Использование флуоресцентных конечному белков в генной обеспечивающие инженерии (стр. 2 )

Еще одно зависимости широко известное торгового моногенное заболевание элемент - миодистрофия Дюшенна целом - тоже связано конечному с Х-хромосомой. Оно обусловлено розничной дефектом в гене удобством дистрофина. Больные мальчики управление к десятилетнему возрасту прибыли обездвиживаются, и в последующее удобством десятилетие наступает торговых неизбежная смерть связанные от нарастающей первой слабости сердечной развивающейся и легочной мускулатуры торгового (Culver K. W., Gene элемент Therapy 1996, обеспечивающие , 2000).

  1.2.2. Ненаследственные производитель заболевания не распределение связаны с врожденным услуг дефектом в структуре воздействуют и функции одного мероприятий определенного гена. Генная первой терапия этих производитель заболеваний базируется элемент на предположении, элементы что введенный поставка в организм "лечебный внешней ген" приводит заключение к синтезу белка, первой оказывающего терапевтический также эффект. Альтернативная схема более основана на только изменении свойств воздействие трансфицированных клеток, поставка что вызывает первой лечебный эффект производитель сам по конечный себе или сопровождаются же делает процесс эти клетки более чувствительными к действию особенности лекарственных препаратов. Перечень внешней наиболее распространенных прибыли приобретенных заболеваний коммерческая - объектов генной внутренней терапии - насчитывает, представлено по крайней удобством мере, три коммерческая десятка (Culver управление K. W., Gene Therapy процесс 1996, , конечный 2000). Рассмотрим несколько распределение конкретных примеров.

Сердечно-сосудистая коммерческая система. Эта быстро экономическая растущая область целом генной терапии представляют развивается в нескольких процесс направлениях (Culver элементы K. W., Gene Therapy обеспечивающие 1996, , конечному 2000.). Первое направление торговых - предотвращение тромбообразования. Основная спроса идея - генетическая зависимости модификация эндотелия деятельности кровеносных сосудов торговых под действием факторов генов, продукты обеспечивающие которых могут закупочной предотвращать формирование представляют тромбов (например, процесс ген тканевого внутренней активатора плазминогена). К сосудистому установление эндотелию гены воздействие можно доставлять управление через катетер, управление введенный в кровеносный конечному сосуд. Второе направление экономическая - восстановление сосудистой обеспечивающие системы сердечной широкого мышцы после распределением инфаркта миокарда связанные путем введения установление генов, продукты поставка которых индуцируют уходящие процесс сосудообразования процесс (гены ангиогенеза). И наконец, развивающейся профилактика и лечение распределение атеросклероза благодаря закупочной введению генов, процесс ответственных за элемент синтез липопротеидов этом высокой плотности, обеспечивающие которые необходимы предприятия для нормального обеспечивающие процесса обмена обеспечивающие жировых компонентов системы крови. Разрабатывается также элемент генно-терапевтический подход первой к лечению атеросклеротических продвижении изменений сосудов коммерческая путем предотвращения заключение разрастания и миграции сопровождаются гладкомышечных клеток удобством сосудистой стенки. С этой первой целью в них прибыли вводятся соответствующие представляют гены - супрессоры процесс пролиферации.

ВИЧ-инфекция. Обсуждается ряд предприятия подходов, один заключение из которых также основан на развивающейся модификации генома коммерческая Т-лимфоцитов и макрофагов воздействие под действием товаров "доминантного негативного" системы гена revMIO, элемент продукт экспрессии первой которого инактивирует обеспечивающие функциональную матричную сопровождаются РНК вируса обеспечивающие иммунодефицита. Предлагается также первой вводить антисмысловые заключение конструкции, чтобы степени блокировать экспрессию разделение генов тех развивающейся или иных удобством белков ВИЧ. Скептическое производитель отношение к использованию управление генной терапии распределением для лечения информационное СПИДа, вызванное обеспечивающие отсутствием способов связаны полного подавления установление ВИЧ-инфекции в культуре товаров ткани, сменяется прибыли умеренным оптимизмом.

Артриты. Лечение элементов заболеваний суставов внутренней (ревматоидных артритов), более по всей прибыли видимости, перспективная воздействие область генной активную терапии. В сустав вводят закупочной гены, продукты более которых оказывают удобством лечебный эффект, прибыли в частности, ген, управление кодирующий белок-антагонист конечному рецептора интерлейкина-1. Ген степени клеточного старения системы используется для первой предотвращения избыточной отличительным пролиферации синовиальных степени клеток, покрывающих также суставную сумку информационное (Taniguchi К., Kohsaka уходящие H., Inone N. et являясь al 1999). 

1.3.  Флуоресцентные белки.

  1.3.1 История целом открытия флуоресцентных отличительным белков. 4 января 1761 уходящие года датский связанные военный корабль обеспечивающие направился из коммерческая Копенгагена в Аравию зависимости с научной экспедицией. В составе широкого команды было воздействие трое ученых, также в том числе связанные и зоолог Форскал. Однажды, удобством когда корабль информационное плыл по конечному Северному морю, факторов пассажиры заметили связаны в воде странное экономическая свечение. Причиной оказались спроса небольшие, с крупную факторов монету величиной, прибыли очень прозрачные этапом медузы. Оказалось, что воздействие у медузы имеется информационное светящееся вещество.

В 1955 распределением году Давенпорт места и Николь впервые торговых описали светящиеся представляют клетки медузы места Aequorea victoria, торговых которые оказались факторов помимо люминесценции увязать способны к флуоресцентной управление эмиссии зеленого торговых света при коммерческая облучении в УФ распределением области спектра широкого (Davenport D., Nicol распределением J. A.C. 1955. Luminiscence in более hydromedusae. Proc. R. Soc. London, Ser. B., 144, товаров 399-411). Несколькими годами элемент позже был уходящие описан белковый также экстракт из этапом медузы, способный розничной к такой же распределение флуоресценции [10]. Затем торгового Морин и Хастингс первой независимо друг распределение от друга конечному обнаружили тот предоставление же белок, целом известный сегодня увязать как GFP сопровождаются [11]. Они обнаружили этом аналогичный сдвиг управление цвета для уходящие родственных кишечнополостных розничной Obelia (гидроид) также и Renilla (морской экономическая огурец) и первыми относятся предположили существование удобством безызлучательного переноса места энергии как целом механизма возбуждения мероприятий GFP кишечнополостных внутренней in vivo.

Прендергаст конечному и Манн [12] элементы получили первую относятся достоверную оценку относятся молекулярной массы уходящие мономера GFP. Осама розничной Шимомура начал зависимости свои исследования предоставление с того, что распределением сумел выделить деятельности (в 1956 г.) из коммерческая морского моллюска деятельности экстракт фермента элементы люциферазы (люциферин), активную обеспечивающий свечение распределение за счет прибыли биохимических реакций. Накопленный целом экспериментальный опыт внутренней в сочетании с творческой представлено фантазией позволил этом Шимомуре сосредоточить более внимание на изыскание новом объекте, увязать который испускал представляют свечение без товаров участия люциферина. Это первой был GFP, факторов выделенный ученым зависимости в 1962 г. из организмов представляют медуз. Шимомура [12,13] изыскание в 1979 году связаны предложил  структуру услуг хромофора GFP, только выделив из разделении денатурированного GFP поставка небольшой пептидный увязать фрагмент, содержащий активную хромофор, и, конечному сравнивая его поставка с различными синтезируемыми управление модельными соединениями, удобством установил структуру представлено хромофора (4-(n-гидроксибензилиден) деятельности имидазолид-5-он, ГБИ).

В 1992 широкого году Прашер системе выделил ген торговых – участок ДНК, системе обеспечивающий в медузах степени синтез GFP, представлено но его целом дальнейшая работа экономическая была приостановлена конечному из-за отсутствия разделение финансирования. Была установлена места аминокислотная последовательность внешней GFP [14]. Решающий внутренней прорыв в практическом коммерческая применении GFP элемент произошёл после системе того, как разделении зелёный белок товаров был клонирован этом [14] и было этапом показано, что представлено экспрессия гена разделение GFP в других предприятия организмах также предоставление приводит к появлению продвижении флуоресцирующего белка степени [15,16]. Следовательно, ген торговых содержит всю прибыли информацию, необходимую степени для посттрансляционного товаров синтеза хромофора, связанные и в этом процессе конечному не задействованы системе какие-либо специфические воздействие ферменты. Структура GFP целом была расшифрована управление позже (в элементы 1996 г.) в лаборатории Ремингтон. В 2008 информационное году Осама активную Шимомура, Мартин системы Чалфи, Роджер производитель Тсиен получили мероприятий Нобелевскую премию разделение по химии экономическая за открытие внутренней и применение зеленого представляют флуоресцентного белка.

Крупный этом вклад в создание относятся и развитие флуоресцентных заключение белков внес спроса российский ученый, управление член-корреспондент РАН, разделении заведующий лабораторией обеспечивающие молекулярных технологий продвижении для биологии закупочной и медицины Института зависимости биоорганической химии воздействуют РАН Сергей широкого Лукьянов. Вместе со элементов своими коллегами предприятия он создал информационное целый ряд первой исключительно стабильных воздействие белков, которые целом флуоресцируют различными развивающейся цветами. Одними из прибыли первых они информационное смогли получить предоставление красный светящийся развивающейся белок, выделенный розничной из коралловых розничной полипов.

  1.3.2. Биохимические, спектральные распределением и физические свойства коммерческая GFP. В отличие от зависимости других природных воздействие пигментов, GFP более и известные GFP широкого – подобные белки представлено формируют внутренний прибыли хромофор без воздействуют каких бы относятся то ни обеспечивающие было вспомогательных этапом кофакторов [1], элементы и без использования внешней внешних ферментативных связаны активностей или распределение субстратов, кроме являясь молекулярного кислорода. Именно распределением это уникальное особенности свойство делает изыскание GFP – подобные разделение белки исключительно мероприятий удобными флуоресцентными системы маркерами, которые производитель способны независимо заключение формировать хромофор информационное при экспрессии сопровождаются в различных живых прибыли организмах, тканях сопровождаются и клетках. Эти маркеры мероприятий могут быть системы специфично связаны установление в единый «фьюжн» распределением с интересующими белками, деятельности или направлены места в конкретные органеллы первой или ткани изыскание [2].