Токсоплазмоз кошек (стр. 1 )

ТОКСОПЛАЗМОЗ КОШЕК

К тканевым цистообразующим эймериидным кокцидиям относятся роды: Cystoisospora, Toxoplasma, Besnoitia, Hammondia, Sarcocystis, Frenkelia, Neospora.

Кокцидийная приода и гетероксенность жизненных циклов перечисленных выше родов была установлена лишь в 70-х годах ХХ века. Оказалось, что цисты, известные под родовыми названиями Toxoplasma, Besnoitia, Sarcocystis, Frenkelia представляют собой тканевые стадии развития кокцидий, паразитирующих в кишечной стенке различных плотоядных млекопитающих, хищных птиц, рептилий. Цисты, как правило, формируются в тканях промежуточных хозяев (травоядные, всеядные, грызуны, птицы и др.) Поедание тканей с цистами этих возбудителей соответствующими дефинитивными хозяевами ведет к половому развитию паразита в кишечной стенке с последующим формированием ооцист.

В жизненных циклах этих организмов (как и у классических кокцидий родов Eimeria и Isospora) обязательна триада Sporozoa, включающая бесполое размножение- мерогонию, происходящую по типу шизогонии, эндодио - и эндополигении, половой процесс (гаметогенез) и спорогонию. Гаметогенез осуществяется по типу оогамии с раздельным развитием гамонтов. У всех у них в основном сходная ультраструктура гомологичных бесполых и половых стадий жизненного цикла и, что следует особо отметить, изоспороидная структура ооцист. Последние не имеют микропиле, остаточного тела, а спороцисты без штидевского и субштидевского телец, но с остаточным телом; механизм эксцистирования у них аналогичен. После споруляции в ооцисте цистообразующих кокцидий формируются две спороцисты с четырьмя спорозоитами в каждой.

К настоящему времени у собак и кошек выявлено более 40 видов кокцидиид, относящихся к родам Cystoisospora, Toxoplasma, Hammondia, Besnoitia, Sarcocystis и Neospora и имеющих изоспороидную структуру ооцист (до 1970 года у кошек, собак и человека было известно всего 7 видов кокцидий рода Isospora). По структуре ооцисты идентификация кокцидий возможна далеко не всегда. Например, ооцисты Toxoplasma gondii и Hammondia hammondi, выделяемые кошкой, морфологически и по размерам идентичны; ооцисты и спороцисты Sarcocystis cruzi от крупного рогатого скота, S. tenella, S. orieticanis от овцы и S. equicanis, выделяемые собакой, также идентичны морфологически и по величине. А если учесть, что собака может выделять с фекалиями более 20 видов спороцист Sarcocystis, а кошка более 10) от домашних и диких животных, то самым надежным критерием идентификации видов у Sarcocystis оказывается характер жизненного цикла, выявляемый при экспериментальном заражении, что позволяет выявить как дефинитивных, так и промежуточных хозяев, а также оценить патогенность исследуемого вида по отношению к определенному хозяину (, 1998).

Учитывая вышеизложенное, для идентификации цистообразующих кокцидий до рода и вида нужно обязательно знать особенности жизненного цикла паразита, органотканевую и хозяинную специфичность, патогенность возбудителя и характер вызываемой патологии, симптоматику, с учетом результатов иммунологической, биологической (заражение восприимчивых животных) диагностики. Также анализируют эпизоотологические данные. Определенное значение имеет локализация паразита.

В цистной фазе у Sarcocystis выражена локализация в мышечной ткани, у Besnoitia – в соединительной, у Frenkelia - в нервной, у Cystoisospora – в лимфатических узлах и различных внутренних органах, у Hammondia - в мышечной, у Toxoplasma - в нервной, мышечной и паренхиматозных органах.

Следует иметь в виду также, что одно и то же животное может быть заражено не сколькими видами цистообразующих кокцидий.

Исследование ооцист

Морфологию незрелых ооцист можно исследовать в нативном мазке и раздавленной капле из фекалий больного животного и в содержимом копрокультур. В этих случаях исследуемый материал разбавляют физиологическим раствором. Ооцисты очень устойчивы и могут сохранять жизнеспособность в течение нескольких месяцев даже при наличии в фекалиях небольшого количества формалина, это дает возможность сохранять кокцидий в условиях лаборатории, а также пересылать для исследования в 10% растворе формалина.

При слабо выраженных инвазиях хорошо использовать метод насыщения предложенный Якимовым.

Небольшое количество свежих фекалий растирают в ступке в насыщенном растворе поваренной соли. Полученную смесь фильтруют через марлю в небольшую коническую колбочку или стаканчик для копрологических исследодваний и оставляют на 30-45 минут. За это время ооцисты кокцидий, как более легкие по удельному весу, всплывают на поверхность раствора и отсюда могут перенесены гельминтологической петлей на предметное стекло для исследования под микроскопом.

Качественный анализ

Метод Фюллеборна

Исследуемый материал в качестве 5 грамм помещают в ступку заливают насыщенным раствором поваренной соли и тщательно растирают до получения равномерной суспензии, затем фильтруют через металлическое сито или марлю, которые помещают в коническую колбу с узким горлом. Сосуд с суспензией до самого верха доливают насыщенным раствором поваренной соли и отстаивают. Через 35-40 минут поверхностную пленку снимают проволочной петлей, наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом (х 150).

Состав флотационного раствора Фюллеборна:

1) поваренная соль 350-400 грамм ;

2) вода дистиллированная 1000 миллилитров.

Поваренную соль растворяют в кипящей воде, кипятят 5 минут, затем охлаждают и фильтруют через ватно-марлевый фильтр.

Метод Дарлинга

В ступке суспензируют 3-5 грамм фекалий с 15-20 мл воды. Суспензию процеживают через металлическое сито в центрифужные пробирки и центрифугируют в течение 2-5 мин при 2500 об/мин. Верхний слой сливают, к осадку добавляют жидкость Дарлинга, Осадок суспензируют и повторно центрифугируют 5 мин при1500-2000об/мин поверхностную пленку снимают проволочной петлей, наносят на предметное стекло, закрывают покровным стеклом и микроскопируют.

Жидкость Дарлинга: смешивают равные количества насыщенного раствора поваренной соли и глицерина.

Флотация в растворе сахара

Использование для флотации растворов сахаров имеет ряд преимуществ перед методами флотации с использованием гипертонических растворов поваренной соли. Растворы сахаров не оказывают разрушающего действия на оболочки ооцист, что очень важно при исследовании групп кокцидий. Кроме того, растворы сахаров не кристаллизуются при длительной микроскопии.

Исследуемый материал в количестве 3-5 грамм смешивают с 15-20 мл воды, затем суспенцию центрифугируют в течение 3-5 мин при 2500 об/мин, надосадочную жидкость сливают и к осадку доливают раствор сахара до верхней части центрифужной пробирки. Осадок ресуспензируют стеклянной палочкой в растворе сахара и повторно центрифугируют в течение 3-5 мин при 1500-2000 об/мин. Ооцисты и цисты концентрируются на поверхности пленки центрифугата, с которой их снимают петлей, наносят на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют под микроскопом.

Раствор сахара:

1) сахароза 50 грамм;

2) вода дистиллированная 320 мл;

3) фенол кристаллический 6,5 грамм.

Количественный анализ

Для определения интенсивности инвазии производят подсчет обнаруженных ооцист в 1г фекалий по следующим методам:

1. Метод Столла

В цилиндрический сосуд или колбу наливают 56 мл децинормального раствора NaOH, затем добавляют 4 мл исследуемого материала (общий объем жидкости составляет 60 мл). Содержимое тщательно перемешивают стеклянной палочкой, помещают в сосуд десять стеклянных бусинок и, плотно закрыв сосуд, встряхивают в течение минуты. Затем быстро, чтобы суспензия не отстаивалась, набирают в градуированную пипетку 0,075 мл суспензии, содержащей 0,005 миллилитра исследуемого материала, затем наносят на предметное стекло, накрывают покровным и подсчитывают под микроскопом число ооцист. Для определения числа ооцист в 1 грамме исследуемого материала, необходимо подсчитанное количество ооцист помножить на 200.

2. Метод рекомендованный комитетом ВОЗ в 1968 году.

Во флакон (10мл) с притертой пробкой наливают 4 мл воды (первая отметка по верхнему мениску), затем добавляют еще 1 мл воды (вторая отметка по верхнему мениску). Воду сливают во флакон и добавляют 10%-ный раствор формалина до первой отметки, затем вносят фекалии с таким расчетом, чтобы уровень жидкости во флаконе поднялся до второй отметки. Закрыв флакон пробкой, содержимое встряхивают до получения равномерной суспензии, после чего во флакон до верха доливают 10%-ный раствор формалина и перемешивают. Для исследования берут каплю содержимого флакона, наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и под микроскопом (х150) подсчитывают количество ооцист. Подсчет осуществляют в два - три приема(при этом каждый раз материал наносят заново). Средний арифметический показатель количественного содержания ооцист (в 5 мг) необходимо помножить на 200, что соответствует содержанию ооцист в одном грамме фекалий.

Стандартизация флотационного метода

Этиология заболевания

Токсоплазмоз (Toxoplasmosis) – природноочаговая антропозоонозная болезнь, вызываемая простейшим внутриклеточным паразитом Toxoplasma gondii (Nicolle et Manceaux, 1909). У кошек протекает обычно хронически, бессимптомно, у промежуточных хозяев - часто остро и характеризуется комплексом нервных явлений, а также патологией беременности и родов.

Возбудитель тоскоплазмоза был впервые обнаружен французскими учеными микробиологами Николем и Мансо в 1908 г. у североафриканского грызуна гунди. В дальнейшем токсоплазмы были выделены и от других видов животных, птиц, рептилий во всех частях света. В 1939 году Сэбин выявил морфологическую и иммунологическую идентичность штаммов токсоплазм, полученных от различных видов животных и человека. В России токсоплазмоз у собак впервые описан и Н. Коль-Якимовой (1911). Работы Мелло (1910) и Карини (1911) по описанию токсоплазмоза у собак послужили основанием для изучения этого заболевания у домашних животных.

Широкое и планомерное изучение токсоплазмоза в нашей стране началось после 1955 года, когда при Институте эпидемиологии и микробиологии им. Гаммалеи и при институте зоологии АН Казахской ССР были созданы специализированные лаборатории.