Корковые потенциалы усиливали (УБП–I–02) и фотографировали с экрана осциллографа (СI–18) методом суперпозиции 3 – 5 пробегов пучка с помощью фоторегистратора ФОР–2. После введения световода и установки корковых электродов регистрировали вызванный потенциал (ВП) от корковых структур. Через 10 минут регистрацию повторяли и, если ответы оказывались стабиль-ными, начинали световое воздействие на ретикулярную формацию. Регист-рацию ВП осуществляли на 1, 5 и 10-й минутах светового воздействия на ретикулярную формацию, после чего источник света выключали и повторяли регистрацию ВП на 1, 5 и 10-й минутах после отключения. По завершении эксперимента на срезах мозга контролировали положение световода в структурах мозга.
В экспериментах по изучению действия НИЛИ и ШКС на ишемизи-рованный миокард при реперфузии в постреанимационном периоде были про-веды исследования на модели изолированного сердца по Лангендорфу-Фалену (Fallen, 1967; Долгих, 1991). Изолированное сердце подключалось к перфузионной установке. Для перфузии использовался раствор Кребса-Хензелайта, рН=7,4, оксигенированный газовой смесью 95% О2:5% СО2.
В ходе опыта измерялись следующие параметры сократимости: макси-мальная скорость развития (+dP/dt) и падения (-dP/dt) давления в левом желу-дочке, частота сердечных сокращений (ЧСС), конечное диастолическое давление в левом желудочке (КДД), интервал времени до первого самостоя-тельного сокращения после начала реперфузии, а также отток перфузата из коронарных сосудов (КК, мл/мин).
Уровень процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивался по содержанию в тканях миокарда продуктов пероксидации: диеновых конъюгатов (ДК), триеновых конъюгатов (ТК), оснований Шиффа (ОШ) (Ланкин и др., 1979; Fletcher, 1983).
Состояние антиоксидантной защиты клеток определялось по активности ферментов СОД и каталазы (Aebi, 1970; Nishicimi, 1972).
Моделирование ишемии сердца осуществлялось путем окклюзии левой коронарной артерии крыс in situ. После трахеотомии и торакотомии животное подключалось к аппарату искусственной вентиляции лёгких (ИВЛ). Под левым ушком сердца накладывалась лигатура на левую ветвь венечной артерии. Окклюзия осуществлялась в течение 5 минут. В результате развивалась острая ишемия, признаки которой наблюдались на ЭКГ. Световое облучение НИЛИ или ШКС области синусного узла в опытных группах начиналось сразу после снятия лигатуры и продолжалось 10 минут.
Морфологический анализ структурных изменений клеток, обусловленных световым воздействием, проводился с помощью электронного микроскопа. Образцы ткани брали из левого желудочка в области сосочковых мышц, затем их фиксировали в 2,5% растворе глутарового альдегида на фосфатном буфере (рН=7,4) в течение 60 минут, постфиксацию проводили в 1% растворе четырехокиси осмия на том же буфере в течение 2 часов. Материал обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заключали в смесь эпон-аралдит (Уикли, 1975). После обезвоживания спиртами возрастающей концентрации ткани заливали в эпоксидные смолы – смесь аралдита и эпона 812. Ультратонкие срезы готовили на ультратоме Ultracut (Reichert-yung), контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца по методу Reynolds. Просмотр проводили на электронном микроскопе Morgagni 268D фирмы FEI.
Клиническую смерть у крыс продолжительностью 10 минут вызывали свободным кровопусканием из общей сонной артерии (Крылов, 1990). Объем изъятой крови во всех случаях превышал 30% объема циркулирующей крови. По окончании 10 мин клинической смерти начинали реанимационные мероприятия. Для быстрого кровонаполнения реинфузию крови производили внутриартериально. Одновременно с этим подключали аппарат искусственной вентиляции легких (ИВЛ). При необходимости проводили закрытый массаж сердца. Регистрацию изучаемых параметров в постреанимационный период проводили в течение 40 минут. Аутокровь первой опытной группы подвергали воздействию НИЛИ, второй опытной группы – ШКС. Облучение проводили в течение 10 минут. Контрольная серия экспериментов заключалась в инфузии аутокрови без ее облучения.
В процессе эксперимента у животных велась регистрация ЭКГ, артериального давления и реограммы конечностей. Фиксировался момент наступления первого самостоятельного вдоха во время реанимации и смертность животных, о которой судили по отсутствию самостоятельного дыхания на 40–ой минуте реанимации. Во всех экспериментах проводили исследование общего количества и осмотической резистентности эритроцитов, количества гемоглобина. Анализ исследуемых параметров проводили до кровопускания, на 1–ой и 40–ой минутах после начала реанимации.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью статистической диалоговой системы «Stadia» 4.51 (Кулаичев, 1991). Соответст-вие опытных данных нормальному распределению проверяли по критерию Колмогорова – Смирнова. Достоверность различий между значениями сравниваемых групп определяли с использованием t–критерия Стьюдента. При множественных сравнениях вводили поправку Бонферрони (Гланц, 1999).
Результаты и Обсуждение
Влияние ШКС, НИЛИ и СВЧ - излучения на микроорганизмы.
Результаты проведенных исследований выявили наличие эффекта при воздействии ШКС и НИЛИ на E. coli M-17 in vitro. Оба излучения, при 10- минутном облучении, оказали стимулирующее воздействие на рост кишечной палочки. При более длительном воздействии (40 минут) зарегистрирован различный эффект этих воздействий, а именно при облучении микроорганизмов ШКС выявлен стимулирующий эффект, а при действии НИЛИ – бактериостатический. Зеленый свет не оказал воздействия на рост кишечной палочки. СВЧ-излучение, в отличие от светового, вызвало статистически значимое бактериостатическое воздействие на рост E. coli M-17 в процессе всего периода облучения (рис. 1).
*татистический анализ полученных результатов проводили стандартными методами с использованием программы «Stadia». * |
*татистический анализ полученных результатов проводили стандартными методами с использованием программы «Stadia». * |
*татистический анализ полученных результатов проводили стандартными методами с использованием программы «Stadia». * |
*татистический анализ полученных результатов проводили стандартными методами с использованием программы «Stadia». * |
*татистический анализ полученных результатов проводили стандартными методами с использованием программы «Stadia». * |
*татистический анализ полученных результатов проводили стандартными методами с использованием программы «Stadia». * |
*ский анализ полученных результатов проводили стандартными методами с использованием программы «Stadia». * |
Рис. 1. Влияние низкоинтенсивного ЭМИ различного диапазона на рост E. coli М-17;
* - статистически достоверные различия в сравнении с контрольной серией (р < 0,05).
Установлено, что СВЧ - воздействие и нагрев вызывают сходный бактериостатический эффект на рост кишечной палочки. В течение 10 минут выживаемость (относительная доля) микроорганизмов при СВЧ облучении уменьшалась с 0,92?0,08 до 0,041?0,025, а при увеличении температуры на 2,7° С наблюдалось снижение с 0,75?0,10 до 0,025?0,010.
В отличие от СВЧ и нагрева, полученные с использованием ШС и НИЛИ результаты свидетельствуют в пользу предположения о стимулирующем фотохимическом механизме воздействия света на живые ткани, обусловленного поглощением фотонов молекулами, имеющими спектральные линии поглощения в диапазоне используемого в экспериментах ЭМИ. В частности, при поглощении красного света молекулами СОД может происходить изменение их активности. Различный эффект, а, следовательно, и различный механизм при длительном воздействии различными ЭМИ, может быть вызван изменением скорости потока электронов внутри оксидазных комплексов, что приводит к значительным изменениям в клеточной мембране. Возможно, что видимый свет, адсорбированный хромофорами в дыхательной цепи, усиливает дыхательный метаболизм возбудимой клетки и воздействует на электрогенные свойства ее мембраны. Полученные данные совпадают с данными Кару (Кару, 2003; 2005), где показано, что видимое и ближнее инфракрасное излучение поглощается в дыхательной цепи митохондрий (например, цитохром-с-оксидазой). Это приводит к усилению обмена веществ, ведущего к передаче сигнала другим частям клетки, в том числе клеточным мембранам, и, в конечном итоге, к стимулированию роста.
Изучение эффектов воздействия ШС и НИЛИ на клетки крови.
Выявлено, что в образцах крови, облучаемых НИЛИ, а так же широко-полосным светом красного и оранжевого диапазонов наблюдается повышение осмотической резистентности эритроцитов. Облучение зеленым светом не привело к значимым изменениям (Табл 2.).
Таблица 2
Влияние видимого света различного диапазона на осмотическую резистентность эритроцитов донорской крови
Исследуемый показатель | Контроль-ный образец | Широкополосный свет | НИЛИ | ||
красный | оранжевый | зеленый | |||
Максимальная граница стойкости эритроцитов (концентрация растворов, %) | 0,32+0,01 | 0,35+0,01* | 0,35+0,01* | 0,32+0,01 | 0,33+0,01 |
Скорость нарастания гемолиза (разность кон-центрации растворов, %) | 12,00+2,00 | 15,00+1,0* | 13,00+1,00 | 13,00+2,0 | 16,0+1,0* |
* - р< 0,05 по отношению к контрольному образцу.
При анализе иммунотропных эффектов изучаемых ЭМИ было установ-лено, что красный и оранжевый свет, так же, как и свет гелий-неонового лазера, стимулируют процессы фагоцитоза. В отличие от этого, зеленый свет не вызывал значимых изменений фагоцитарной активности (Табл. 3).
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 |
