Обоснование возможности использования производных хитозана для повышения иммуногенности гриппозных и полиомиелитных вакцин (стр. 5 )

Рис.6. Иммунофенотип лимфоцитов селезенок мышей при и/н введении гриппозной холодоадаптированной вакцины в комбинации с производными хитозана.

И/н введение мышам ХА ЖГВ сопровождалось активацией NK, гдT клеток на протяжении всего периода наблюдения и повышением (p<0,05) численности клеток, экспрессирующих СD71 (1 и 7 сут) и молекулы MHC II (I-Ak) (7 сут) после второго введения. Однако и/н иммунизация мышей ХА ЖГВ приводила к снижению численности Т-лимфоцитов с маркерами CD3 (в 1,74-1,79 раза), СD8 (2,2-1,5 раза) уже через 7 суток, СD4 (в 1,9-2,1 раза на протяжении всего периода наблюдения) и В1 клеток (через 7 и 1 сут. II иммунизации). Выявленное  супрессивное действие ЖГВ нивелировалось с помощью производных хитозана, что свидетельствует об адъвантной и иммунокорригирующей активности этих соединений.

Иммунофенотип лимфоцитов мышей при парентеральной иммунизации инактивированной полиомиелитной вакциной в комбинации с производными хитозана

Было изучено также влияние производных хитозана в составе полиомиелитных вакцин на иммунофенотип лимфоцитов селезенок мышей. Инактивированный полиовирус 1 типа оказывал несущественное влияние на клеточное звено иммунитета мышей через 7 суток после двукратной иммунизации (рис.7). При комбинированном введении инактивированного полиовируса совместно с ГХ наблюдалось значительное увеличение субпопуляций MHC II, CD3/NK (NKT), СD25, CD4/CD25/Foxp3 (T-reg), гдТ и CD5 - экспрессирующих клеток (p<0,05).

Рис. 7. Субпопуляционная структура лимфоцитов мышей, иммунизированных инактивированным полиовирусом или инактивированной вакциной Иммовакс-Полио в комбинации с препаратами хитозана (7 сутки после II иммунизации). * - P<0,05 по сравнению с контролем.

Парентеральное введение полиовируса в комбинации с МЧ СХ по сравнению с одним полиовирусом значительно повышало численность CD3, CD8, MHC II, CD19, гдT, NK и T-reg клеток (p<0,05). 

Иммунизация инактивированной полиомиелитной вакциной Иммовакс Полио приводила к умеренному снижению численности CD3+ T лимфоцитов, CD8+ CTL и СD19+ B лимфоцитов (p<0,05), что свидетельствует о супрессирующем влиянии инактивированной полиовакцины на иммунную систему в исследованные  сроки. Введение в состав Иммовакс-Полио ГХ или МЧ СХ приводило к увеличению количества СD3, CD8, NK, CD3/NK, CD4/CD25/Foxp3 и гдT - экспрессирующих клеток (p<0,05), что может свидетельствовать об иммунокорригирующем и адъювантных свойствах хитозана.

ВЫВОДЫ 

На модели инактивированных гриппозных вакцин установлена высокая адъювантная активность производных хитозана: глютамата хитозония (ММ 200 kDa)  и микро/наночастиц сульфата хитозония. Включение производных хитозана в состав инактивированных гриппозных и полиомиелитных вакцин мобилизует различные звенья врожденного иммунитета и, в том числе, активирует эндосомальные рецепторы дендритных клеток (TLRs 3,7,8,9), приводя к поляризации иммунного ответа по Th1- типу.  На модели ХА штамма - донора аттенуации А/Краснодар/101/35/59 (Н2N2) показана принципиальная возможность повышения иммуногенности и защитной эффективности живых гриппозных вакцин (ЖГВ) при включении в состав вакцины производных хитозана  в качестве адъювантов. При парентеральной  иммунизации мышей гриппозными и полиомиелитными вакцинами в комбинации с производными хитозана обнаружены общие закономерности в формировании цитокинового профиля: повышение  уровня

IL-12 и IFN-г, а также снижение TNF-б в сыворотке крови и культуре спленоцитов мышей. 

Иммунизация живыми и инактивированными вирусными вакцинами в сочетании с производными хитозана сопровождается иммунокорригирующим действием, что выражается в увеличении количества Т и В лимфоцитов, NK клеток, повышении уровня провоспалительных(IL-1в, IL-6) и регуляторных (IL-17, IL-12, IFN-г) цитокинов, а также снижении TNF-б и TGF-в в крови иммунизированных мышей. Данная активность устраняет последствия иммуносупрессии, индуцированной вирусными вакцинами, и нейтрализует гиперактивацию иммунной системы.  При парентеральном введении инактивированной гриппозной вакцины с производными хитозана выявлено повышение численности СD3, CD4, CD5, CD8, MHCII, CD3/NK, гдT, CD4/CD25/Foxp3 (T-reg) - экспрессирующих эффекторов, которые в наибольшей степени были выражены на 7 сутки второй иммунизации. Введение препаратов инактивированного полиовируса в сочетании с глютаматом хитозония повышает численность клеток с маркерами СD3, CD8, MHCII, CD19, гдT, NK и T-reg. При мукозальной иммунизация живой гриппозной вакциной в комбинации с производными хитозана происходила активация NK, гдT СD4, СD71, В1-лимфоцитов (CD5) и увеличивалась продукция IgG  и sIgA в респираторном тракте мышей.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

, ,  , , Зверев хитозана на цитокиновый статус мышей при иммунизации вакциной Ваксигрип. Цитокины и воспаление. 2010, №3. С 28-32. , , Годовалов влияния хитозана на продукцию некоторых цитокинов у мышей. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2010,  №10, С.62-63. , , Годовалов характеристика действия различных форм препарата хитозан на уровень цитокинов у мышей        Материалы YII Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность». 2010. С.144-145. , , Кривцов иммунного ответа мышей, иммунизированных интраназально живой гриппозной холодоадаптированной вакциной комбинации с производными хитозана в качестве адъювантов. Российский иммунологический журнал, 2011, Т.5(14), № 3-4, с.233-243. , , Ахматова и функциональная активность лейкоцитов мышей при иммунизации вакциной ваксигрип в комбинации с хитозаном. Медицинская иммунология. – Т.13, №4-5. С.328-329. , , Переверзев интраназального метода введения антигенов условно патогенных бактерий на иммунофенотип и функциональную активность клеток лимфоидных органов. Медицинская иммунология. 2011. Т.13, №4-5. С.344. , , Русскова концентрации цитокинов в периферической крови мышей при введении различных форм препарата хитозан. Медицинская иммунология.2011. Т.13, №4-5. С.516. , , Ахматов иммунофенотипа лимфоцитов мышей, иммунизированных интраназально живой гриппозной вакциной в комбинации с производными хитозана в качестве адъювантов.        Материалы 18-го съезда  оториноларинго-логов России,  С-Пб, 2011, Т.1, С.80-83. , , . Сравнительное изучение адъювантных свойств препаратов хитозана при парентеральной ммунизации инактивированной гриппозной вакциной. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2011. № 3 (58) с.42‒52. , , Зверев эндоплазматических TLRs в дендритных клетках под воздействием инактивированных и живых вирусных вакцин в сочетании с хитозаном. Российский иммунологический журнал. 2012, Т.6(15), № 2, с.124-131. , , Ахматов производных хитозана на дифференцировку и функциональную активность дендритных клеток мышей. 2011. Иммунология. №32, с.292-296. , , . Факторы, влияющие на адъювантные свойства производных хитозана при парентеральном введении инактивированных гриппозных вакцин. Эпидемиология и вакцинопрофилактика.2012. №4(65), с.80-86. Akhmatova N. K., Lebedinskaya O. V., Lebedinskaya E. A., Pereverzev A. D., Akhmatov E. A., Ilyinikh E. A. The immunophenotype of the mononuclear lymphocytes and the morphology of the lymphoid organs in mice immunized with inactive influenza vaccine combined with chitosane-derived compounds. X Congress of the Latin-American Immunology Association – ALA, May 29 – June 2, 2012, Lima, Peru, P. 321-322.