Особенности иммунного и цитокинового статуса у пациентов с демодекозом кожи (стр. 2 )

3. Применение БАД Тинростим СТ, в составе комплексной терапии пациентов с различными формами демодекоза улучшает динамику клинической картины и цитокинового статуса.

Материалы и методы.

Работа выполнена на базе кафедры патофизиологии, дерматовенерологии с курсом медицинской косметологии Владивостокского государственного медицинского университета - ВГМУ (ректор - д. м.н., профессор ), МУПВ «Врачебная косметологическая лечебница» г. Владивостока (директор д. м.н. ). С 2004 по 2008 гг. проведено комплексное клинико - лабораторное исследование. Группу исследования составили 125 пациентов, с различными формами воспалительных заболеваний кожи лица, в возрасте 16-54 лет. Из них 32 составили пациенты мужского пола и 93 женского. Длительность заболевания составила от 2 месяцев до 10 лет, в среднем длительность заболевания зависела от вида дерматоза. В группы исследования включались пациенты с обострением заболевания сроком от 14 до 30 дней. Группу контроля составили 50 здоровых добровольцев, из них 30 студенты медицинского университета) и 20 здоровых клиентов станции переливания крови (главный врач ). Все пациенты обследованы по стандартной методике. Проанализированы данные анамнеза, клинические и лабораторные показатели. Диагноз устанавливали на основании жалоб, анамнеза заболевания, клинико - лабораторных данных, общеклинических и специальных методов исследования. У 100% больных диагноз подтвержден данными соскоба, с верификацией типовой принадлежности возбудителя, количественными показателями и оценкой степени активности демодекса. Для оценки степени выраженности воспаления в коже мы использовали шкалу оценки акне Американской Академии Дерматологов и шкалу оценки тяжести розацеа (2004), в нашей модификации.

Иммунологические исследования проводились на кафедре патофизиологии ГОУ ВПО ВГМУ Росздрава (зав. каф., д. м.н., проф. ). Материалом для исследования показателей клеточного иммунитета служила периферическая кровь пациентов с изучением следующих субпопуляций: CD3+, CD4+, CD8+, CD22+, CD16+, CD25+, CD95+, HLA-DR+, ФЧ и ФП, для изучения гуморальных факторов (IgМ, IgA, IgG ) исследовали сыворотку крови этих же пациентов. Определение уровня цитокинов ФНО-α, ГМ-КСФ, ИЛ-6, ИЛ-12р40 и р70, ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-13, осуществляли с помощью специфических для каждого реактивов фирмы «R&D Diagnostics Inc.» (США) путем твердофазного иммуноферментного анализа методом сендвич-варианта, предложенного Т. Mossmann (1998), согласно протокола методики. Учет результатов проводили с помощью иммуноферментного анализатора «Multiscan» (Финляндия) на базе лаборатории неинфекционного иммунитета ТИБОХ ДВО РАН (зав. лаб., доктор химических наук, проф. ).

Все экспериментальные и клинические исследования проведены с разрешения комитета по биомедицинской этике ГОУ ВПО ВГМУ Росздрава (протокол №10 дело №31 от 18. 01.2006)

Обследованных пациентов, в зависимости от исходного состояния кожи и основного ведущего клинического признака разделили на группы. С этой целью использовали патогенетическую классификацию, предложенную , (2003). Данная классификация подразделяет демодекоз на первичный и вторичный, в зависимости от исходного состояния кожи, и учитывает распределение клинических проявлений на коже лица, выделяя латеральный, центральный и периоральный тип поражения. Учитывая все эти характеристики было выделено четыре основных группы пациентов.

Первую группу составили 30 пациентов (24%) с проявлениями преимущественно в центральной Т - зоне (лоб, нос, медиальные поверхности щек и подбородок), не имеющих до этого патологических изменений на коже. Соответственно, данные лица составили группу первичного демодекоза. Возраст пациентов этой группы варьировал от 18 до 40 лет, в среднем составил 22,96± 1,04 года. В качестве терапии пациенты этой группы получали препараты местного действия - «Никс», 2% трихополовый раствор, куриозин гель (Гедеон Рихтер) наружно, курсом 21 день, с последующими косметологическими манипуляциями по уходу за кожей.

Вторую группу составили пациенты с вторичным демодекозом, на фоне угревой болезни - 37 человек (29,8%), с преимущественной локализацией процесса на коже лба, латеральной поверхности щек, шеи. В возрасте 18-40 лет, средний возраст зарегистрирован на уровне 24,05± 1,4 года. В качестве лечения данная группа обследованных получала антипаразитарную терапию «Никс», совместно с препаратами нормализующими работу сальных желез - гель Скинорен (15% азелаиновая кислота) и противовоспалительного действия «Зинерит» (эритромицин цинковый комплекс), после купирования симптомов местного воспаления, назначался курс косметологической реабилитации.

В третью группу вошли - пациенты с вторичным демодекозом, на фоне розацеа - 23 человека (18,4%), в возрасте от 35 до 54 лет, средний возраст составил 46,17 ±1,62 года. Терапию проводили противовоспалительными препаратами 2% трихополового раствора, с последующим назначением антипаразитарных средств, в виде препарата «Никс» и дальнейшим наружным применением препаратов «Розамет» (Ярдан) и «Скинорен» (Шеринг).

Четвертую группу составили пациенты с легкой и средней тяжести угревой болезнью, без признаков клещевой инвазии. Всего обследовано 35 (28%) человек, в возрасте от 18 до 37 лет, средний возраст составил 23,5+0,9 года. Пациенты этой группы получали лечение согласно общепринятых схем лечения угревой болезни - противовоспалительный препарат «Зинерит» и «Скинорен». Пациентки (женщины) из этой группы дополнительно получали терапию у гинеколога, в виде комбинированного орального контрацептива - «Жаннин» (диеногест).

В основных группах были выделены две подгруппы с назначением иммуномодулятора и без него. В качестве иммуномодулирующего препарата использовали БАД - «Тинростим - СТ». Контрольную группу составили 50 здоровых добровольцев сопоставимых по полу и возрасту.

Статистическую обработку полученных данных проводили на персональном компьютере в операционных системах Windows XP и Windows Vista с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6» и «Biostat» (версия 4.03). Количественные признаки при малом числе наблюдений проверяли на нормальность распределения с использованием W - критерия Шапиро - Уилка, проверку гипотез о равенстве дисперсий с помощью F - критерия Фишера. Выборочные параметры, приводимые в таблицах, имеют следующие обозначения: средняя арифметическая (М), ошибку относительной величины (+mp), достоверность различий между двумя средними величинами определяли по таблицам Стьюдента с учетом уровня значимости (р) и степеней свободы в зависимости от величины выбора. При ненормальном распределении количественных признаков - непараметрический критерий W - Вилкоксона и критерий χ2 Ван - дер - Вардена. Для определения направления и формы связи между признаками, измерению ее частоты и оценки статистической значимости различий полученных результатов, использовали методы корреляционного анализа: коэффициент Пирсона, ранговой корреляции Спирмена, многомерный корреляционный анализ проводился с построением плеяд по . Критическое значение уровня значимости принималось равным 5% (р< 0,05).

Результаты и обсуждение.

Оценка клеточных и гуморальных факторов иммунитета у обследованных пациентов. Анализ количества клеток и определение вида CD маркеров, позволяет характеризовать тип, силу и характер иммунного ответа. Нами исследованы показатели первого уровня: CD маркеры общей популяции лимфоцитов - Т-лимфоциты (CD3+), В-лимфоциты (CD22+), иммуноглобулины A, M, G, фагоцитарный показатель и фагоцитарное число. А так же ряд специфичных показателей второго уровня: Т-хелперы (CD4+), Т-цитотоксические (CD8+), индекс соотношения CD4+/CD8+, натуральные киллеры CD16+. Маркеры ранней (CD25+) и поздней (HLA-DR+) активации лимфоцитов, и готовности клеток к апоптозу (CD 95+).

В нашем исследовании у пациентов с первичным демодекозом и угревой болезнью выявлен дефицит в Т - клеточном звене иммунитета, характеризующийся снижением CD3+, CD4+ и CD8+ клеток, напротив, установлено повышение CD22+, CD16+, маркеров ранней и поздней активации лимфоцитов CD25+, CD95+, HLA-DR+, как абсолютных, так и относительных величин. Соотношение CD4+/CD8+ не отличалось от показателей группы контроля, в связи с пропорциональным уменьшением этих значений в группе с демодекозом и было достоверно повышено у пациентов с угревой болезнью.

У больных с вторичным демодекозом на фоне угревой болезни обнаружено снижение уровня значений CD3+, CD4+, CD8+, фагоцитарного числа; повышение CD22+, маркеров ранней и поздней активации (CD25+, CD95+, HLA-DR+), CD16+, дисгаммаглобулинемия с увеличением IgM и дефицитом IgA в острую стадию болезни. У пациентов с демодекозом на фоне розацеа выявлено снижение экспрессии маркеров (CD3+, CD4+, CD8+), показателей фагоцитоза - фагоцитарного показателя и числа, повышение CD22+, IgM в острый период и маркеров активации (CD25+, HLA-DR+). Полученные данные представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Показатели основных популяций и субпопуляций иммунокомпетентных клеток в периферической крови обследованных пациентов в группах исследования

№	Исследуемые параметры	Контрольн. группа (I) (n=50)	Группа обследованных (II) спервичным демодекозом (n=16)	Группа вторичного демодекоза (n=30)	Группа обследованных (V) с акне (n=21)
На фоне угревой болезни (III)	На фоне розацеа (IV)
1.	CD3 (%) (г/л)	69,3±0,16 1,47± 0,1	51,33±2,97**** р2-р4<0,01 1,13±0,12 * р2-р3<0,05 р2-р4<0,05	48,82±3,69 **** р3-р4<0,01 0,83±0,09 ****	35,21±2.92 **** р4-р5<0,01 0,68±0,12 ****	45,60±2,40 **** 0,89±0,09 **
2.	CD4(%) (г/л)	46,81±1,2 1,05±0,09	31,73±2,46 **** 0,68±0,07 ***	33,29±2,16 **** 0,57±0,05 ****	29,00±1,52 **** 0,56±0,07 ****	34,19±2,94 **** 0,64±0,08 ***
3.	CD8(%) (г/л)	30,2±0,6 0,65±0,08	22,00±1,60 **** 0,52±0,05	26,29±2,11 0,44±0,04 *	22,14±2,21 * 0,42±0,04 *	22,14±2,21 * 0,48±0,04 *
4.	CD4/CD8	1,65±0,1	1,6±0,19	1,45±0,13	1,43±0,11	1,73±0,18 **
5.	CD22(%) (г/л)	13,4±0,5 0,28±0,05	23,17±1,38 **** 0,46±0,03 ****	25,85±1,96 **** 0,43±0,03 *	23,71±1,53 **** 0,43±0,04 *	21,81±1,85 **** 0,42±0,04*
6.	CD16(%) (г/л)	14,0±0,4 0,3±0,03	19,00±1,02 ** 0,42±0,03 ** р2-р3<0,01	18,85±1,7 * 0,32±0,03	19,6±2,48* 0,43±0,07	20,64±1,32 **** 0,39±0,04
7.	CD25(%) (г/л)	9,00±0,2 0,15±0,06	19,77±2,08 **** р2-р4<0,05 0,44±0,03 ****	21,81±2,45 **** 0,40±0,03 ****	28,17±2,54 **** р4-р5<0,01 0,51±0,06 **** р4-р5<0,05	20,07±1,44 **** 0,34±0,02 ****
8.	CD95(%) (г/л)	17,5±0,2 0,3±0,02	19,57±0,75 ** 0,41±0,04 ** р2-р5<0,05	21,83±2,35 0,42±0,06 *	20,67±4,07 0,55±0,14	22,77±1,84 * 1,32±0,41 *
9.	HLA-DR(%) (г/л)	14,0±0,5 0,26±0,03	24,56±1,1 **** 0,50±0,03 ****	27,23±4,04 ** 0,46±0,07 *	27,90±2,07 **** 0,48±0,04 ****	23,13±1,29 **** 0,43±0,03 **

Примечание: 1) * - р<0,05, ** - р<0,01, *** - р<0,005, **** - р<0,001; 2) достоверность различий между группами обследованных больных: р2-р3-демодекоз/демодекоз на фоне угревой болезни; р2-р4-демодекоз/демодекоз на фоне розацеа; р2-р5-демодекоз/угревая болезнь; р3-р4-демодекоз на фоне угревой болезни/демодекоз на фоне розацеа; р3-р5-демодекоз на фоне угревой болезни/угревая болезнь; р4-р5-демодекоз на фоне розацеа/угревая болезнь