Материалы по токсико–гигиенической оценке биологически активной добавки к пище эпоэкстрин (стр. 6 )

На следующем этапе скрининговых исследований определяли наиболее эффективную комбинацию для будущей БАД. С этой целью на модели истощающих физических нагрузок исследовали комбинации Эпотека с водными экстрактами листьев подорожника большого и растений-адаптогенов, производства : корня и корневища элеутерококка колючего, левзеи, плодов лимонника китайского, корня женьшеня, аралии манджурской. Дозы водных экстрактов из растений, которые вводили экспериментальным животным, определяли путем пересчета терапевтических доз для человека с учетом того, что суточная доза БАД не должна превышать разовой лечебной дозы. Были выбраны следующие дозы водных экстрактов:

сухой экстракт женьшеня – 10 мг/кг, 1 мг/кг;

сухой экстракт элеутерококка – 12 мг/кг, 1,2 мг/кг

сухой экстракт лимонника – 13 мг/кг, 1,3 мг/кг

сухой экстракт левзеи – 13 мг/кг, 1,3 мг/кг

сухой экстракт аралии – 18 мг/кг, 1,8 мг/кг

сухой экстракт подорожника – 60 мг/кг (растения-адаптогены вводили также в дозе равной 1/10 от рассчетной – 2-ая цифра).

Скрининг проводили на модели истощающих физических нагрузок, результаты теста приведены в таблице 15. В качестве препарата сравнения использовали Фолигин в дозе 0,84 мл/кг, контрольные животные получали воду очищенную. Введение однократное.

Таблица 15

Влияние комбинаций на основе Эпотека на физическую выносливость крыс (n=10 в каждой группе)

Группа, препарат	Доза, мг/кг	Время плавания, М ± m, мин.	Прирост времени плавания по отношению к контрольным данным, %
Крнтроль (вода очищенная)	2 мл/кг	9,51±2,28	-
Фолигин	0, 84 мл/кг	10,63±1,64	11,8
Эпотек (Э)	32	12,53±1,51	31,7
Э+П	32+60	11,80±0,61	24,08
Э+П+А1	32+60+1,8	7,54±1,72	-20,8
Э+П+А2	32+60+18,0	13,33±0,83	40,2
Э+П+Л1	32+60+1,3	15,87±0,26	66,8
Э+П+Л2	32+60+13,0	11,78±1,59	23,9
Э+П+Ле1	32+60+1,3	10,43±3,11	9,7
Э+П+Ле2	32+60+13,0	8,30±1,24	-12,8
Э+П+Э1	32+60+1,2	8,90±1,59	-6,4
Э+П+Э2	32+60+12,0	22,32±8,73	134,7
Э+П+Ж1	32+60+1,0	16,05 ±2,07	68,8
Э+П+Ж2	32+60+10	2,93±1,01	141,1

Примечание: П – подорожник в дозе 60 мг/кг; А1 – аралия в дозе 1,8 мг/кг; А2 – аралия в дозе 18 мг/кг; Л1- лимонник в дозе 1,3 мг/кг; Л2 – лимонник в дозе 13 мг/кг; Ле1 – левзея в дозе 1,3 мг/кг; Ле2 – левзея в дозе 13 мг/кг; Э1- элеутерококк в дозе 1,2 мг/кг; Э2- элеутерококк в дозе 12 мг/кг; Ж1 – женьшень в дозе 1,0 мг/кг; Ж2 – женьшень в дозе 10 мг/кг.

Из анализа полученных данных следует, что наибольшую актопротекторную активность проявляют комбинации Эпотека с элеутерококком ( в дозе 12 мг/кг) и женьшенем (в дозе 10 мг/кг) – длительность плавания составляет 22,3-22,9 мин, прирост времени плавания по отношению к контролю 134,7 – 141,1 %. Продолжительность плавания животных, получавших комбинации Эпотека с лимонником (в дозе 1,5 мг/кг) и женьшенем (в дозе 1,0 мг/кг) составляет 15,9 и 16,05 мин соответственно, что также превышает показатели, полученные у контрольных животных.

С учетом полученных данных, а также характеристик отдельных растений-адаптогенов (кумулятивные свойства аралии, трудности закупки сырья элеутерококка) для дальнейших исследований были выбраны композиции с лимонником и женьшенем в низких дозах. Так как новую БАД предполагается позиционировать как БАД общеукрепляющего действия и источник янтарной кислоты, в композицию ввели янтарную кислоту в дозе 50 мг/кг.

4. Исследования безопасности и эффективности выбранных комбинаций.

4.1. Результаты оценки острой токсичности

Острую токсичность выбранных композиций оценивали на белых беспородных мышах самцах массой г. Использовали 10 групп тест-объектов, по 10 животных в каждой. Наблюдение за животными осуществляли в течение 14 дней. Исследуемые композиции вводили перорально. ЛД50 рассчитывали по методу Миллера-Тейнтера. В результате исследований получили следующие результаты: ЛД50 комбинации с лимонником составила 7075 мг/кг; ЛД50 комбинации с женьшенем - 8204 мг/кг.

В результате исследований установлено, что выбранные композиции являются нетоксичными.

Влияние выбранных комбинаций на переносимость гипоксии

Традиционно эффективность препаратов, обладающих адаптогенными свойствами, оценивается при гипоксических нагрузках в силу универсальности данного состояния при различных экстремальных воздействиях и патологических состояниях.

Рассматриваемые комбинации содержат извлечения из растений с хорошо известными антигипоксическими свойствами, что позволяет рассчитывать на столь же выраженный антигипоксический эффект у комплекса.

Кислородная недостаточность развивается в организме под действием экстремальных факторов, таких как гипоксическая гипоксия, гравитационные перегрузки, высокая температура среды, гиподинамия и др., а также при различных патологических состояниях – шок, инфаркт миокарда, ишемическая болезнь сердца, бронхиальная астма, черепно-мозговые травмы, воспалительные и травматические повреждения центральной нервной системы, сахарный диабет и др. Гипоксия осложняет или усиливает отрицательное действие экстремального фактора и течение основного патологического процесса, поскольку затуднено поддержание внутренней среды организма. Независимо от генеза гипоксия характеризуется острым или хроническим снижением количества доставляемого кислорода или снижением его утилизации тканями, органами или организмом в целом. Кроме того, фактор гипоксии имеет существенное значение в генезе утомления при тяжелой физической работе. Происходит избыточное накопление лактата и ряд взаимосвязывающихся биохимических и патофизиологических изменений, что ограничивает работоспособность организма в целом.

Противогипоксический эффект новых комбинаций исследовали на основных моделях гипоксии: острой гипобарической гипоксии (ОГБГ), острой гемической гипоксии (ОГГ) и острой гистотоксической гипоксии.

Гипобарическую гипоксию моделировали в барокамере оригинальной конструкции, позволяющей обеспечивать гипоксическую нагрузку при разряжении воздуха эквивалентном атмосфере на высоте 11,5 км, с последующим восстановлением напряжения газов во вдыхаемом воздухе. Мышей помещали в камеру и «выдерживали на высоте» в течение 20 мин. Проводили наблюдение за животными до момента их гибели, регистрируя продолжительность жизни животных. Исследуемые комбинации вводили в дозах 1/1000 и 1/100 от ЛД50. Результаты экспериментов приведены в табл. 16.

Таблица 16

Влияние комбинаций на основе Эпотека на устойчивость мышей при ОГБГ

(n=10)

№ п/п	Препарат	Доза, мг/кг	Длительность жизни	Прирост длитель-ности жизни, %	Выживае-мость, %
1.	Контроль (вода очищенная)	2 мл/кг	5,38±0,12	___	0
2.	Фолигин	0,84 мл/кг	12,1±0,85*	124	60
3.	Комбинация с лимонником	70,75	16,24±1,21*	202	60
4.	Комбинация с лимонником	7,07	19,90±0,11*	270	80
5.	Комбинация с женьшенем	82,04	16,45±1,03*	206	60
6.	Комбинация с женьшенем	8,2	19,75±1,79*	262	60

Примечание: * - отличия от контрольных показателей статистически значимы

Результаты теста свидетельствуют о том, что все исследуемые комбинации на основе Эпотека обладают противогипоксической активностью в условиях ОГБГ. Максимальный эффект отмечен у комбинации с лимонником, введенной в дозе 7,07 мг/кг. Продолжительность жизни животных составила 16,9 мин, выживаемость 80%.

ОГГ моделировали на белых беспородных мышах самцах. Нитрит натрия (300 мг/кг) вводили внутрибрюшинно, наблюдали за развитием картины отравления животных. Исследуемую БАД вводили перорально за 1 ч до инъекции нитрита натрия. Контрольная группа животных получала, воду очищенную, в качестве препарата сравнения использовали Фолигин. Регистрировали продолжительность жизни животных и выживаемость после введения смертельной дозы натрия нитрита в течение 30 мин. Результаты представлены в таблице 17.

Таблица 17

Влияние исследуемых комбинаций на переносимость мышами ОГГ

№ п/п	Препарат	Доза, мг/кг	Длительность жизни	Прирост длительности жизни, %	Выживаемость, %
1.	Контроль (нитрит натрия)	300	12,1±0,07	__	0
2.	Фолигин	0,84 мл/кг	17,8±0,16*	47,2	60
3.	Комбинация с лимонником	70,75	29,1±1,05*	140,5	80
4.	Комбинация с лимонником	7,07	30,0±0,00*	147,9	100
5.	Комбинация с женьшенем	82,04	30,0±0,00*	147,9	100
6.	Комбинация с женьшенем	8,2	28,8±1,17*	138,0	60

Антигипоксический эффект наблюдали при введении всех комбинаций, при этом при применении комбинации с лимонником в дозе 7,07 мг/кг и комбинации с женьшенем в дозе 82,04 мг/кг он был максимальным, как по продолжительности жизни, так и по выживаемости животных (100%). Выживаемость животных после введения ингибитора тканевого дыхания, составляет 60% при введении комбинаций с лимонником в дозе 70,75 мг/кг и с женьшенем в дозе 8,2 мг/кг, что сопоставимо с данными, полученными при использовании препарата сравнения. Результаты проведенных исследований показывают, что исследуемые комбинации обладают более выраженным антигипоксическим эффектом на этой модели гипоксии по сравнению с Фолигином.