Все образцы ВТМ подвергались не только химическим анализам, но и определялась токсичность корма методом биотестирования с помощью инфузорий стилонихий. Для этого в суточную культуру микроорганизмов, распределенную по лункам, вводят экстракт образца. Пробы корма готовится по следующей технологии: 10 грамм измельченного корма заливается ацетоном и экстрагируется при энергичном встряхивании в течение 2-х минут. Пробирка с экстрактом помещается в штатив и отстаивается 15 минут. Экстракт в количестве 0,5 мл отбираем микродозатором и переносим в химический стакан с 40 мл дистиллированной стерильной воды. Проба экстракта вводится в лунки микроаквариума с инфузориями. Через час наблюдается реакция простейших.
Общая численность инфузорий в начале опыта – 20 шт. Рассчитать выживаемость инфузорий по формуле, приведенной в главе «Методика». Если корм токсичен, то простейшие перестают двигаться, становятся светлыми, в конечном итоге погибают. Повторность трехкратная.
Таблица 5
Определение степени токсичности ВТМ (люцерна, 1 укос)
№ пробы | Класс корма | N (выживаемость стилонихий), % | Степень токсичности |
1 | I | 85+85+90=86,6% | корм нетоксичен |
2 | II | 75+80+75 =76,6% | корм нетоксичен |
3 | II | 85+75+75=78,8% | корм нетоксичен |
4 | II | 70+70+75=71,6% | корм нетоксичен |
5 | I | 90+85+85=86,6% | корм нетоксичен |
6 | I | 85+80+80=81,6% | корм нетоксичен |
7 | I | 85+85+80=83,3% | корм нетоксичен |
8 | II | 60+75+60=65% | корм слабо токсичен |
9 | I | 85+85+85=85% | корм нетоксичен |
10 | I | 95+90+85=90% | корм нетоксичен |
11 | I | 85+85+85=85% | корм нетоксичен |
12 | I | 95+80+80=85% | корм нетоксичен |
13 | I | 85+75+90=83,3% | корм нетоксичен |
Среднее значение | 81,4% |
Таблица 6
Определение степени токсичности ВТМ (люцерна, 2 укос)
№ пробы | Класс корма | N (выживаемость стилонихий), % | Степень токсичности |
1 | I | 85+80+90=85% | корм нетоксичен |
2 | II | 75+75+75 =75% | корм нетоксичен |
3 | II | 80+70+75=75% | корм нетоксичен |
4 | II | 70+70+70=70% | корм нетоксичен |
5 | I | 85+80+85=83,3% | корм нетоксичен |
6 | I | 80+80+80=80% | корм нетоксичен |
7 | I | 75+85+80=80% | корм нетоксичен |
8 | II | 65+65+60=63,3% | корм слабо токсичен |
9 | I | 85+80+80=81,6% | корм нетоксичен |
10 | I | 90+90+85=91,6% | корм нетоксичен |
11 | I | 85+75+80=80% | корм нетоксичен |
12 | I | 90+80+80=83,3% | корм нетоксичен |
13 | I | 85+75+85=81,6% | корм нетоксичен |
Среднее значение | 79,2% |
Считается, что при 70% - 100% выживаемости стилонихий корм будет нетоксичный. Во всех пробах, кроме пробы №8, ВТМ была нетоксична и процент выживаемости колебался от 71,6% (проба №4) до 90% (проба 10). В пробе №8 процент выживаемости составил 65%, этот образец был отнесен к категории слабо токсичных кормов.
Заключение
Данная работа посвящена определению качества витаминно-травяной муки (ВТМ), изготовленной из люцерны посевной (проба 1) и люцерны посевной +козлятник восточный (проба 2). Мы считаем, что это актуально, так как от качества кормов зависит качество потребляемого нами мяса и яиц. Качество ВТМ оценивалось по количеству в ней каротина, протеина и клетчатки. Количество каротина определяли фотометрированием экстракта ВТМ. При определении количества протеина использовали титрометрический метод определения азота по Кьельдалю. В основе определения количества клетчатки используется гидролиз и фильтрование.
Токсичность и безопасность ВТМ определяли биотестированием на стилонихиях (инфузориях).
Для определения количества каротина, протеина и клетчатки в ВТМ важен каждый этап изготовления муки. Несоблюдение условий выращивания растений, технологии изготовления хранения кормов, на любом этапе может негативно сказаться на качестве муки и на содержании в ней указанных веществ. Поэтому мы проследили весь путь ВТМ: от поля до поступления в кормоцех.
В ходе исследования были получены следующие результаты:
При определении качества ВТМ (люцерна, 1 укос) по содержанию каротина, было отмечено, что в девяти пробах из тринадцати качество ВТМ соответствовало первому классу (пробы № 1,5,6,7,9,10,11,12,13), содержание каротина колебалось от 201 мг/кг до 268 мг/кг.2. Пробам № 2,3,4,8 был присвоен второй класс качества. В данных пробах содержание каротина составляло от 178 мг/кг до 189 мг/кг. В среднем в одном кг ВТМ содержится 211 мг каротина.
3. По содержанию протеина все пробы соответствовали первому классу (пробы № 5, 10, 11, 12), второму классу (пробы № 1, 2, 3, 4,6,7,9,13), третьему классу (проба №8). Средние значения данного показа,6%.
4. По содержанию клетчатки все образцы соответствуют первому классу качества: минимальное количество клетчатки 15,09% (проба №8), максимальное – 21,93% (проба №3). Среднее значение показателя – 19,6 %.
5. Все пробы люцерны посевной второго укоса (август) отличались от проб ВТМ, изготовленной во время первого укоса (июнь). Наблюдалось уменьшение количества каротина и протеина, увеличение количества клетчатки, что свидетельствует о снижении энергетической ценности и качества ВТМ.
Все пробы второго укоса были отнесены к III классу.
6. Более высокопротеиновой мукой оказалась ВТМ из смеси трав люцерны посевной +козлятник. При добавлении в ВТМ козлятника восточного увеличилось количество каротина до 222,5 мг/кг. Всем образцам этой пробы был присвоен первый класс качества.
7. Во всех пробах ВТМ (люцерна, 1укос), кроме пробы №8, мука была нетоксична, и процент выживаемости стилонихий колебался от 71,6% (проба №4) до 90% (проба 10). В пробе №8 процент выживаемости инфузорий составил 65%, этот образец был отнесен к категории слабо токсичных кормов.
8. Таким образом, витаминно-травяная мука, изготовленная из люцерны посевной и люцерны посевной +козлятник восточный, по количеству каротина, протеина, клетчатки, по степени токсичности соответствует стандартам ГОСТа и характеризуется высокими показателями качества.
Качество корма, его энергоемкость и питательность уменьшаются от числа скашиваний, увеличиваются при добавлении козлятника восточного. Не обнаружена взаимосвязь между классом корма и токсичностью. Исследуемые образцы 1,2,3 классов качества нетоксичны.
Список литературы
1. , Фархутдинов азота в организме кур-несушек на рационах с витаминно-травяной мукой из амаранта //XVII Всероссийский съезд физиологов, Ростов-на-Дону, 1998. - С. 506. .
2. , Физиологическое состояние и продуктивность кур яичного направления при скармливании им витаминно-травяной муки из амаранта, Автореферат диссертации, 2000
3. Журавлев по зоотехническому анализу кормов.- М: Сельхоиздат, 1963.-295 с
4. , Ионов анализа кормов и продуктов тицеводства: Метод. Рекомендации.-Харьков, 1989.-95 с.
5. Скурихин анализа витаминов А, Е,Д и каротина в кормах, биологических объектах и продуктах животноводства. Справочное издание.- М.: Химия, 1996.-96 с
6. Межгосударственный стандарт «Корма. Методы определения каротина» ГОСТ 13496.17-95, Издание официальное МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ, 2010
7. Государственный стандарт «Комбикорма. Комбикормовое сырье. Методы определения влаги. ГОСТ 13496.3-92 (ИСО 6496 – 83)», Комитет стандартизации т метеорологии, Москва, 2010
8. http://www. /n/fiziologicheskoe-sostoyanie-i-produktivnost-kur-yaichnogo-napravleniya-pri-skarmlivanii-im-vitaminno-travyanoy-muki-iz-am
9 http://www. /n/fiziologicheskoe-sostoyanie-i-produktivnost-kur-yaichnogo-napravleniya-pri-skarmlivanii-im-vitaminno-travyanoy-muki-iz-am#ixzz2gNG6ZKC1
10. http://www. big-fermer. ru/zagotovka-i-proizvodstvo-travyanoi-muki
11. http://www. grandp. spb. ru/index1.php? m=6&id1=21
Приложение 1
Фотоматериалы, демонстрирующие этапы проведения исследований
(фото автора Каменских Елизаветы, 2015)
Фото 1. Люцерна кормовая |
Фото 2. Козлятник восточный |
Фото 3. Измельченные растения поступают в сушильные агрегаты
Фото 5. Работа на лабораторных весах |
Фото 4. Конвейер по производству ВТМ
Фото 6. ВТМ в гранулированном и измельченном виде |
Фото 7. Мельница для перемалывания ВТМ и зерна |
Фото 8. Подготовка реактивов к проведению |
ВТМ, полученный с помощью бензина |
Фото 10. Перенос раствора в кюветы фотоколориметра для определения оптической плотности раствора |
Фото 11. Испытание пробы на Фотоколориметре |
Фото 12. Приготовление минерализата для определения количества протеина |
Фото 13. Отгонка аммиака |
Фото 14. Серная кислота с индикатором (отгонка) |
Фото 15. Автор работы в процессе отгонки и определения количества протеина |
Фото 16. Смена окраски серной кислоты-свидетельство высокого содержания протеина |
Фото 9. Экстракт каротина
Фото 17. Мельница и сито, используемые для определения клетчатки |
Фото 18. Навеска в конической колбе |
Фото 19. Реагирующая смесь на клетчатку |
Фото 20. Процесс гидролиза клетчатки |
Фото 21. Фильтрация через бумажный фильтр |
Фото 22. Промывка клетчатки горячей водой. |
Фото 23. Сушильный шкаф, используемый для определения клетчатки |
Фото 24. Лабораторные весы для взвешивания навесок |
Фото 26. Микроаквариумы для стилонихий |
Фото 27. Определение токсичности ВТМ с помощью стилонихий |
Фото 28. Выращивание стилонихий в чашечках Петри |
Фото 29. Культура стилонихий под микроскопом |
Фото 30. Спрессованные отходы макаронных изделий |
Фото 31. Шрот подсолнуха |
Фото 32. Мясо - костная мука
|
Фото 33. «Мешанка» - смесь зерновых культур |
Приложение 2
Характеристика тест - объекта
СТИЛОНИХИИ (Stylonychia), род брюхоресничных инфузорий. Длина 50-300 мкм. В ядерном аппарате — 2 макронуклеуса, соединённые перемычкой, и несколько микронуклеусов. Свыше 5 видов. Преимущественно пресноводные формы. Питаются мелкими простейшими. На дне пресных водоёмов, на водной растительности обычна S. mytilus, способнаяне только ползать и «бегать» по субстрату (с помощью крупных брюшных цирр, но и делать резкие скачки (спомощью трёх мощных хвостовых цирр), которые в обычном ползании, участия не принимают. Объект цитологических и генетических исследований.
Использование стилонихий как биоиндикационных тестов на токсичность кормов стало возможным благодаря отсутствию у них избирательная пищевая способность. Они поглощают все присутствующие в воде мелкодисперсные частицы, в том числе и токсичные. Попадая внутрь организма, токсины при достижении действующей дозы могут вызывать обездвиживание инфузорий и их гибель (лизис).
Лизис стилонихии
Стилонихия (Stylonychia mytilus): 1 — мембранеллы адоральной зоны; 2— 5 — разные группы цирр; 6 —боковые ряды цирр; 7 — перистом; 8 — ундулирующая мембрана; 9 — макронуклеус; 10 — микронуклеус.
Приложение 3
Калибровочный график для определения количества каротина по оптической плотности вытяжки
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 |
