Материалы по токсико–гигиенической оценке биологически активной добавки к пище эпоэкстрин (стр. 5 )

ГОЛОВНОЙ МОЗГ. На срезах видны различные участки мозга, не отличающиеся по микроскопической картине у животных контрольной и опытных групп. Артерии, вены и капилляры мягкой мозговой оболочки умеренного кровенаполнения. Патологических изменений эндотелия и глии не наблюдается. Нейроны имеют типичное строение, их ядра содержат дисперсный хроматин и ядрышки.

СЕРДЦЕ. На препаратах сердца крыс из контрольной и опытных групп различимы эпикард, миокард и эндокард. Соединительная ткань в миокарде выражена незначительно. Кровенаполнение капилляров умеренное. Кардиомиоциты типичного строения содержат овальные ядра с мелкодисперсным хроматином и хорошо различимыми ядрышками. В цитоплазме кардиомиоцитов выявляется поперечная исчерченность.

ЛЕГКИЕ. Микроструктура органа крыс из опытных групп не отличается от обнаруживаемой в контроле: на срезах хорошо заметен эпителий бронхиального дерева нормального строения. Паренхима легких типична. Вокруг артериол иногда встречаются лимфоидноклеточные инфильтраты в виде муфт.

ПЕЧЕНЬ. Печень типичного дольчатого строения. Центральные вены окружены трабекулами из гепатоцитов. Желчные канальцы и щелевидные синусоиды выстланы эндотелием с купферовскими клетками и отделены от трабекул щелями Диссе. Соединительнотканные перегородки выражены слабо. Синусоиды в основном спавшиеся, иногда умеренно расширены. Сосуды портальных трактов и центральные венулы умеренного кровенаполнения. Гепатоциты имеют ядра, содержащие мелкодисперсный хроматин, выявляются ядрышки. Патологии у крыс из разных групп не обнаружено.

ПОЧКИ. Строение почек типично. Соотношение коркового и мозгового вещества нормальное. Канальцы в корковом слое имеют узкие просветы, в мозговом – относительно более широкие. Эпителий канальцев по всей их длине сохранен. Сосуды коркового и мозгового вещества умеренного кровенаполнения. Существенных различий в строении органа у контрольных и опытных крыс не обнаружено.

ЖЕЛУДОК. На срезах желудка крыс самцов опытных и контрольной групп хорошо различимы отделы желудка. Слизистая оболочка без патологических изменений. В железистой части хорошо виден интактный однослойный призматический покровный эпителий и железы, занимающие по толщине собственную пластинку слизистой оболочки. Железы типичного строения, структура и распределение обкладочных клеток не изменены. Признаки инфильтрации отсутствуют. Сосуды слизистой спавшиеся.

ПОДЖЕЛУДОЧНАЯ ЖЕЛЕЗА. Видно дольчатое строение. Сосуды слабого кровенаполнения. Эпителий ацинусов не изменен. Островки небольшие, имеют различную форму. Существенных отличий в архитектонике органа у опытных и контрольных животных не выявлено.

СЕЛЕЗЕНКА. На срезах органа видны капсула и трабекулы. Отмечается преобладание красной пульпы. Ее синусы умеренного кровенаполнения. В белой пульпе можно видеть периартериальные лимфоидные влагалища и фолликулы, иногда – реактивные центры. Отличий опыта от контроля не выявлено.

ТИМУС. У животных из контрольной и опытных групп тимус типичного дольчатого строения. Видны три типа эпителия, единичные тельца Гассаля. Имеется множество малых лимфоцитов, наблюдаются единичные лимфобласты и макрофаги.

НАДПОЧЕЧНИКИ. Надпочечники крыс из разных групп имеют типичное строение. Соотношение коркового и мозгового слоя нормальное. В корковом веществе хорошо определяется типичная для надпочечников зональность. Клетки клубочковой зоны светлые. Клетки пучковой зоны базофильные, с мелкими вакуолями. Клетки сетчатой зоны в основном эозинофильные, в них обнаруживаются более крупные вакуоли. Венозные синусы мозгового вещества имеют умеренное кровенаполнение.

ЩИТОВИДНАЯ ЖЕЛЕЗА. У всех животных различимо фолликулярное строение железы. Размеры фолликулов увеличиваются от центра к периферии. Фолликулы округлой формы. Коллоид эозинофильный. Соединительная ткань развита незначительно.

Таким образом в надпочечниках, почках, печени, поджелудочной железе, селезенке, желудке, сердце, легких, тимусе, щитовидной железе, головном мозге животных контрольной и опытных групп морфологических изменений не выявлено.

2.3. Изучение кумулятивной активности субстанции Эпотек

(подострой токсичности по тесту Лима)

При выборе доз и оценке результатов исследования хронической токсичности фармакологического вещества следует учитывать его кумулятивное действие. Поэтому для проведения хроничеких токсикологических экспериментов определяют индекс кумуляции фармакологически активного вещества (Икум.).

Индекс кумуляции – это отношение ЛД50 при однократном введении вещества к ЛД50 при кратном введении. Для этой цели используют методы, основанные на учете гибели животных при повторном введении фармакологического вещества.

Подострую токсичность по тесту Лима определяли для субстанции Эпотек. В опыте длительностью 24 дня учитывали гибель животных при ежедневном энтеральном введении вещества в начальной дозе, равной 1/10 ЛД50 (158мг/кг), нарастающей в каждые последующие 4 дня в полтора раза по сравнению с предыдущей.

При энтеральном (внутрижелудочном) введении ЛД50 субстанции составляла 1580 ± 31,7мг/кг, поэтому в первые четыре дня животным вводили исследуемую субстанцию в дозе 158 мг/кг. Полученные результаты представлены в табл. 13. Они позволяют определить как ЛД50 субстанции при кратном энтеральном введени по методу Миллера-Тейнтера, так и оценить индекс кумуляции.

Таблица 13

Результаты теста Лима (n = 10 в группе) для субстанции Эпотек.

Дни введения	1-4	5-8	9-12	13-16	17-20	21-24
Ежедневная доза г/кг	0,158	0,237	0,356	0,534	0,801	1,201
Суммарная доза по перио- дам введения*, г/кг	0,632	0,948	1,422	2,136	3,204	4,806
Кол-во погибших за каждые 4 дня введения	0	2	2	4	1	1

Примечание: * - под периодом введения подразумевается временной интервал с 1-го дня введения субстанции Эпотек по последний день введения соответствующей четырехдневки.

Таблица 14

Результаты определения средних смертельных доз эпотека

при кратном введении

Препарат	Путь введния	ЛД 16 мг/кг	ЛД50 мг/кг	ЛД84 мг/кг
Эпотек	П/о	1050,0	2000,0 ± 46,1	4000	Р<0,05

Икум = ЛД50(остр.)/ЛД50(кратн.), где

ЛД50(остр.) – средняя смертельная доза вещества при однократном введении

ЛД50(кратн.)- средняя смертельная доза вещества при кратном введении

Поскольку ЛД50(кратн.) субстанции Эпотек, рассчитанная по методу Миллера-Тейнтера, составляет 2000,0 ± 46,1мг/кг, то Икум = 0,79.

Таким образом, тестируемое вещество – субстанция Эпотек обладает кумулятивными свойствами.

На основании полученных результатов по изучению специфической активности и токсичности субстанции Эпотек, можно сделать следующие выводы:

1.  Субстанция Эпотек является не токсичным соединением и может быть использована как компонент биологически активной добавки.

2.  Субстанция Эпотек обладает более выраженным антигипоксическим эффектом, чем у препарата сравнения Гипоксен, проявляющимся на основных моделях гипоксических состояний

3.  Субстанция Эпотек обладает актопротекторной активностью на модели истощающих физических нагрузок. При введении субстанции Эпотек в дозе 32 мг/кг актопротекторный эффект проявляется более выражено, чем у препарата сравнения Гипоксен. Однако, субстанция Эпотек уступает по активности другому препарату сравнения настойке листьев женьшеня Фолигин.

4.  Материалы, полученные при исследовании влияния субстанции Эпотек при двухнедельном введении на органы и системы органов крыс, свидетельствуют о безопасности исследуемого объекта.

5.  Исследуемый образец субстанции Эпотек обладает кумулятивными свойствами. Индекс кумуляции составляет 0,79.

3. Скрининговые исследования образцов ЭпоТЕК и комбинаций на его основе

Для скрининговых исследований были предоставлены 10 образцов пищевого антиоксиданта Эпотек (образцы А-К). Скрининговые исследования проводили на модели истощающих физических нагрузок. Образцы вводили перорально в дозе 32 мг/кг. При выборе дозы руководствовались данными исследований субстанции Эпотек (см. раздел 2): животные, получавшие субстанцию в этой дозе, наиболее длительное время справляться с физической нагрузкой. В качестве препарата сравнения использовали настойку листьев женьшеня Фолигин в дозе 0,84 мл/кг. Результаты представлены в таблице 14.

Таблица 14.

Влияние образцов Эпотек на физическую выносливость крыс самцов

(пероральное введение однократно, n=10)

Группа, препарат	Доза, мг/кг	Время плавания, М ± m, мин.	Прирост времени плавания по отношению к контрольным данным, %
Крнтроль (вода очищенная)	2 мл/кг	20,03±10,05	-
Фолигин	0, 84 мл/кг	20,06±1,79	0,15
Образец А	32	25,41±5,23	26,7
Образец Б	32	19,00±,24	-5,2
Образец В	32	22,45±8,02	12,1
Образец Г	32	21,72±8,46	8,4
Образец Д	32	18,63±12,12	- 6,9
Образец Е	32	19,00±14,27	- 5,3
Образец Ж	32	7,53±2,26	- 62,5
Образец З	32	53,78±15,57	168
Образец И	32	45,57±12,31	127
Образец К	32	67,50±0,77	236

В результате проведенных исследований установлено, что представленные заказчиком образцы Эпотека существенно отличаются друг от друга по степени влияния на актопротекторную активность животных. Максимальный результат, как продолжительности плавания, так и прироста времени плавания по отношению к контрольным показателям, был получен у животных, получавших образец К. Этот образец был выбран для дальнейших исследований.