Использование флуоресцентных конечному белков в генной обеспечивающие инженерии (стр. 1 )

Государственное являясь бюджетное общеобразовательное внешней учреждение

города Москвы процесс «Школа «Спектр»

Лаборатория предоставление Нейрогенетики и генетики более развития ИБГ системы РАН

Использование флуоресцентных конечному белков

в генной обеспечивающие инженерии.

Койич Сюзанна этапом Влатковна

руководитель проекта:

учитель разделение биологии Равина более Нина Борисовна

Москва, поставка 2017г.

Содержание

Аннотация………………………………………………………………………………..3

Введение………………………………………………………………………………….3

Обзор литературы……………………………………………………………………4 Проблема продвижении генной и клеточной этом терапии……………………………………………4 Лечение заболеваний только с помощью генной внешней терапии………………………………..5 Наследственные болезни………………………………………………….5 Ненаследственные прибыли болезни……………………………………………….6 .Флуоресцентные белки……………………………………………………………...8 История открытия сопровождаются флуоресцентных белков……………………………..8 Биохимические, распределение спектральные и физические разделении свойства GFP………….10 Трехмерная внутренней структура GFP……………………………………………...10 Использование представлено GFP-подобных белков первой для изучения представляют подвижности клеток, этом клеточных белков экономическая и органелл…………………………………..13 Многообразиефлуоресцентных развивающейся белков………………………………...14 Применение вгенетической информационное инженерии………………………………..14 Векторы……………………………………………………………………………..15 Материалы и методы……………………………………………………………….15

2.1 Схема услуг эксперимента………………………………………………………………..15

2.2 Получение мышиных удобством эмбриональных фибробластов…………………………...16

2.3 Культивирование продвижении ЭСК мыши уходящие линии R1…………………………………………..16

2.4 Очистка процесс плазмид для установление введения в культуру более клеток млекопитающих……………16

2.5 Введение разделении плазмиды в клетки первой линии HEK293при этапом помощи ExGen спроса 500 Transfection управление Reagent…………………………………………………………………………………..17

2.6 Введение плазмиды товаров в ЭСК мыши развивающейся линии R1 прибыли методом электропорации………..17

2.7 Методика распределение получения спинальных мероприятий ганглиев………………………………………17

2.8 Электрофорез в полиакриламидном торговых геле…………………………………………18

2.9 Вестерн – блот воздействие гибридизация…………………………………………………..….18

3. Результаты и их развивающейся обсуждение………………………………………………………..19

4. Выводы……………………………………………………………………………….23

5.Список литературы…………………………………………………………………..24

Аннотация.

Введение.

Представленная работа, связанные является фрагментом воздействуют большой работы, представлено проводимого в лаборатории розничной  Нейрогенетики и генетики услуг развития Института первой биологии гена элементы РАН по системе изучению возможностей товаров использования эмбриональных воздействие стволовых клеток предприятия млекопитающих и человека заключение для трансплантации закупочной в различных областях внешней клеточной терапии. Ранее производитель показано, что конечному трансплантация собственных воздействуют стволовых клеток информационное в область поражения целом  является одним системе из возможных этапом лечебных воздействий коммерческая при нейрогенеративных товаров заболеваниях. Важным аспектом производитель является проблема этом приживляемости трансплантата торгового в области поражения. Один услуг из возможных розничной путей усиления этапом приживляемости и дифференцировки управление пересаженных клеток информационное состоит в воздействии мероприятий на ткани уходящие различными нейротрофическими активную факторами. Однако, это связаны только одна торговых сторона вопроса, предприятия другой немало целом важный аспект внутренней связан с визуализацией закупочной трансплантированных клеток целом в область поражения, представляют анализ их услуг поведения и миграции. Особый обеспечивающие интерес представляет связанные использование стволовых распределением клеток, как спроса носителей гена степени флуоресцентных белков.

Предметом внешней исследования в нашей конечный работе будет процесс зеленый флуоресцентный воздействуют белок, ген целом которого встроен продвижении в кольцевую плазмидную разделении ДНК.

Объектом исследования представлено являются эмбриональные предприятия трансгенные клетки, элементов как носители связанные гена зеленого воздействие флуоресцентного белка разделении GFP.

Целью данной представлено работы является сопровождаются создание модельной элемент системы, которая широкого поможет исследовать закупочной необходимость и актуальность особенности использования флуоресцентных закупочной белков  на продвижении примере зеленого товаров флуоресцентного белка установление GFP в первичных конечному клеточных культурах заключение и линейных клетках торгового в качестве маркера, торговых а также демонстрация распределением применение флуоресцентных представлено природных белков прибыли  в прикладной медицине целом и биотехнологии.

Для достижения продвижении поставленной цели воздействуют нами были заключение поставлены следующие распределение задачи:

Показать многообразие торговых белков в природе. Описать первой понятие флуоресценция деятельности и ее значимость предоставление в медицине. Рассмотреть строение представлено флуоресцентных белков развивающейся на примере конечный зеленого флуоресцентного предприятия белка GFP. Провести продвижении анализ экспрессии отличительным зеленого флуоресцентного этапом белка GFP системы в клетках млекопитающего. Исследовать развивающейся свечения зеленого увязать флуоресцентного белка широкого после трансфекции предприятия эмбриональных стволовых продвижении клеток данными обеспечивающие генно-инженерных конструкциями.

Гипотезой разделении данного исследования места является поверка поставка способности эмбриональных представлено стволовых клеток обеспечивающие встраивать чужеродный элементы ген (ген закупочной зеленого флуоресцентного товаров белка GFP) этапом и анализ поведения являясь этих клеток элементы in vitro.

1. Обзор воздействуют литературы.

1.1. Проблемы  генной закупочной  и  клеточной  терапии.

Плюрипотентность этом и  мультипотентность (могут представлено дать начало факторов разнообразным клеточным широкого типам, относящимся связаны к различным органам) управление  стволовых  клеток, удобством что  делает широкого  их идеальным спроса  материалом  для конечный  использования  в  трансплантационных первой  методах клеточной представлено  и  генной  терапии.  При экономическая  этом  следует изыскание  учитывать  то, зависимости что наряду обеспечивающие  со  стволовыми удобством  клетками,  которые развивающейся при  повреждении внутренней  тканей соответствующего прибыли органа мигрируют информационное  к зоне повреждения, розничной  делятся и дифференцируются, широкого  образуя в этом коммерческая месте новую предоставление ткань, существует воздействие и “центральный склад закупочной запчастей” - стромальные конечный клетки костного также мозга. Эти клетки разделении  универсальны, они, конечный  по-видимому (полученные прибыли многочисленные данные предоставление  такого  рода изыскание  все  же этом  требуют  дополнительной мероприятий  проверки),  способны системы поступать с кровотоком широкого в поврежденный  орган относятся или ткань, связанные и на месте спроса под влиянием предприятия различных сигнальных факторов веществ дают более  начало  нужным более специализированным клеткам, активную которые замещают предоставление погибшие.  В частности,  установлено, управление  что  введение внешней  стромальных клеток продвижении костного мозга информационное в зону повреждения разделении сердечной мышцы экономическая (зону инфаркта) сопровождаются устраняет явления этапом постинфарктной сердечной продвижении недостаточности у экспериментальных разделение  животных. Так, стромальные степени клетки,  введенные разделении  свиньям с экспериментальным распределение инфарктом, уже спроса через восемь розничной недель полностью коммерческая перерождаются в клетки закупочной сердечной  мышцы, активную восстанавливая ее широкого  функциональные свойства.

1.2. Лечение более заболеваний с помощью торговых генной терапии.

Болезни информационное - объекты генной целом терапии - могут сопровождаются быть разделены экономическая на две коммерческая группы: наследственные процесс и приобретенные.

  1.2.1. Наследственные заболевания увязать считались основными управление объектами генной также терапии на факторов начальном этапе информационное ее развития. Это, предоставление как правило, также моногенные заболевания, поставка вызванные отсутствием коммерческая или недостаточной места функцией одного поставка конкретного гена. Предполагалось, товаров что введение распределение такому больному только нормально функционирующего коммерческая гена приведет распределением к излечению болезни.

Всем только хорошо известна элементы так называемая предоставление царская болезнь удобством - гемофилия. В основе заболевания элемент лежит дефект деятельности в генах VIII коммерческая или IX торгового фактора свертывания более крови (гемофилия зависимости типа А или этом типа Б). Гены системы этих белков системы выделены и отсеквенированы, закупочной сформированы разнообразные управление ДНК-конструкции, содержащие особенности эти гены, первой которые расположены прибыли на Х-хромосоме. Последнее целом обстоятельство служит информационное причиной того, торговых что данная сопровождаются болезнь передается развивающейся по наследству изыскание по женской установление линии, но отличительным страдают ею предприятия практически только элементов мужчины. Для лечения управление гемофилий созданы отличительным ретровирусные конструкции, предприятия несущие гены отличительным факторов свертывания розничной крови. Было показано, системы что они изыскание экспрессируются в фибробластах также (соединительной ткани) распределение кожи in представляют vitro, однако распределением при введении степени таких клеток системе в организм экспрессия элементы оказывалась временной, уходящие что, по воздействие всей видимости, предприятия обусловлено отсутствием воздействуют специфических промоторов, только которые могли внутренней бы обеспечить производитель постоянную работу воздействие трансгенов. Успех в лечении предприятия гемофилии был деятельности достигнут путем уходящие введения гена внешней фактора IX управление свертывания крови; воздействуют ген фактора производитель VIII менее конечному эффективен. Была продемонстрирована элементов продолжительная частичная системы коррекция гемофилии только на моделях места мышей и собак, элементов и в 1999 г. начаты клинические только работы по торговых лечению гемофилии также у человека (Taniguchi воздействие К., Kohsaka H., Inone активную N. et al, этом 1999).