171929 Методы анализа необходимые для проверки состава косметической продукции (V) (стр. 5 )

-        диацетата, дигидрохлорида и диглюконата хлоргексидина в косметических продуктах.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Концентрации гексамидина, дибромгексамидина, дибромпропамидина и хлоргексидина определяется с помощью этого метода и выражается в % массы (m / m).

3. ПРИНЦИП

Идентификация и определение осуществляются с помощью обратной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с УФ-детектированием. Гексамидин, дибромгексамидин, дибромпропамидин и хлоргексидин идентифицируются по их времени удерживания на хроматографической колонке.

4. РЕАГЕНТЫ

Все реагенты должны быть аналитической чистоты (АР) и "ВЭЖХ", где это возможно.

4.1. Метанол.

4.2. Натриевая соль 1-гептансульфониловой кислоты, моногидрат.

4.3. Ледяная уксусная кислота, (г 20 = 1,05 г / мл).

4.4.Хлористый натрий.

Подвижные фазы:

4.5.1. Растворитель I: 0,005 М раствор натриевой соли 1-гептансульфониловой кислоты, моногидрата (4.2) в метаноле (4.1) довести до рН 3,5 ледяной уксусной кислотой (4.3).

4.5.2. Растворитель II: 0005 М раствор натриевой соли 1-гептансульфониловой кислоты, моногидрата (4,2) в воде, рН которого довести  до 3,5 ледяной уксусной кислотой (4.3).

Примечание. Если необходимо улучшить форму пиков, подвижные фазы могут быть изменены следующим образом:

-  растворитель I: растворить 5,84 г хлорида натрия (4.4) и 1,1013 г раствора натриевой соли 1-гептансульфониловой кислоты, моногидрата (4.2) в 100 мл воды. Добавить 900 мл метанола (4.1) и довести  до рН 3,5 ледяной уксусной кислотой (4.3);

- растворитель II: растворить 5,84 г хлорида натрия (4.4) и 1,1013 г раствора натриевой соли 1-гептансульфониловой кислоты, моногидрата (4.2) в 1 л воды и довести до рН 3,5 ледяной уксусной кислотой (4.3).

4.6. Гексамидина диизетионат [C20H26N4O2 ;2C2Н6О4S]

4.7. Дибромгексамидина диизетионат [C20H24Br2Н4О2 ;.2C2Н6О4S]

4.8. Дибромпропамидина диизетионат [C17H18Br2Н4О2 ;.2C2Н6О4S]

4.9. Хлоргексидина диацетат [C22H30Cl2N10 ;.2C2Н4О2]

4:10. Стандартные растворы: приготовить 0,05% (m / v) растворы каждого из четырех консервантов (4.6 – 4.9) в растворителе I (4.5.1).

4:11.3,4,4'-трихлоркарбанилид (триклокарбан).

4:12.4,4-дихлор-3- (трифторметил) карбанилид (халокарбан).

5. ОБОРУДОВАНИЕ

5.1. Стандартное лабораторное оборудование.

5.2. Высокоэффективный жидкостный хроматограф с УФ-детектором с переменной длиной волны

5.3. Аналитическая колонка: из нержавеющей стали, длина 30 см, внутренний диаметр 4 мм, наполненный х-Bondapack С18, 10µm или эквивалент.

5.4. Ультразвуковая баня

6. ОПРЕДЕЛЕНИЕ

6.1. Подготовка проб

Взвесить около 0,5 г пробы в мерной колбе на 10 мл и довести до метки растворителем (4.5.1). Колбу поместить в ультразвуковую баню (5.4) на 10 минут. Раствор профильтровать или центрифугировать. Фильтрат или центрифугат использовать для хроматографии.

6.2. Хроматография

6.2.1. Градиент подвижной фазы

Время (мин)	РастворительI (% v / v) (4.5.1)	Растворитель II (% v / v) (раздел 4.5.2)
0	50	50
15	65	35
30	65	35
45	50	50

6.2.2. Урегулировать расход подвижной фазы (6.2.1) до 1,5 мл / мин и температуру колонки до 35°С.

6.2.3. Зафиксировать длину волны детектора на 264 nm.

6.2.4. Впрыснуть по 10 µl каждого стандартного раствора (4.10) и записать их хроматограммы.

6.2.5. Впрыснуть 10 µl раствора пробы (6.1) и записать его хроматограмму.

6.3. Определить присутствие гексамидина, дибромгексамидина, дибромпропамидина или хлоргексидина, сравнивая время удержания пиков, зарегистрированных в пункте 6.2.5 настоящей главы, с результатами, полученными от эталонных растворов, указанных в пункте 6.2.4. настоящей главы.

7. ОПРЕДЕЛЕНИЕ

7.1. Определение

Подготовка стандартных растворов.

Использовать один из консервантов (4.6 – 4.9), который отсутствует в пробе в качестве внутреннего стандарта. При отсутствии такого целесообразно использовать трихлоркарбан (4.11) или халокарбан (4.12).

7.1.1. Исходный раствор консерванта в растворителе I (4.5.1) 0,05% (m / v), определеный пунктом 6.3 настоящей главы.

7.1.2. Исходный раствор консерванта, 0,05% (m / v), выбран в качестве внутреннего стандарта в растворителе I (4.5.1).

7.1.3. Для каждого идентифицированного консерванта, приготовить четыре стандартных раствора путем переноса в набор мерных колб на 10 мл количеств исходного раствора идентифицированного консерванта (7.1.1) и соответствующих количеств исходного раствора внутреннего стандарта (7.1.2 ) в соответствии с приведенной ниже таблицей. Каждую колбу довести до метки растворителем (4.5.1) и перемешать.

Стандартный раствор	Внутренний стандартный раствор	Исходный раствор идентифицированного консерванта
мл (7.1.2) добавлено	мл (7.1.1) добавлено	(г / мл) (4)
I	1,0	0,5	25
II	1,0	1,0	50
III	1,0	1,5	75
IV	1,0	2,0	100

7.2. Подготовка проб

7.2.1. Взвесить приблизительно 0,5 г (грамм) пробы в мерной колбе на 10 мл, добавить 1,0 мл раствора внутреннего стандарта (7.1.2) и 6 мл растворителя I (4.5.1) и перемешать.

7.2.2. Колбу поместить в ультразвуковую баню (5.4) на 10 минут и охладить. Довести до метки растворителем I и перемешать. Центрифугировать или профильтровать через складчатый бумажный фильтр. Собрать центрифугат или фильтрат для хроматографии.

7.3. Хроматография

7.3.1. Градиент подвижной фазы, скорость потока, температура колонки и длина волны детектора для ВЭЖХ (5.2) регулируются в соответствии с требованиями в стадии идентификации (6.2.1-6.2.3).

7.3.2. Впрыснуть 10 µl раствора пробы (7.2.2) и измерить пиковые области. Повторить процесс с впрыскиванием 10 µl раствора пробы до получения устойчивых результатов. Рассчитать отношение площади пика, полученного в анализируемой пробе, к площади пика внутреннего стандарта.

7.4. Эталонирование

7.4.1. Впрыснуть по 10 µl из всех стандартных растворов (7.1.3) и измерить величину пиков.

7.4.2. Для каждого стандартного раствора (7.1.3) рассчитать соотношение площадей пиков гексамидина, дибромгексамидина, дибромпропамидина или хлоргексидина и площади пика внутреннего стандарта, построить эталонную кривую, применяя эти коэффициенты на оси ординат и соответствующие концентрации идентифицированного консерванта в стандартных растворах на оси абсцисс, в µg/ml

7.4.3. По эталонной кривой (7.4.2) определить концентрации идентифицированного консерванта, соответствующие отношению площади пиков, рассчитанных в пункте 7.3.2.

8. РАСЧЕТ

8.1.1. Содержание гексамидина, дибромгексамидина, дибромпропамидина или хлоргексидина в образце в % массы (m / m) рассчитать по следующей формуле:

%( m / m)=

где:

р - масса в граммах пробы для анализа (7.2.1) ;

с - концентрация консерванта в растворе пробы, полученная из эталонной кривой, в / мл;

МW1- молекулярная масса основной формы консерванта;

МW2 - молекулярная масса соответствующей соли (см. пункт 10).

9. ПОВТОРЯЕМОСТЬ(1)

При концентрации 0,1% (м/м) гексамидина, дибромгексамидина, дибромпропамидина или хлоргексидина, разность между двумя параллельными определениями одной и той же пробы не должна превышать 0,005%.

10. Таблица консервантов с соответствующими формулами и молекулярными массами:

Гексамидин	С20Н26N4O2	354.45
Гексамидина дизеционат	С20Н26N4O2 2C2H6O4S	606,72
Гексамидин ди-p-гидроксибензоат	С20Н26N4O2 2C7Н6О3	630,71
Дибромгексамидин	С20Н24Br2Н4О2	512,24
Дибромгексамидина дизеционат	С20Н24Br2Н4О2 2C2H6O4S	764,51
Дибромпропамидин	С17Н18Br2Н4О2	470,18
Дибромпропамидина дизеционат	С17Н18Br2Н4О2 2C2H6O4S	722,43
Хлоргексидин	С22Н30Cl2N10	505,45
Хлоргексидина диацетат	С22Н30Cl2N10 2C2H4O2	625,56
Хлоргексидина  диглюконат	С22Н30Cl2N10 2C6H12O7	897,76
Хлоргексидина дигидрохлорид	С22Н30Cl2N10 2HCl	578,37