, промежуточной, группе, где животные были проиммунизированы дозой 4×103 м. к., показатели МПО достигли 1,02±0,02. В третью группу объединены животные, получившие эффективные иммунизирующие дозы (2×104 и 105 м. к.), показатель МПО у которых превысил контрольный и составил 1,13±0,03.

Таблица 7

Бактерицидная активность ПМЯЛ белых мышей, иммунизированных против чумы, после заражения Y. pestis 461

Сроки исследования (сут)	Группы животных / дозы вакцины (ж. м.к.)
I / 8×102	II / 4×103	III / 2×104	IV / 105
фон	КБ	1,60±0,03	1,60±0,03	1,60±0,03	1,60±0,03
МПО	1,09±0,07	1,09±0,07	1,09±0,07	1,09±0,07
1	КБ	1,26±0,11	1,38±0,11	1,19±0,04	1,21±0,07
МПО	0,78±0,03	0,73±0,04	0,61±0,05	0,96±0,13
3	КБ	1,18±0,03	1,14±0,06	1,13±0,05	1,30±0,11
МПО	0,67±0,05	0,66±0,05	0,66±0,05	0,61±0,07
7	КБ	1,05±0,02	1,16±0,11	1,30±0,05	1,18±0,08
МПО	0,72±0,03	0,59±0,04	0,73±0,05	0,71±0,06
14	КБ	1,14±0,05	1,18±0,03	1,24±0,09	1,22±0,11
МПО	0,80±0,04	0,88±0,05	0,80±0,04	0,78±0,04
21	КБ	1,14±0,02	1,19±0,08	1,21±0,03	1,21±0,02
МПО	0,98±0,05	1,02±0,02	1,14±0,04	1,12±0,02
Кол-во животных в опыте	15	14	10	11
Кол-во выживших	5	7	7	9
% выживших (М±m)	30,2±12,2	50±13,9	70±15,3	81,8±12,2

Таким образом, после заражения иммунных к чуме белых мышей выявлена защитная функция бактерицидных факторов ПМЯЛ периферической крови, обеспечиваемая обеими системами: МПО и КБ (, 2002).

Изученный далее инфекционный процесс в модели феномена «переживания» также показал довольно четкое и стереотипное реагирование обоих изучаемых факторов бактерицидности в данной экспериментальной системе. Существенное снижение уровня КБ в динамике развития инфекционного процесса на 1, 3, 7 сут сменялось постепенным нарастанием его активности на 14 и 21 сут наблюдения, причем цифровые значения, возможно, свидетельствуют об интегрирующем воздействии вирулентного, либо вакцинного штаммов в разных фазах эксперимента. Сопряженно реагирует и МПО, закономерно повторяя динамику снижения активности на 1, 3 и, в особенности, на 7 сут наблюдения. Однако данная система снова довольно быстро восстанавливается – уже на 14 сут ее активность достигает величины на старте инфекционного воздействия, а на 21 сут поднимается до контрольных (интактных) показателей.

Таким образом, изменение показателей КБ и МПО может служить основанием для характеристики иммунной активности организма в течение инфекционного процесса, а также позволяет оценить степень реакции на введение вакцинного штамма, которая говорит о формировании иммунитета, что подтверждают и литературные источники (, , 1992; , , 1993).

ВЫВОДЫ

1.  Культивирование микробных клеток вакцинного штамма чумного микроба Y. pestis EV при температуре (21±1) °С как в бульоне, так и на агаре, обеспечило накопление гораздо более жизнеспособной их популяции, чем при (27±1) °С.

2.  Культуры штамма Y. pestis EV чумного микроба, выращенные в АКМ-Ш при температуре (21±1) °С, целесообразно использовать для приготовления вакцинного препарата в связи с высоким показателем количества живых микробных клеток и устойчивостью их к лиофильному высушиванию и последующему хранению.

3.  Разработан и включен в промышленный регламент препарат вакцины со сниженным количеством доз в ампуле (от 20 до 50), являющийся более экономичной и удобной формой для практики прививочных мероприятий в небольших коллективах.

4.  Экспериментальные образцы вакцины чумной живой, полученной при оптимальном сочетании температурных и количественных параметров вакцинной суспензии, характеризуются наилучшими качественными показателями готового препарата, такими как жизнеспособность и стабильность свойств при хранении, что сопряжено с наименьшими показателями повреждаемости.

5.  Иммуногенные свойства различных серий вакцины чумной, изученные в системе, воспроизводящей феномен «переживания» на белых мышах, соответствуют предъявляемым к вакцинам требованиям. Обоснована возможность для внедрения указанного иммунологического приема наряду с классическим методом оценки иммуногенности вакцины чумной живой на модели белых мышей.

6.  Устойчивость к чуме у белых мышей коррелирует с защитной функцией ПМЯЛ, обеспечиваемой главным образом МПО при вспомогательном участии КБ. Изменение уровня активности МПО и КБ может служить косвенным показателем степени устойчивости белых мышей к чумной инфекции.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.  Будыка, совершенствования живой чумной вакцины за счет стабилизации показателя живых микробных клеток / , , // Ликвидация и элиминация инфекционных болезней – прогресс и проблемы: Мат. международного конгр., посвящ. 80-летию Санкт-Петербургского инст. им. Пастера (Санкт-Петербург, 3-5 сентября 2003 г.). – Санкт-Петербург, 2003. – С. 128-129.

2.  Ефременко, свойства экспериментальных серий вакцины чумной живой сухой / , , // Естествознание и гуманизм: Сборник научных работ. – Томск, 2005. – Т. 2, № 1 – С. 38.

3.  Шиянова, биотехнологии производства и качества вакцины чумной живой сухой / , , , // Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении и санитарная охрана территорий государств-участников содружества независимых государств: Мат. VII Межгосударственной научно-практ. конференции государств-участников СНГ. – Оболенск, 2006. – С. 256-257.

4.  Иванова, изучение эффективности противочумных вакцин, полученных из биомасс, выращенных при (21±1) °С / , , // Фундаментальные исследования в биологии и медицине: Сборник научных трудов. – Ставрополь, 2007. – Вып. 2. – С. 186-188.

5.  Абзаева, активность полиморфноядерных лейкоцитов крови белых мышей в динамике чумной инфекции / // Современные аспекты эпидемиологического надзора за особо опасными инфекционными заболеваниями на юге России: Мат. научно-практ. конференции, 21-22 марта 2007 г. – Ставрополь, 2007. – С. 3-4.

6.  Абзаева, факторов бактерицидности полиморфноядерных лейкоцитов крови белых мышей в феномене «переживания» / , , // Современные аспекты эпидемиологического надзора за особо опасными инфекционными заболеваниями на юге России: Мат. научно-практ. конференции 21-22 марта 2007 г. – Ставрополь, 2007. – С. 4-6.

7.  Абзаева, показателей активности бактерицидных систем ПМЯЛ в периферической крови белых мышей в процессе иммунизации и заражения чумной инфекцией / , , // Современные аспекты эпидемиологического надзора за особо опасными инфекционными заболеваниями на юге России: Мат. научно-практ. конференции, 21-22 марта 2007 г. – Ставрополь, 2007. – С. 6-8.

8.  Будыка, оценка препаратов вакцины EV, приготовленных из различных по плотности и объему суспензий, в процессе трехлетнего хранения / , , // Современные аспекты эпидемиологического надзора за особо опасными инфекционными заболеваниями на юге России: Мат. научно-практ. конференции, 21-22 марта 2007 г. – Ставрополь, 2007. – С. 54-56.

9.  Абзаева, показателя живых микробных клеток в препарате чумной вакцины EV за счет оптимального сочетания физико-биологического и количественного параметров ее приготовления / , , // Биологическая безопасность в современном мире: Мат. научно-практ. конференции молодых ученых и специалистов научно-иссл. учреждений Роспотребнадзора (Оболенск, 21-22 апреля 2009 г). – Оболенск, 2009. – С. 212-214.

10.  Будыка, изучение иммуногенных свойств живой чумной вакцины ЕВ, полученной при различных температурах культивирования / , , // Перспективы сотрудничества государств-членов ШОС в противодействии угрозе инфекционных болезней: Тез. докл. междунар. научно-практ. конференции 14-15 мая, 2009г. – Новосибирск, 2009. – С. 229-232.

11.  Будыка, активность полиморфноядерных лейкоцитов крови белых мышей привитых против чумы и в различных схемах инфицирования чумной инфекцией / , , // Проблемы особо опасных инфекций. – Саратов, 2009. – № 2 (100). – С. 56-60.

12.  Будыка, анализ экспериментальных серий вакцины чумной живой по показателям жизнеспособности и термостабильности / , , // Проблемы особо опасных инфекций. – Саратов, 2009. – № 4 (102). – С. 68-71.